茯苓水提物UPLC指纹图谱的建立及其镇静催眠作用的谱效关系研究

目的:建立茯苓水提物的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并考察其与镇静催眠作用的谱效关系。方法:将10批不同产地茯苓经水提后得水提物。采用UPLC法测定该水提物,色谱柱为Waters HSS-C18,流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈-甲醇(梯度洗脱),流速为0.4~0.2 mL/min,检测波长为210、242 nm,柱温为40℃,进样量为2μL。采用《中药指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立10批茯苓水提物的指纹图谱并进行共有峰指认。以小鼠的入睡率、入睡潜伏期和睡眠持续时间为单一药效指标,考察戊巴比妥钠协同作用下10批不同产地茯苓水提物的镇静催眠作用;将单一药效指标和总药效(由单一指标经层次分析法计算而得)进行数据转化后,采用灰色关联度分析法分析茯苓水提物指纹图谱中各共有峰与单一药效及总药效的关联度。结果:10批茯苓水提物共有24个共有峰,指认出11个成分,分别为16-羟基松苓新酸(6号峰)、16α-hydroxytrametendic acid(7号峰)、茯苓酸B(9号峰)、去氢土莫酸(10号峰)、茯苓酸A(12号峰)、猪苓酸C(15号峰)、3-O-乙酰基-16α-羟基松苓新酸(17号峰)、去氢茯苓酸(20号峰)、茯苓酸(21号峰)、松苓新酸(22号峰)、脱氢齿孔酸(24号峰)。经灰色关联度分析发现,24个峰与睡眠持续时间的关联度均大于0.6(0.6115~0.8118),与入睡潜伏期的关联度除14、24、2号峰外,其余均大于0.6(0.6059~0.7904);与入睡率的关联度除23、19、17、5号峰外,其余均大于0.6(0.6064~0.7216);与总药效的关联度除2、5、19号峰外,其余均大于0.6(0.6190~0.7812);与总药效关联度排名前10位的色谱峰分别为15号峰(猪苓酸C)、16号峰、8号峰、11号峰、12号峰(茯苓酸A)、1号峰、7号峰(16α-hydroxytrametendic acid)、3号峰、9号峰(茯苓酸B)、20号峰(去氢茯苓酸)。结论:本研究建立了茯苓水提物的UPLC指纹图谱,指认了11个共有峰成分;猪苓酸C等10种成分与镇静催眠总药效关联较大,初步揭示了茯苓镇静催眠作用的药效物质基础。     

黄芪多糖对气虚大鼠的补气作用及其机制探讨

目的探讨黄芪多糖及分级醇沉多糖对气虚大鼠的补气作用及机制。方法将88 只Wistar 大鼠随机分 为11 组,分别为正常组,模型组,阳性药组,黄芪多糖（APS）高、低剂量组,10%乙醇沉淀多糖（APSM1） 高、低剂量组,40%乙醇沉淀多糖（APSM2）高、低剂量组和80%乙醇沉淀多糖（APSM3）高、低剂量组。除正常 组外,其余各组大鼠采用“饮食不节+负重游泳”建立气虚模型,给药组分别灌胃给予黄芪各多糖,正常组和 模型组灌胃给予等量蒸馏水。3 周后处死大鼠,记录大鼠体质量、游泳时间,计算胸腺指数、脾脏指数,检测 大鼠血清白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素12（IL-12）、丙二醛（MDA）、超氧化物 歧化酶（SOD）、乳酸、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、白蛋白（ALB）、肝脏三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺 苷（ADP）等指标,评价黄芪多糖及不同乙醇沉淀多糖对气虚大鼠的补气作用。结果与模型组比较,黄芪多糖 及分级醇沉多糖均可以明显降低MDA、TNF-α 和乳酸含量（P＜0.05,P＜0.01）,明显提高游泳时间（P＜ 0.01）;黄芪多糖、10%乙醇沉淀多糖、80%乙醇沉淀多糖可明显升高ALB、ATP 及ADP 含量（P＜0.05,P＜ 0.01）;黄芪多糖、40%乙醇沉淀多糖、80%乙醇沉淀多糖可以明显升高IL-2 含量（P＜0.01）;黄芪多糖、10% 乙醇沉淀多糖、40%乙醇沉淀多糖能明显降低大鼠CK 活力（P＜0.05,P＜0.01）;40%乙醇沉淀多糖低剂量组 还可明显升高IL-12 水平（P＜0.05）。结论黄芪多糖可通过降低机体血乳酸的积累,降低CK 活力,降低大 鼠体内脂质过氧化物水平,提升机体免疫力,起到补气、延缓疲劳发生、提高运动能力的作用;分级醇沉多糖 作用靶点存在一定差异。     

