慢性低剂量梭曼染毒对大鼠学习记忆及脑组织胆碱酯酶活力的影响

目的研究慢性低剂量梭曼(soman)染毒对大鼠学习记忆及脑组织胆碱酯酶(AChE)活力的影响.方法以皮下注射梭曼(2～40μg·kg-1,s.c,sig×14d)为染毒模型,采用Morris水迷宫试验进行行为检测,比色法测海马和前额叶皮层胆碱酯酶活力.结果 Morris水迷宫试验中,10μg/kg组和40μg/kg梭曼给药组大鼠逃避潜伏期明显延长,撤除平台后跨越原平台位置次数(7.2±1.48,6.0±0.00)减少,在原平台象限游泳时间百分率(47.82%,45.83%)明显下降;梭曼给药组大鼠海马和前额叶皮层胆碱酯酶活力均明显低于生理盐水对照组,且呈剂量依赖性.结论慢性低剂量梭曼染毒致学习记忆障碍,可能与乙酰胆碱过度堆积引起中枢毒蕈碱样胆碱能受体(M受体)下调有关.     

小鼠pdx-1基因真核表达载体的构建及其在胚胎干细胞中的表达

目的： 克隆小鼠pdx-1基因，构建其真核表达载体，并在小鼠胚胎干细胞中表达，为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法： PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因 cDNA，酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组，将pdx-1基因 cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点，形成重组载体pEGFP/pdx-1，转化大肠杆菌DH5α菌株，构建成pdx-1基因真核表达载体质粒。扩增DH5α后抽提质粒DNA，Hind Ⅲ 和BamHⅠ酶切，电泳，DNA测序鉴定。鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13。结果： 从小鼠胰腺cDNA扩增出876 bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中。经酶切和DNA测序验证，插入载体的DNA片段为pdx-1基因，插入方向正确。重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13，24 h 后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达。结论： 小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功，为进一步研究其功能奠定了基础。     

小鼠胚胎干细胞体外分化为神经前体细胞的研究

目的 探索小鼠胚胎干细胞（Embryonic stem cell,ES cell）体外分化为神经前体细胞（Neural precursor cells,NPC）的无血清培养条件,比较人胚胎成纤维细胞（Human embryonic fibroblasts,HEF）与小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEF）对小鼠ES细胞生长的作用。方法 在MEF或HEF饲养层上培养ES细胞,培养液中含白血病抑制因子。采用无血清方法培养NPC,免疫组化方法检测巢蛋白（Nestin）,用硝基四氮啖蓝/5-溴-4-氯-吲哚基磷酸（NBT/BCIP）显色检测碱性磷酸酶。结果 无血清培养可以获得86%的NPC。HEF与MEF-样能维持ES未分化状态。结论 无血清培养方法有利于ES细胞向NPC分化,HEF可用于小鼠ES细胞的培养,而且比MEF优越。     

促肾上腺皮质激素对改进的炎性痛大鼠脑、脊髓内CGRP的影响

目的 观察腹腔注射促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）对改进的完全佐剂性关节炎慢痛大鼠脊髓腰膨大,海马和纹状体内降钙素基因相关肽（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）的影响。方法 （１）肾上腺摘除术。（２）ＣＧＲＰ放射免疫法。结果 （１）大鼠踝关节周围皮下注射自制的油包水型完全福氏佐剂成功地制备成一种全身反应较轻的慢性疼痛模型。（２）脊髓腰膨大中的ＣＧＲＰ在关节炎大鼠     

蛋白芯片检测系统在恶性肿瘤诊断中的临床研究

目的 评价多肿瘤标志物蛋白芯片(C-12)在健康人群的普查、肿瘤的早期诊断及监测预后中的应用,研究C-12在恶性肿瘤诊断中的临床应用价值.方法 测定分析265例恶性肿瘤患者、206例良性疾病患者和326例健康体检者血清中12种常见肿瘤标志物的水平.同时对恶性肿瘤组的54例阴性标本采用全自动化学发光免疫分析仪进行比对分析.结果 C-12对恶性肿瘤组的阳性率为79.7%,显著高于良性疾病组的35.9%和健康体检组的3.1%,差异有统计学意义(P<0.01).C-12对恶性肿瘤检测的灵敏度为81.2%,特异度为79.2%,准确率为78.1%,联合检测的阳性率均显著高于单一标志物,差异有统计学意义(P<0.01).结论 C-12检测技术具有较高的灵敏度和特异性.运用蛋白芯片技术联合检测多种肿瘤标志物可以明显提高恶性肿瘤诊断的敏感性,可应用于预后及疗效观察,同时也可以作为无症状人群的早期肿瘤普查手段之一.C-12检测系统监测病情和判断预后的价值优于诊断价值,但是用于恶性肿瘤的早期诊断灵敏度不高.     

