我国部分地区立克次体血清学的调查研究

立克次体病系人畜共患的自然疫源性疾病,危害人畜的健康。各种立克次体病在我国分布较广泛,斑疹伤寒和Q热遍及全国。然而由于立克次体病的传播流行受其媒介、宿主、地理环境和社会条件等多因素的影响,造成防而不力治而不明的困难,从而使立克次体病有扩展趋势。一些立克次体病如Q热、恙虫病和斑疹伤寒往往被误诊为其它热型     

在多孔胶原支架上构建三维工程的心肌组织

背景目前已有转化的SV40细胞系、C2C12成肌细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞以及胚胎干细胞用于修复哺乳动物心脏的细胞移植治疗,然而细胞移植治疗对严重缺失或损伤心肌结构的治疗的作用却不大.组织工程技术为此类心肌疾病的研究及治疗提供了新的可能性,目前已有可替代和改善骨、软骨、肾、肝、神经及皮肤等组织和器官的生物合成结构物.目的探索多孔胶原作为构建三维工程心肌组织支架材料的可行性.设计非随机、对照的实验研究.地点和对象实验地点军事医学科学院生物工程研究所.动物清洁级1日龄Wistar大鼠400～500只,雌雄不限,体质量8～10 g;成年Wistar大鼠五六只,雌雄不限,体质量250 g,由军事医学科学院实验动物中心提供,饲养温度22～26℃,湿度40%～60%.干预在无菌条件下,将经胰蛋白酶消化获得的新生鼠心肌细胞分别接种于三维多孔胶原支架和培养板上,比较心肌细胞在两种培养模式的代谢差异.主要观察指标检测葡萄糖比消耗率、乳酸比产率、乳酸转化率、肌酸激酶及乳酸脱氢酶活力变化.结果培养于多孔胶原支架上的心肌细胞的代谢特性近似于心肌细胞在培养板上培养的二维生长模式.结论心肌细胞与多孔胶原支架形成了具有自律性同步收缩的三维工程心肌组织,多孔胶原作为心肌组织工程的支架材料有良好的应用前景.     

u-PA在细胞培养上清中的稳定性

尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u_PA)主要是由无酶催化活性的单链酶原 (scu_PA或pro_UK)和具有激活纤溶酶原 (plas minogen)活性的双链尿激酶 (tcu_PA或UK)组成。scu_PA只激活吸附在纤维蛋白表面的纤溶酶原 ,具有选择性溶栓作用[1] 。scu_PA由 411个氨基酸组成 ,可被体内纤溶酶或激肽释放酶催化在Lys15 8～Ile15 9之间的肽键水解断裂转换为双链尿激酶。我所已构建了表达水平为 5 μg/ (10 6细胞·d)的基因重组CHO工程细胞株用于生产u_PA[2 ] ,并已放大至30L培养规模 ,采用多孔微载体无血清连续培养工艺 ,培养上清中u_PA的最高浓度可达 …     

在多孔胶原支架上构建三维工程的心肌组织

背景：目前已有转化的SV40细胞系、C2C12成肌细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞以及胚胎干细胞用于修复哺乳动物心脏的细胞移植治疗，然而细胞移植治疗对严重缺失或损伤心肌结构的治疗的作用却不大。组织工程技术为此类心肌疾病的研究及治疗提供了新的可能性，目前已有可替代和改善骨、软骨、肾、肝、神经及皮肤等组织和器官的生物合成结构物。目的：探索多孔胶原作为构建三维工程心肌组织支架材料的可行性。设计：非随机、对照的实验研究。地点和对象：实验地点：军事医学科学院生物工程研究所。动物：清洁级1日龄Wistar大鼠400-500只，雌雄不限，体质量8～10g；成年Wistar大鼠五六只，雌雄不限，体质量250g，由军事医学科学院实验动物中心提供，饲养温度22～26℃，湿度40％～60％。干预：在无菌条件下，将经胰蛋白酶消化获得的新生鼠心肌细胞分别接种于三维多孔胶原支架和培养板上，比较心肌细胞在两种培养模式的代谢差异。主要观察指标：检测葡萄糖比消耗率、乳酸比产率、乳酸转化率、肌酸激酶及乳酸脱氢酶活力变化。结果：培养于多孔胶原支架上的心肌细胞的代谢特性近似于心肌细胞在培养板上培养的二维生长模式。结论：心肌细胞与多孔胶原支架形成了具有自律性同步收缩的三维工程心肌组织，多孔胶原作为心肌组织工程的支架材料有良好的应用前景。     

