沙格雷酯和卡比多巴联合用药对顺铂诱导小鼠急性肾损伤的保护作用

目的 研究5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)拮抗剂盐酸沙格雷酯(SH)及5-HT合成抑制剂卡比多巴(CDP)对顺铂致小鼠急性肾损伤(AKI)的保护作用.方法 72只雄性ICR小鼠随机分入SH 50 mg·kg-1,CDP 25 mg·kg-1,SH 26.7 mg·kg-1+CDP 13.3 mg·kg-1和SH 5...     

博来霉素和放射线诱导的间质性肺炎与5-羟色胺降解系统激活的关系及其治疗探讨

本课题组前期研究发现,细胞存在一个5-羟色胺(5-HT)降解系统(5DS),包括5-HT_2A受体(5-HT_2AR)、5-HT合成酶及单胺氧化酶A (MAO-A)。5-HT_2AR可调控5-HT合成酶及MAO-A的表达, 5DS的激活表现为这些蛋白的同时上调,导致线粒体活性氧(ROS)产生。本研究评估间质性肺炎(IP)与5DS激活的关系,并观察抑制5DS对IP的治疗作用。建立博来霉素(BLM)致小鼠IP模型和放射线(Rad)致大鼠IP模型。使用5-HT_2AR拮抗剂盐酸沙格雷酯(SH)、5-HT合成抑制剂卡比多巴(CDP)或SH、CDP联合(SH∶CDP=2∶1)治疗BLM和Rad致IP模型。本文中动物福利和实验过程均遵循中国药科大学动物伦理委员会的规定。免疫组化及Western blot检测表明,两种IP模型中所有肺组织细胞的5-HT合成酶表达均明显上调,而5-HT_2AR、MAO-A表达上调以巨噬细胞最明显。HE染色及Masson染色表明, SH、CDP治疗明显降低了两种IP模型中...     

2型糖尿病引起的疲劳与骨骼肌5-羟色胺降解的相关性研究

疲劳是2型糖尿病(T2DM)常见的并发症。本文研究了T2DM性疲劳与骨骼肌5-羟色胺(5-HT)系统的关系。动物实验用高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠T2DM模型,用5-HT_2A受体(5-HT_2AR)拮抗剂盐酸沙格雷酯(SH)及5-HT合成抑制剂卡比多巴(CDP)分别或联合给药治疗。细胞实验用D-葡萄糖、棕榈酸或5-HT刺激C2C12细胞。用SH、CDP或单胺氧化酶A(MAO-A)抑制剂氯吉兰分别抑制5-HT_2AR、5-HT合成及5-HT降解。本文中动物福利和实验过程均遵循中国药科大学动物伦理委员会的规定。结果表明,小鼠骨骼肌及C2C12细胞均存在5-HT_2AR、5-HT合成酶及MAO-A表达。T2DM以及棕榈酸、D-葡萄糖刺激C2C12细胞时,它们的表达明显上调,且棕榈酸是比D-葡萄糖更敏感的刺激它们表达的因子。转棒实验及生化指标检测均表明,T2DM性疲劳起因于骨骼肌5-HT_2AR、5-HT合成及5-HT降解的增加。5-HT_2AR通过介导MAO-A表达、5-HT合成,间接调控5-HT降解。而MAO-A通过介导5-HT降解,调控细胞炎症、线粒体的ROS产生及膜电位去极化,还抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1(PGC-1)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)及ATP合成酶6(ATP6)表达,从而抑制线粒体功能,如脂肪酸β氧化和ATP合成。用SH和CDP可有效地治疗T2DM性疲劳,同时也可降血糖和血脂,且联合给药有明显的协同效应。     

