人窦前小卵泡异种移植后卵泡生长及再血管化的评估

目的评价人卵巢组织经酶消化后分离的窦前小卵泡异种移植到SCID小鼠后的卵泡生长和再血管化情况。方法采用0.04 mg/ml Liberase酶消化卵巢组织,将卵泡吸出,尽可能将全部间质去除,异种移植到卵巢囊,通过病理组织学检查移植物切片中的卵泡分级和形态,用CD34双重免疫组化染色了解移植物中再血管化的情况。结果移植后1、3及22周移植物中均可见到原始卵泡、中间型卵泡、初级卵泡和次级卵泡。移植后1周的移植物中,已经可以见到来源于小鼠和人的微血管,至移植后3周,微血管丰富,向移植物中心生长,在经过促卵泡生成素刺激后的22周,次级卵泡及小窦卵泡周围围绕丰富的毛细血管网。结论人卵巢组织酶解后的窦前小卵泡移植到裸鼠后,经过移植后1、3及22周不同时间段的观察,卵泡能够存活,并且发育到窦卵泡阶段。     

CD147在不明原因自然流产患者绒毛组织的表达

目的:分析CD147在不明原因自然流产患者绒毛组织中的表达水平,并探讨其生物学功能。方法:收集人早孕期正常和不明原因自然流产妇女的绒毛组织,采用免疫组织化学、RT-PCR和Western blotting法检测CD147的表达,比较CD147在正常早孕与不明原因自然流产妇女绒毛组织的表达差异。体外分离纯化获得正常人早孕期滋养细胞,采用免疫细胞化学验证CD147在滋养细胞的表达,引入抗CD147中和性抗体处理人滋养细胞,采用Brd U增殖实验和Transwell侵袭实验分析滋养细胞增殖和侵袭能力的变化。结果:正常早孕期绒毛组织和滋养细胞高表达CD147,不明原因自然流产绒毛组织CD147的mRNA和蛋白表达水平均低于正常早孕期绒毛组织。抗CD147中和性抗体处理原代人滋养细胞后,滋养细胞的增殖能力未发生明显变化,侵袭能力下降。结论:人绒毛组织CD147的异常低表达可能与不明原因早期妊娠失败相关,CD147通过调控滋养细胞的侵袭能力参与正常妊娠的维持。     

环孢素A通过活化Src信号通路促进人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭

目的:探讨Src信号通路在环孢素A(cyclosporin A,CsA)促进人滋养细胞侵袭中的作用。方法:应用Transwell侵袭实验观察CsA对人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭能力的影响,应用Western blotting检测CsA作用于JEG-3细胞后Src的活化水平,并观察Src特异性抑制剂PP2对CsA作用后JEG-3细胞侵袭能力及E-钙粘蛋白表达水平的变化。结果:CsA可明显促进JEG-3细胞的侵袭(P<0.05),并可提高JEG-3细胞Src的活化水平(P<0.05),降低E-钙粘素蛋白的表达。PP2可明显抑制JEG-3细胞CsA诱导的Src活化(P<0.05),阻抑CsA对细胞侵袭的促进作用(P<0.05)和恢复CsA下调的E-钙粘蛋白表达水平(P<0.05)。结论:CsA可通过增强Src信号通路活化促进JEG-3细胞侵袭,并下调E-钙粘蛋白的表达,提示Src信号通路可能参与CsA对人滋养细胞生物学行为的良性调节作用。     

转移抑制基因nm23-H1及在母胎界面的表达

母胎界面的滋养细胞具有类似恶性肿瘤细胞的侵袭能力,但滋养细胞的侵袭受到严格控制.转移抑制基因nm23-H1广泛表达于多种肿瘤细胞,可有效抑制肿瘤细胞的侵袭与转移.nm23-H1亦在母胎界面表达,并可能对滋养细胞的增殖、侵袭、分化以及凋亡等生物学功能发挥重要的调节作用.进一步研究nm23-H1在母胎界面的生物学作用将有助于更加全面认识胚泡植人及滋养细胞侵袭调控,并且具有潜在的临床应用价值.     

CCR9/CCL25介导小鼠经生殖道hCGβ避孕疫苗粘膜免疫后B细胞归巢

目的：探讨hCGβ粘膜避孕疫苗体液免疫的分子机制。方法：分别用1010个重组乳酸杆菌Lb.pIlac、Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜途径免疫6～8周龄BALB/c小鼠,3周后相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测加强免疫后2周阴道灌洗液中抗hCGβIgG和IgA抗体滴度;ELISPOT检测分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞数;RT-PCR筛查小鼠子宫B细胞上18种趋化因子受体和相关趋化因子CCL25;FCM和ELISA分析CCR9/CCL25的表达。结果：经小鼠生殖道粘膜接种1010Lb.pIlac-hCGβ可在生殖道局部诱导产生抗hCGβIgG和IgA抗体,且以IgG抗体为主;局部存在抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞,而以IgG抗体分泌细胞为主;粘膜免疫后,小鼠生殖道局部B细胞上CCR9表达增高,粘膜局部相应配体CCL25表达亦增高。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜免疫可诱导有效的免疫应答;粘膜局部CCR9/CCL25可介导B细胞归巢至生殖道局部,这可能增强hCGβ粘膜避孕疫苗的避孕效果。     

