高效液相色谱-库仑电化学检测法对多种脂溶性维生素及营养物质的分析

[目的]建立快速分析多种脂溶性维生素及营养物质的检测方法，准确分析多种脂溶性维生素及营养物质的水平。[方法]采用美国ESA公司的高效液相色谱—库仑电化学检测器(HPLC—CoulArray Detector)及天津医科大学和天津大学共同研制的血清脂溶性维生素提取试剂盒。[结果]对多种脂溶性维生素A(视黄醇)、维生素D2(麦角钙化醇)、维生素D3(胆钙化醇)、维生素E(α—生育酚和γ—生育酚)、维生素K1(叶绿醌)、类胡萝卜素(α—胡萝卜素和β—胡萝卜素)、类维生素A(维生素A棕榈酸盐)、生育酚乙酸酯和营养物质辅酶Q10(泛醌)进行同时检测。[结论]多通道EC—HPLC检测脂溶性维生素，因其操作简便，灵敏度高，准确性强，可作为临床对脂溶性维生素分析的可靠方法。     

FMOC新型固相法合成胸腺素α1及其反应途径

目的：以固相合成法合成多肽胸腺素α1,并探讨对称酸酐法失效问题的解决方案。方法：采用N^芴甲氧羧基（FMOC）作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成胸腺素α1。结果：以高效液相色谱法和电泳法鉴定本法制备的胸腺素α1的存在;同时发现对称酸酐法在某些肽的合成后期会失效。此问题未见前人报道,可通过改变反应途径,使O-酰基脲成为主要酰化试剂或随着肽链的延长选用不同溶剂,使多肽树脂达到充分溶胀而得以解决。结论：以本法制备胸腺素α1,条件温和,副反应少,产率高;经改变反应途径或更换溶剂等方法。可解决对称酸酐法在某些肽的合成后期的失效问题。     

紫杉醇纳米粒注射液在荷瘤小鼠体内的组织分布及抗肿瘤作用

目的：研究抗癌药物紫杉醇纳米粒注射液在荷瘤小鼠体内的组织分布及抗H22肝癌的作用。方法：将昆明种小鼠前肢腋皮下接种H22肝癌细胞，待瘤体长到１?g，分别尾静脉注射紫杉醇纳米粒注射液及市售紫杉醇注射液，采用液相色谱-质谱-质谱联用的方法测定荷瘤小鼠体内不同组织中紫杉醇的含量。结果：两种不同制剂的紫杉醇主要分布于胰腺、卵巢、脾脏，其抗肿瘤作用以2.5?mg/kg的紫杉醇纳米粒注射液更有效；紫杉醇纳米粒注射液在胰腺、卵巢、脾脏、实体瘤中的分布明显高于紫杉醇注射液(P<0.05)；其它组织器官分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论：两种紫杉醇注射液均有明显抗肿瘤作用，但紫杉醇纳米粒注射液在胰腺、卵巢、实体瘤的靶向性高于紫杉醇注射液，其分布与疗效有一定关联性。     

蛋白质的化学合成

蛋白质是生物体中功能最重要的一类生物大分子,目前蛋白质的制备方法主要有3种:生化提取法、基因工程法和化学合成法[1].各种方法利弊并存[2～3],没有一种方法能够完全适用于所有蛋白质的制备.生化提取法来源少,基因工程法翻译后难以修饰,易形成包合体等不恰当的折叠构型;相比之下,化学合成法提供了一条快速、高效的蛋白质制备途径,同时它能方便地引入非天然氨基酸,改变碳链骨架以及其他化学修饰来提高蛋白质活性,构建新蛋白.     

高效液相色谱法测定脑复康注射剂及降解产物

目的：测定脑复康注射剂中吡拉西坦的含量及降解产物情况。方法：以乙腈：水：H3PO4为流动相，采用高效液相色谱法测定。结果：吡拉西坦浓度在1－500mg/L范围内线性关系良好，Y＝13800．7X＋53753．8，r=0.9993;样品的平均回收率为100．55％，RSD＝0．57％（n=5)。降解产物与主峰分离良好，分离度＞1．5。结论：此法操作简单，结果准确。     

利用pET-29b载体进行葡激酶基因表达与其产物的亲和纯化

目的：探讨6聚组氨酸序列与葡激酶基因序列融合表达及其表达产物的纯化方法。 方法：将葡激酶的cDNA序列连入pET-29b质粒,转入E.coli BL21（DE3）进行表达。 应用镍金属离子螯合层析及凝胶过滤层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定。 结果：6聚组氨酸与葡激酶的可溶性融合蛋白在BL21（DE3）中的表达量约占菌体可溶性蛋白总量的25％;螯合层析纯化后其纯度可达90％以上;再应用Sephacryl S-200HR可使其纯度提高到98％以上;测得其比活性为5.0×10⁴ AU•mg^-1。 结论：利用pET-29b载体成功进行了重组葡激酶基因的表达及其表达产物的亲和纯化。     

胸腺素α1的分离纯化

化学合成胸腺素α1采用阴离子交换色谱和制备型RP-HPLC两步纯化.阴离子交换色谱以pH8.0的Tris-HCl为缓冲液,0～0.35mol/L NaCl溶液离子强度梯度洗脱;制备型RP-HPLC采用C18柱,流动相A为0.1%三氟乙酸-H2O,流动相B为0.1%三氟乙酸-90%乙腈,线形梯度10%～35%B,0～60min洗脱,流速2.0ml/min,检测波长214nm.纯化结果采用分析型RP-HPLC和Tricine-SDS-PAGE检测,终产物纯度达98.8%以上.     

人胸腺肽α1的固相合成及体外活性研究

目的对胸腺肽α1的固相合成工艺进行研究,并对合成产物进行活性评价.方法采用对碱敏感的Nα-芴甲氧羰基(Fmoc)作为α-氨基的保护基,以Fmoc-Asn(Trt)-Wang Resin为起点,逐个延伸固相合成法合成胸腺肽α1.与Nα-Fmoc-基团配套的保护策略还有:叔丁氧羰基(Boc)保护Lys的侧链氨基,叔丁酯基(OtBu)保护Asp、Glu的侧链羧基,叔丁氧基(tBu)保护Ser、Thr的侧链羟基,三苯甲基(Trt)保护Asn的侧链酰胺基.采用DCC-HOBt缩合剂法进行接肽反应,茚三酮定性显色法和水杨醛定量自由氨基检测法控制反应进程,肽段最后用TFA-DCM(V∶V=1∶1)定量地从树脂上切除.结果胸腺肽α1总产率为33.2%.纯化后的产物,经SDS-PAGE和RP-HPLC鉴定,纯度为98.8%以上,活性与日达仙对照品相当.结论 Nα-芴甲氧羰基保护策略的固相合成方法操作简便、条件温和、副反应少,产品纯度高、收率高.     

液相色谱电化学法检测猪肉及肝中残留的盐酸克伦特罗

目的　建立高效液相色谱 库仑阵列电化学系统检测猪肉及肝中残留的克伦特罗。方法　猪肉及肝脏样品经处理后,用高效液相色谱法 电化学检测器测定残留的克伦特罗。流动相A为50mmol·L^-1磷酸 30mmol·L^-1三乙胺(pH 4.0 ) ;流动相B为甲醇 乙腈(3.0∶45) ;组成为A∶B =80∶20。实验中选用了4个电极,电势分别为450 ,600 ,650和680mV。结果　校正曲线在1.88～60.16ng·g^-1,线性良好,最低检测限均为1 2ng·g^-1。结论　该法实用且精密准确,为盐酸克伦特罗的检测提供参考