茯苓水提物对肾阳虚下焦水肿大鼠肾功能的影响

目的:探究茯苓水提物对肾阳虚下焦水肿大鼠肾功能的影响.方法:将雄性SD大鼠随机分为空白组(n=8)和造模组(n=96),采用氢化可的松联合盐酸多柔比星复制肾阳虚下焦水肿大鼠模型,连续14 d.将造模成功的大鼠再随机分为模型组、金匮肾气丸组(阳性对照药,2.1 g·kg-1)和10批不同产地茯苓水提物组(7.5 g·kg...     

不同产地茯苓对肾阳虚下焦水肿大鼠的利水渗湿作用研究

目的探讨不同产地茯苓对肾阳虚下焦水肿大鼠的利水渗湿作用。方法采用盐酸多柔比星与氢化可 的松联合注射的方法建立肾阳虚下焦水肿大鼠模型。将96 只造模成功大鼠随机分为模型组、阳性药组（金匮 肾气丸,2.1 g·kg-1）、10 批次不同产地茯苓水煎液组（S1~S10,7.5 g·kg-1）,另取8 只正常大鼠作为正常组,连 续灌胃给药21 d。观察记录大鼠的证候学表现及体质量变化;采用代谢笼测定大鼠24 h 尿量;采用生化试剂 盒测定24 h 尿蛋白（UP）及血清白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）水平;采用ELISA 法测定血清中抗利尿激素（ADH） 水平及肾髓质中水通道蛋白1（AQP1）、水通道蛋白2（AQP2）水平;采用层次分析法确定各单一指标对总药效 的权重,以总药效对不同产地茯苓进行聚类分析。结果与正常组比较,模型组大鼠的体质量、24 h 尿量、 血清白蛋白及总蛋白水平明显降低,24 h 尿蛋白、ADH 及AQP1、AQP2 水平明显升高,差异均有统计学意义 （P＜0.05,P＜0.01）。与模型组比较,10 批次不同产地茯苓可明显上调大鼠体质量（S1、S2、S4~S10）、24 h 尿量（S1~S10）、血清白蛋白（S1、S2、S4~S10）、总蛋白（S1、S4~S6、S8、S9）水平,明显下调24 h 尿蛋白 （S1~S10）、ADH（S1~S10）、AQP1（S1~S10）、AQP2（S1~S9）水平,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。 聚类分析结果显示,10 批次不同产地茯苓被聚为3 大类,S2、S4 为一类,S3、S6、S7 和S8 为一类,S1、 S5、S9、S10 为一类。总药效的强弱排序为：阳性药（金匮肾气丸）＞湖北罗田（S2）、云南楚雄（S4）＞湖北恩施 （S3）、福建南平（S6）、河南商城（S7）、湖南怀化（S8）＞湖北英山（S1）、云南大理（S5）、安徽岳西（S9）、云南 丽江（S10）。结论不同产地茯苓对肾阳虚下焦水肿大鼠均可产生利水渗湿作用,可能与其调节AQP1 及 ADH-AQP2 相关通路有关,且其作用强弱存在产地差异。     

指纹图谱及多成分定量结合化学模式识别法评价不同产地青钱柳质量

目的基于UPLC指纹图谱、多成分定量与化学模式识别相结合的方法,评价不同产地青钱柳质量,为其进一步开发利用提供依据。方法建立5个省20批不同产地青钱柳UPLC指纹图谱,确定共有峰,通过对照品比对指认3种化学成分并测定样品中含量;使用SPSS22.2、SIMCA软件进行聚类分析和主成分分析。结果选取了16个色谱峰作为指纹图谱的共有峰,通过聚类分析可将20批青钱柳分为6类,主成分分析与聚类分析结果基本一致;经主成分分析,5个主成分因子的累积方差贡献率为86.765%,通过主成分分析推测出产于湖北恩施的S14、S15药材样品的质量最好,产于江西修水的S4、S5、S8、S16次之;被指认的异槲皮苷、槲皮苷、阿福豆苷在20批样品中的质量分数分别为0.360%~0.884%、0.263%~1.097%、0.092%~0.403%,其中,S4、S8、S14、S15的主成分分析综合得分及3个成分含量总和均处在前4位,而S18、S20则均处在倒数前2位。结论指纹图谱、结合聚类分析及主成分分析可以更全面地评价青钱柳质量,异槲皮苷、槲皮苷、阿福豆苷可以作为青钱柳质量控制的指标性成分。