转化生长因子-β在环孢素A诱导人早孕滋养细胞体外侵袭性生长中的调节作用

目的研究转化生长因子(TGF)-β1与TGF-β2在环孢素A(CsA)诱导滋养细胞活力、侵袭与迁移能力中的调节作用。方法收集人早孕期绒毛组织,原代分离滋养细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CsA处理后滋养细胞的TGF-β1和TGF-β2分泌水平。四唑盐(MTT)法测定滋养细胞存活和生长。Transwell侵袭与迁移试验检测滋养细胞侵袭与迁移能力。结果 CsA剂量依赖性地抑制人早孕期滋养细胞分泌TGF-β2,但不影响TGF-β1的分泌。外源性加入人重组的TGF-β1与TGF-β2抑制基础的和CsA诱导的滋养细胞侵袭、迁移、活力的增强作用;相反,加入TGF-β1或TGF-β2的中和性抗体,则进一步加强CsA诱导的滋养细胞侵袭、迁移与活力的增强作用。结论 CsA通过下调TGF-β2而不是TGF-β1促进人早孕期滋养细胞的体外侵袭性生长。     

环孢素A通过活化粘着斑激酶信号通路促进人滋养细胞的体外生长

目的:探讨粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)信号通路在环孢素A(cyclosporin A,CsA)调节人滋养细胞体外生长中的作用。方法:收集因非意愿妊娠6~9周要求行人工流产术的正常妊娠妇女的绒毛组织,体外分离培养获得滋养细胞,经CsA和/或FAK抑制剂Y15处理后,免疫荧光检测滋养细胞FAK的磷酸化水平;BrdU检测滋养细胞的增殖;Annexin V/PI检测滋养细胞的凋亡。结果:CsA可明显提高滋养细胞FAK的活化水平,FAK抑制剂Y15可阻断CsA诱导的FAK活化,阻抑CsA对细胞增殖的促进作用(P0.05)以及对滋养细胞凋亡的抑制作用(P0.05)。结论:CsA可通过活化FAK信号通路促进人早孕期滋养细胞的体外生长,从而有利于正常妊娠的维持。     

补肾活血方对免疫性卵巢早衰小鼠的影响

目的:探讨补肾活血方对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠的治疗作用。方法:以重组猪卵透明带(pZP4)蛋白两后脚掌和皮下多点注射免疫雌性BALB/c小鼠建立POF动物模型。小鼠随机分为正常组、模型组、雌二醇组和补肾活血方高、中、低剂量组(按生药量计分别为15.0,7.5,3.75 g.kg-1),分析ig 20 d后阴道脱落细胞涂片、外周血雌二醇(E2)浓度、血清抗透明带(pZP4)抗体变化及卵巢组织炎形态学观察。结果:补肾活血方高剂量组小鼠阴道涂片显示动情周期基本规则为6～7 d;高剂量组可明显升高小鼠血清E2浓度(P<0.01);高剂量组小鼠的血清抗pZP4抗体滴度显著下降(P<0.05);高剂量组小鼠初级卵泡和次级卵泡的数量显著增加(P<0.05)。结论:补肾活血方能改善卵巢的生殖内分泌功能和卵巢内各期卵泡和黄体的发育状况,并可在一定程度上抑制自身免疫早衰作用。     

环孢素A对滋养细胞生物学行为的良性调节作用

环孢素A（CsA）是一种强效免疫抑制剂,在临床上被广泛应用于防治器官移植后排斥反应和治疗某些自身免疫性疾病。体外研究发现,低浓度CsA既能促进滋养细胞增殖、减少滋养细胞凋亡,也能增强滋养细胞的迁移与侵袭。体内研究发现,低剂量CsA可明显降低自然流产模型小鼠的胚胎吸收率,改善妊娠结局。这些研究结果提示,低剂量CsA对滋养细胞的生物学行为具有良性调节作用,有可能成为防治自然流产、子痫前期等滋养细胞功能异常导致的妊娠相关疾病的一种新策略。     

抗hCG疫苗在肿瘤免疫治疗中的价值

人绒毛膜促性腺激素（hCG）是妊娠妇女合体滋养细胞合成并分泌的一种由α和β亚基组成的异源二聚体糖蛋白，因其化学结构、物理性质和生物活性基团基本清楚，近20多年来一直是避孕疫苗发展的首选靶标。目前对于抗hCG疫苗研究已经成熟，是迄今为止在人类唯一完成Ⅱ期临床试验并证明有效的避孕疫苗。最近研究发现，多种肿瘤细胞亦可表达分泌hCGα、hCGβ或同时表达这两个亚基；