鹿血晶通过降低肾小管上皮细胞的5-羟色胺合成及降解抑制顺铂诱导的肾损伤

目的 探讨鹿血晶保护肾脏以及抑制顺铂诱导肾损伤的作用机制。方法 人肾小管上皮HK-2细胞设对照组、模型组及鹿血晶（160、400、1000 μg/mL）组和单胺氧化酶A（monoamine oxidase A,MAO-A）抑制剂氯吉兰（15 μmol/L）组,加入药物预处理1 h后加入顺铂（20 μmol/L）刺激24 h诱导细胞损伤。雄性ICR小鼠随机分为对照组、模型组及鹿血晶（0.78 g/kg）组,鹿血晶组预给药7 d,然后模型组及鹿血晶组ip顺铂（25 mg/kg）诱导肾损伤,继续治疗3 d后处死动物。检测细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）、三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）水平,以及细胞及小鼠肾组织活性氧（reactive oxygen species,ROS）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）水平;采用荧光探针DCFH-DA、Mito-Tracker Red CMXRos及荧光染料Hoechst 33342分别检测细胞内ROS含量、定位及细胞凋亡情况;Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤-2（B cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X,Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、Caspase-9、NADH脱氢酶1（NADH dehydrogenase 1,ND1）、细胞色素B（cytochrome b,CYTB）、ATP合成酶亚单位6（ATP synthase 6,ATP6）、核因子-κB p65（nuclear factor kappa-B,NF-κB p65）、磷酸化NF-κB p65（phosphorylated NF-κB p65,p-NF-κB p65）、抑制子κBα（inhibitor of NF-κB,IκBα）、p-IκBα蛋白表达,细胞及小鼠肾组织色氨酸羟化酶1（tryptophan hydroxylase,Tph1）、芳香簇氨基酸脱羧酶（aromatic amino acid decarboxylase,AADC）、5-HT_2A受体（5-HT_2Areceptors,5-HT_2AR）、MAO-A蛋白表达;采用苏木素-伊红（HE）染色检测小鼠肾组织病理损伤;采用免疫组化法检测小鼠肾组织Tph1、AADC、5-HT_2AR、MAO-A表达。结果 与模型组比较,鹿血晶可抑制HK-2细胞内ROS、MDA及上清液中TNF-α、IL-1β水平（P<0.05、0.01）,降低细胞内GSH、SOD水平（P<0.05、0.01）,抑制细胞凋亡。鹿血晶（1000 μg/mL）组与氯吉兰组的作用效果接近,两组对顺铂诱导NF-κB p65磷酸化、细胞凋亡激活（Bax、Caspase-3、Caspase-9表达上调及Bcl-2表达下调）、呼吸链功能下降（ND1、CYTB、ATP6表达下调及ATP水平降低）的逆转作用也接近。并且,鹿血晶（1000 μg/mL）组可明显抑制顺铂诱导的HK-2细胞Tph1、AADC、5-HT_2AR、MAO-A表达上调以及5-HT含量升高（P<0.05、0.01）,而氯吉兰组使5-HT水平进一步升高（P<0.01）。荧光探针检测表明,线粒体是顺铂刺激时HK-2细胞产生ROS的部位,且鹿血晶（1000 μg/mL）组和氯吉兰组对其有相似的抑制效果。HE染色显示,顺铂致小鼠肾组织损伤的部位主要在近端肾小管上皮细胞,免疫组化显示该部位也是Tph1、AADC、5-HT_2AR、MAO-A表达上调最明显的部位。鹿血晶可抑制顺铂诱导的Tph1、AADC、5-HT_2AR、MAO-A蛋白表达的上调及肾组织5-HT、ROS含量升高（P<0.01）。结论 鹿血晶活性成分抑制顺铂诱导肾损伤的机制可能是直接作用于肾脏近端肾小管上皮细胞,抑制顺铂对细胞Tph1、AADC、5-HT_2AR、MAO-A表达的上调,从而抑制细胞的5-HT合成及线粒体5-HT降解,达到抑制线粒体ROS生成、保护呼吸链,最终抑制氧化应激、炎症、细胞凋亡的效果。     

鹿血晶对顺铂诱导小鼠急性肾损伤的保护作用

目的 探究鹿血晶对顺铂诱导小鼠急性肾损伤(AKI)的影响.方法 雄性ICR小鼠分为对照组、模型组、鹿血晶不同剂量给药组(每次0.20、0.39、0.78 g/kg,每天2次).预给药7 d后,除对照组外各组腹腔注射顺铂(25 mg/kg)诱导AKI模型,继续给药3 d后处死.采用比色法或ELISA法检测血清及肾组织生化...     

高血糖诱导肝星状细胞5-羟色胺降解在2型糖尿病致肝脏炎症和纤维化时的作用

目的: 探讨5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)引起肝脏炎症及纤维化时的作用。方法: 雄性C57BL/6J小鼠，通过高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素，建立T2DM模型；将已形成高血糖的小鼠继续用高脂饲料喂养9周或同时用5-HT_2A受体(5-HT 2A receptor，5-HT_2AR)拮抗剂盐酸沙格雷酯(sarpogrelate hydrochloride，SH)及5-HT合成抑制剂卡比多巴(carbidopa，CDP)分别或联合给药进行治疗。细胞实验用人肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)株LX-2，高浓度葡萄糖刺激或同时用SH、CDP或单胺氧化酶A(monoamine oxidase A，MAO-A)抑制剂氯吉兰(clorgyline，CGL)处理细胞，观察高糖诱导LX-2细胞肌成纤维细胞化时5-HT的作用。用苏木精-伊红(hematoxylin & eosin，HE)及马松(Masson)染色法检测肝组织切片病理变化，免疫组织化学及Western blot分析蛋白表达，ELISA或酶试剂法检测生化指标，荧光探针法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)含量。结果: T2DM小鼠肝脏的5-HT_2AR、5-HT合成酶和MAO-A表达上调，且5-HT含量升高。SH和CDP治疗在降低肝脏5-HT含量及下调MAO-A表达的同时，可有效地改善肝脏病变：不仅改善肝功能及肝脂肪变性，还明显抑制肝脏ROS(H₂O₂)含量升高，改善氧化应激，并抑制转化生长因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)的产生，以及炎症和纤维化的发生，且SH和CDP的作用呈协同效应。LX-2细胞研究表明，高糖可上调5-HT_2AR、5-HT合成酶和MAO-A表达，升高细胞内5-HT含量，使细胞的ROS产生增多及肌成纤维细胞化，从而增加TGF-β1合成及炎症和纤维化因子的产生。通过SH拮抗5-HT_2AR，高糖作用被明显抑制；通过CGL抑制线粒体5-HT降解，高糖作用被强烈抑制。SH还可抑制高糖诱导的5-HT合成酶及MAO-A表达上调。结论: 高糖诱导HSCs肌成纤维细胞化和TGF-β1产生，从而导致T2DM小鼠肝脏炎症及纤维化损伤，其病理机制可能是诱导了5-HT_2AR表达上调，5-HT合成及降解增加，使线粒体的ROS产生增多，其中，5-HT_2AR的作用是参与了对5-HT合成酶和MAO-A表达的调控。