促甲状腺素吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立一种定量检测人血清促甲状腺素(TSH)的方法.方法 根据双抗体夹心法实验原理,分别用吖啶酯和生物素标记两株不同的单克隆抗体,链霉亲和素包被微粒,通过链霉亲和素-生物素系统分离固相和液相完成检测.结果 本方法的最低检测限为0.01 μIU/mL,线性范围0.3～60μIU/mL,批内变异为1.9％ ～2.3％,总变异为6.4％ ～8.6％,与ROCHE公司的促甲状腺素检测试剂盒(电化学发光法)比对,相关系数r=0.9935.结果 本方法的各项指标均能满足临床检测的要求,可以临床推广应用.     

PTZ点燃癫痫大鼠海马BMP4的表达研究

目的观察骨形成蛋白4（BMP4）基因在戊四氯（PTZ）点燃癫痫大鼠海马中的表达，并探讨其与癫痫发病机制的关系。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组。实验组采用PTZ点燃癫痫大鼠，按点燃进程，又随机分为Ⅰ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组和Ⅴ级组。用地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术和图像分析技术，观察海马BMP4表达的变化。结果发现应用PTZ点燃后，Ⅱ级以上大鼠海马区BMP4的表达增加。Ⅲ和Ⅳ级大鼠海马CA3及DGBMP4的表达明显高于对照组（P〈0．01）；Ⅴ级大鼠在发作后海马CA3及DGBMP4的表达呈逐渐下降。结论BMP4可能参与了癫痫的发生、发展过程。     

开展生理学第二课堂活动提高医学生学习兴趣和创新能力

在相应教学制度的保证下，通过在医学生中采用“知识拓展型第二课堂”和“科研型第二课堂”两种生理学第二课堂活动，增加了医学生学习生理学的兴趣和动力，提高了医学生查阅文献、撰写综述和科研论文以及解决生理学科学研究中实际问题的能力，对于医学生的创新素质和能力培养是有益的尝试。     

pTracer/mIFN-γ基因修饰对小鼠胚胎干细胞细胞生物学特性的影响

目的: 探讨IFN-γ基因转染对小鼠ES细胞生物特性的影响. 方法: 电穿孔法将pTracer/mIFN-γ共表达载体转入小鼠ES细胞,荧光倒置显微镜下观测绿色荧光,RT-PCR, ELISA检测转基因ES细胞IFN-γ表达. 碱性磷酸酶染色,测定ES/pTracer/mIFN-γ和ES细胞的细胞克隆形成率;无血清培养法诱导ES/pTracer/mIFN-γ细胞定向分化为神经前体细胞(NPCs),免疫组化法检测nestin表达. 结果: 转染共表达载体pTracer/mIFN-γ的ES/pTracer/mIFN-γ细胞发绿色荧光,有IFN-γ表达,转染72 h后的细胞培养液中IFN-γ量为(44.25±12.23) μg/L;ES细胞和ES/PTracer/mIFN-γ细胞的集落形成率分别为73.66%和70.89%,差异无显著性. ES/pTracer/mIFN-γ细胞经诱导可分化为nestin阳性NPCs. 结论: IFN-γ基因转染对ES细胞的未分化特性、增殖能力及向神经系统分化潜能无明显影响.     

关节炎大鼠疹髓背角内脑源性神经营养因子和促肾上腺皮 …

研究表明，外周感染可导致脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）的过度表达，ＢＤＮＦ可影响其他神经递质的合成。采用免疫组化和原位杂交的方法观察了完全福氏佐剂所致的关节炎大鼠脊髓内ＢＤＮＦ及其功能性受体酷氨酸蛋白激酶Ｂ（ｔｒｋＢ）的表达和促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）ｍＲＮＡ的水平。实验发现，在皮下注射完全福氏佐剂后４ｈ，脊髓腰膨大同侧背角中的ＢＤＮＦ免疫活性神经元和ＣＲＦ ｍＲＮＡ阳性神经元数升高，在２