球形幽门螺杆菌生物学性状及蛋白产物研究球形Hp系列研究之二

目的：研究球形幽门螺杆菌生物学性状和蛋白产物发生的改变。方法：通过延长培养时间和亚抑菌浓度抗生素－－灭滴灵的作用，分别获得两类球形幽门螺杆菌（Ｈｐ）。结果：两种不利于Ｈｐ生长的环境在引起Ｈｐ发生球变的同时，每毫升菌落形成单位（ＣＦＵ／ｍｌ）减少，尿素酶活性降低。结论：球形Ｈｐ尿素酶活性低下，且在常规培养基上不能生长。抗生素的作用比延期培养更快使Ｈｐ发生球形变异。聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质条带分析发现抗生素诱变的球形Ｈｐ与正常形态Ｈｐ基本相似，与延期培养的Ｈｐ明显不同。     

幽门螺杆菌cagA、oipA、iceA1基因的检测及其意义

〔目的〕检测分离自胃炎、胃溃疡患者的幽门螺杆菌 (Hp)cagA、oipA、iceA1基因 ,了解这些基因与消化性疾病的关系。〔方法〕取 163份临床胃活检标本 ,用布氏平板分离培养Hp ,分离培养出来的细菌 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增cagA、oipA、iceA1基因片段 ,用卡方检验进行统计学分析。〔结果〕163份标本中检出Hp 5 8株 ,检出率为 3 5 .6%。ca gA基因的阳性率为 75 .9%(4 4 5 8) ,其中胃炎 66.7%(2 8 42 ) ,胃溃疡 10 0 %(16 16) ;oipA基因的阳性率为 46.6%(2 7 5 8) ,其中胃炎 2 6.2 %(11 42 ) ,胃溃疡 10 0 %(16 16) ;iceA1基因的阳性率为 3 1.0 %(18 5 8) ,其中胃炎 2 1.4%(9 42 ) ,胃溃疡 3 3 .3 %(9 16)。卡方检验分析表明胃溃疡患者HpcagA、oipA、iceA1阳性率均显著高于胃炎患者。〔结论〕HpcagA、oipA、iceA1毒力基因在胃溃疡患者的检出显著高于胃炎患者。     

幽门螺杆菌耐药性测定及其机制的初步探讨

用７种抗生素对４４株临床分离的幽门螺杆菌（Ｈ．ｐ）进行耐药性研究，并对其中１９株Ｈ．ｐ进行质粒检测，发现Ｈ．ｐ对氨苄青霉素及痢特灵敏感，对庆大，氟哌酸等５种抗生不同程度耐药现象，质粒检出率为３１．６％，质粒与本试验所用抗菌素耐药性无关，研究还发现亚抑菌浓度抗生素可引起Ｈ．ｐ发生球形变，本文对Ｈ．ｐ的球形变现象及其与耐药性关系进行探讨。     

血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价

目的 评价通过检测血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的可行性.方法 采集福州地区临床门诊行胃镜检查的胃活检标本,行病理检查和幽门螺杆菌(Hp)培养;采集病人血清,PCR法检测分离所得的Hp cagA基因;EIA法测定血清CagA抗体,分析cagA基因的检出与消化性疾病的关系,比较CagA基因与CagA抗体的检测结果,评价应用CagA抗体检测Hp高毒株感染的可行性.结果 分离获得80株Hp,其中54株检出cagA基因,阳性率67.50%.各病理类型胃病患者cagA基因阳性率:浅表性胃炎77.42%,萎缩性胃炎62.86%,胃溃疡58.33%,胃癌50.00%,各组间差别无统计学意义(P＞0.05);CagA抗体阳性率55.00%,敏感度74.07%,特异度84.62%,约登指数58.69%,调整一致性77.68%.结论 检测血清CagA抗体用于诊断高毒力Hp感染存在局限性.     

幽门螺杆菌oipA基因片段的克隆表达及抗原性分析

目的:分片段克隆表达幽门螺杆菌oipA基因,确定抗原性最强的重组蛋白肽段.方法:从Hp国际标准株NCTC11637中获取oipA全长基因,克隆至pGEM-T载体并鉴定正确,以重组pGEM-T/oipA为模板PCR扩增6个不同大小的oipA基因片段,与表达载体pET-42a连接,转化大肠杆菌BL-21,重组子经PCR、酶切、测序鉴定.IPTG诱导重组蛋白肽段的表达,经Western Breeze 化学发光法鉴定融合蛋白;优化诱导时间和IPTG浓度,诱导重组蛋白大量表达;Ni-NTA His*Bind树脂亲和纯化表达产物;羊抗Hp多克隆抗体,Western blot法检测纯化蛋白的抗原性,间接ELISA法筛选抗原性最强的重组肽段.结果:6条oipA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达,表达的蛋白肽段均可被抗Hp多克隆抗体识别,具有抗原性,其中反应性最强的是最小的蛋白肽段.结论:oipA基因片段可在原核系统中表达,所获取的最小的肽段抗原性最强,可望制备检测血清相应抗体的试剂盒.     