立克次体的纯化及其分析

本文用斑疹伤寒群和斑点热群立克次体鸡胚培养的感染卵黄囊膜在1MKCl溶液中制成10%～20%悬液,以差速离心沉淀和乙醚处理法提取纯化立克次体.该法纯化的立克次体涂片经Giemsa、H_(33258).荧光素及免疫酶标染色,在光镜下观察,立克次体形态完整,纯度较好.其斑疹伤寒群的普氏立克次体(E株)平均蛋白回收量为0.88mg/g膜,斑点热群的西伯利亚立克次体(Barbash株)和国内分离鉴定的斑点热立克次体精河株、斑点热立克次体黑龙江株及斑点热立克次体内蒙株的平均蛋白回收量为0.34～0.40mg/g膜.纯化的立克次体在核酸提取、DNA碱基成份的测定和全立克次体蛋白组成及抗原多肽构成的分析中取得了满意结果.     

抗鼠IgG和IgM免疫血清的制备研究

抗鼠IgG和IgM免疫血清是实验诊断及单克隆抗体研究工作中的重要试剂。为开展单克隆抗体研究工作,我们于1981年制备了羊抗鼠IgG及羊抗鼠IgM免疫血清。本文报告这一试验方法和结果。材料与方法正常小鼠血清:由本院动物处领取正常小鼠用腋下或颈动脉放血分离血清,取178只正常小鼠分离出47毫升血清,取同样小鼠166只在尾静脉注射10％羊红细胞盐水(0.2—0.3ml/只),6—7天后放血分离血清41毫升。兔抗鼠IgG及兔抗鼠IgM样品血清:由中     

重组人尿型纤溶酶原激活剂中试产品的肽图分析

目的：证明重组人尿型纤溶酶原激活剂（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｕｒｉｎａｒｙ ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｒｈｕ－ＰＡ）中试规模３批产品在结构上的同一性,建立生物工程产品质量控制的一项指标。方法：ｒｈｕＰＡ３批中试产品在非还原条件下经胰蛋白酶水解以后,进行ＲＰ－ＨＰＬＣ肽图分析。结果：ｒｈｕ－ＰＡ３批中试产品的肽图完全一致,且检出峰数目与理论推测值相符。结论：３批产品肽图一致性为ｒｈｕＰＡ产品的结构同一性提供了有利证据,并建立了ｒｈｕ－ＰＡ产品质量控制的一项指标。     

内蒙古自治区两株立克次体的分离与鉴定

<正> 继从新疆和黑龙江蜱和人中分离出斑点热立克次体(Spo?ted fever-group,SFG)后,1984和1985年又从内蒙古自治区病人中先后分离出两株斑点热立克次体。Q热立克次体(Coxiella burneti)分布更为广泛,曾从全国各地分离出多株Q热立克次体,其中两株是1963和1964年从内蒙古自治区病人中分离获得的。先后又于1985和1986年分别从草原革蜱(Dermacentor nuttallii)     

山东省恙虫病的实验室诊断

本实验室以从联合国引进的各群立克次体标准株为参考株,采用免疫荧光和免疫酶标记染色方法,结合病原体的检查,证实了1986年9～12月山东省恙虫病的流行.免疫荧光和免疫酶标染色检测10例可疑恙虫病人血清的恙虫病立克次体抗体,阳性率90%,IgG抗体滴度为2560～5120,IgM抗体滴度为2560～20480,高于IgG抗体滴度,且可在病人静脉血感染的小鼠脏器涂片中查见立克次体.     

非糖基化尿激酶原的研究

目的：构建一种非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突变体，并观察其表达及活性情况。方法：使用PCR扩增的方法，将302位天冬酰胺（Asn302）突变为丙氨酸（Ala302），去掉糖基化位点；将156位精氨酸（Arg156）突变为赖氨酸（Lys156），去掉凝血酶作用位点。将突变体基因转染到哺乳动物细胞中。收取无血清培养上清．并用纤维蛋白板溶解圈法鉴定活性。结果：PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子质量略大于1200bp，与理论分子质量1296bp基本符合。转染成功的细胞株用于扩大培养。纤维蛋白板溶解圈法测定上清活性为295．58IU／mL。结论：非糖基化、抗凝血酶的尿激酶原突变体构建成功。转染后细胞生长良好，表达水平较高。