球形幽门螺杆菌体外细胞粘附性研究：球形Hp系列研究之一

通过采用延长培养时间和亚抑菌浓度抗生素作用，使幽门杆菌（Ｈｐ）发生球形变异，电镜下观察球形Ｈｐ结构，并对球形Ｈｐ进行尿素酶活性测定和Ｈｅｐ－２细胞粘附试验，电镜下计算粘附率，粘附指数，侵袭率，侵袭指数。结果表明球形Ｈｐ具有完整的细胞壁，它不是Ｌ型细菌，尿素酶活性降低或消失，细胞粘附能力减弱，侵袭力与正常Ｈｐ无差异，以上两种方法诱变产生的球形Ｈｐ对细胞的粘附能力无差异。     

幽门螺杆菌JHP947等基因的检测及JHP947表达蛋白的鉴定

目的 研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）可塑区—JHP940、JHP947、JHP949基因与胃、十二指肠疾病的关系;鉴定JHP947基因是否表达蛋白。方法 从胃粘膜活检组织中分离培养Hp,PCR扩增分离菌株的JHP940、JHP947J、HP949基因,分析基因检出与临床疾病的关系;以Biodesign软件确定并合成3个JHP947肽段,KLH交联免疫家兔获得多克隆抗体,免疫印迹方法鉴定JHP947基因是否表达相应蛋白。结果 分离获得108株Hp,目的基因在胃炎、溃疡、胃癌标本中的检出率分别为：JHP940 30.6%、22.6%、40.0%,JHP947 3.2%、32.2%、33.3%,JHP949 0、3.2%、13.3%,经χ^2检验,JHP940在胃炎、溃疡、胃癌各组中的检出率差异均无统计学意义（P〉0.05）;JHP947在胃癌、溃疡组中的检出率显著高于胃炎组（χ^2=12.04,P〈0.002 27;χ^2=8.64,P〈0.004 17）,而在胃癌、溃疡组中的检出率差异无统计学意义（P〉0.012 5）;JHP949在胃癌组中的检出率显著高于胃炎组（χ^2=8.48,P〈0.004 17）,而在其他组间差异无统计学意义（χ^2=1.69~2.02,P〉0.012 5）。JHP947和JHP949的检出率呈正相关（χ^2=6.034,P〈0.05）,JHP947和JHP940的检出率无显著相关性（χ^2=2.939,P〉0.05）。HpJ99和临床分离株的JHP947基因均表达相应蛋白。结论 JHP947与胃癌和消化性溃疡的发生密切相关,JHP947和JHP949的检出率呈正相关。JHP947基因表达相应蛋白。     

幽门螺杆菌检测法比较及药敏试验

对２７２例慢性胃病患者，采用血清抗幽门螺杆菌（Ｈｐ）抗体法检验并与胃镜活检组织Ｈｐ快速尿素酶试验同步比较，结果Ｈｐ检出率相似。对其中１３２例Ｈｐ培养阳性者进行药敏试验，结果羟氨苄青霉素最敏感，而灭滴灵不如链霉素和庆大霉素敏感。     

幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因克隆、表达及抗原性检测

目的 克隆幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因，确定CagA蛋白与相应抗体亲和力最强的肽段。方法 根据幽门螺杆菌cagA全基因序列以DNAMAN软件设计5对引物，采用PCR方法扩增出5条门螺杆菌cagA基因片段。将PCR扩增产物插入原核表达载体pGEX－3X并转化至大脉杆菌Top10中，形成5种重组质粒。经PCR、双酶切和测序鉴定后，以异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导其表达CagA蛋白肽段。包涵体经8mol/L尿素初步纯化后，运用ELISA方法检测其抗原性并确定相应抗体亲和力量强的CagA蛋白肽段。结果 5条cagA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达，表达的蛋白均具有强弱不等的抗原性，其中66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。结论 66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。     

胃病患者幽门螺杆菌检测及药物敏感试验

目的比较研究幽门螺杆菌（Ｈｐ）的不同检查方法及药敏情况。方法对２７２例慢性胃病患者做胃镜检查，取活组织做Ｈｐ快速尿素酶试验、胃粘膜Ｈｐ培养，Ｈｐ培养阳性者１３２例做药敏试验，同时检测血清抗Ｈｐ抗体。结果胃粘膜Ｈｐ快速尿素酶试验阳性率以十二指肠球部溃疡者最高（８４．６２％），胃癌最低（６４．７１％），血清抗Ｈｐ抗体检测阳性率与之相似。药物敏感试验结果，羟氨苄青霉素为高敏药物，甲硝唑敏感性差。结论血清抗Ｈｐ抗体检测可代替胃粘膜Ｈｐ快速尿素酶试验，用于大规模流行病学调查，也可作为感染Ｈｐ的初筛试验。