呼吸道合胞病毒感染滴度测定方法的建立与比较

目的建立稳定的呼吸道合胞病毒（RSV）感染滴度测定的实时荧光定量PCR（Realtime Quantitative PCR,Q-PCR）检测方法和酶免疫斑点法（Enzyme Immunospots,EIS）,并与半数定量方法（50％tissue culture infectious doses,TCID50）进行比较。方法分别采用Q-PCR、EIS和TCID50分析RSV感染的细胞和RSV攻毒后小鼠肺脏标本中的病毒滴度。结果RSV感染细胞的上清中,三种分析方法检测的病毒滴度值之比为：Q—PCR和EIS（pfu）的比约为10：1,EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为10：1;RSV攻毒后小鼠肺脏标本中,三种分析方法检测的病毒滴度值之比为,Q—PCR和EIS（pfu）比约为1000：1,EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为5：1。结论成功建立了RSV感染滴度测定的Q-PCR和EIS分析方法,通过与TCID50方法的比较分析,我们认为EIS法分析RSV滴度具有成本低和较高的灵敏度,有较好的应用前景。     

不同剂量HgCl2与CdCl2联合对去卵巢大鼠的雌激素样作用

目的：探讨不同剂量HgCl：与CdCl2联合对去卵巢大鼠的雌激素样作用。方法：66只雌性去卵巢SD大鼠随机分为11组，每组6只，分别给予低、中、高剂量的HgCl2（0．04mg／kg、0．20mg／kg和1．00mg／kg）和CdCl2（0．08mg／kg、0．40mg／kg和2．00mg／kg）及低剂量HgCl2联合低、中、高剂量的CdCl2,阴性对照组给予蒸馏水，阳性对照组给予雌二醇，连续3d，检测各组大鼠的子宫脏器系数和嗜银染色颗粒数。结果：与阴性对照组比较，高剂量HgCl2组、高剂量CdCl2组及低剂量HgCl2与低、高剂量CdCl2联合组大鼠的子宫脏器系数升高，Ag-NORs颗粒数增加（P〈0．05）；与对应剂量CdCl2组比较，低剂量HgCl2与低剂量CdCl2联合组的子宫脏器系数升高，Ag—NORs颗粒数增加（P〈0．05）。结论：低剂量HgCl2与CdCl2联合可能具有雌激素样作用。     

免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立

目的 利用免疫磁珠分离技术(IMS)建立快速纯化人呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F)的方法.方法 表达RSV F的重组腺病毒FGAd/F感染293细胞,收获细胞裂解液,利用兔抗人RSV多抗包被表面活化的免疫磁珠富集和纯化F蛋白,同时建立夹心ELISA,检测纯化的F蛋白浓度以及 F蛋白的回收率.结果 采用IMS成功纯...     

人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定

目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法克隆入载体px8δT,制备表达载体px8δT-PT。设计3对PCR引物,PCR扩增出RSV的M2-1、N和P基因,并克隆至px8δT-PT,构建px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N和px8δT-PT-P。同时利用已有的质粒pcDNA3.1-L构建px8δT-PT-L。用重组质粒转染BSR T7/5细胞,72 h后再用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果成功实现px8δT的改造,构建的4种重组质粒px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N、px8δT-PT-P和px8δT-PT-L,经限制性内切酶分析与预期一致,经Western blot法分析证实M2-1、N及P蛋白被表达。结论获得以T7为启动子的表达载体px8δT-P,成功构建了含有M2-1、N及P编码基因的表达载体,为利用反向遗传学技术进一步改造RSV奠定了基础。     

人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白非复制型重组腺病毒的构建和表达

目的 构建含有A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)融合糖蛋白(Fusion glycoprotein,F)基因的非复制型第一代重组腺病毒(First generation odenovirns vector,FGAd),并研究F基因在重组腺病毒中的表达.方法 利用限制性内切酶Xho Ⅰ和HindⅢ从质粒pGEM3zf-F中切下目的 基因F,克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV,再与pAdeaRy-1在大肠埃希菌BJ5183中进行同源重组,鉴定正确后,用脂质体法转染293细胞,Western Blot鉴定目的 基因表达.结果 获得了表达RSV F基因的非复制型重组腺病毒FGAd/F,Western Blot检测到F基因的表达.结论 获得一株可表达A亚型BSV F的非复制型重组腺病毒FGAd/F,可用于体内研究观察其免疫效果及免疫保护作用.     

氯化汞对大鼠子宫内膜细胞的增殖作用

目的研究氯化汞对去卵巢大鼠子宫内膜细胞的增殖作用。方法将成年雌性大鼠去卵巢后,给予不同剂量的HgCl2(0.04mg/kg、0.20mg/kg和1.00mg/kg)连续3d,观察子宫内膜细胞有丝分裂指数和嗜银染色颗粒数。结果氯化汞低、中、高3个剂量组有丝分裂指数,均高于阴性对照组,差异有显著性(P<0.05),且有明显的剂量-效应关系。同时氯化汞高剂量组嗜银染色颗粒数,与阴性对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。结论氯化汞能加速细胞的分裂和增殖,因此,推断它在大鼠体内可能具有雌激素样作用。     

HgCl2对大鼠子宫雌激素受体的影响

目的:探讨HgCl2对子宫雌激素受体的影响及其雌激素样作用机制.方法:30只大鼠行双侧去卵巢手术后随机分为阴性对照组(蒸馏水)、低、中、高剂量HgCl2组(0.04 mg/kg、0.20 mg/kg、1.00 mg/kg)和阳性对照组(0.08 mg/kg雌二醇),连续用药3 d后取子宫,采用放射性配基结合分析法和雌激素受体结合试验检测雌激素受体数量.结果:HgCl2各浓度组放射活性与阴性对照组比较,差异无统计学意义(F=2.32,P=0.103 0).HgCl2各浓度组雌激素受体数量与阴性对照组比较,差异无统计学意义(F=0.663,P=0.624),也无相关性(rs=0.236,P=0.345).结论:HgCl2不影响雌二醇与雌激素受体结合,也不影响雌激素受体的数量,可能通过其他途径显示雌激素样作用.     

低剂量汞对镉诱导大鼠子宫增重作用的影响

目的　了解HgCl2 对CdCl2 雌激素样作用的影响。方法　以HgCl2 、CdCl2 等为受试物 ,设不同剂量的组合检测其对去卵巢SD大鼠子宫的诱导增重作用 ,并以E2 为阳性对照。结果　 1.0 0mg/kgHgCl2 和 2 .0 0mg/kgCdCl2 均可诱导去卵巢SD大鼠子宫明显增重 ,与阴性对照组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。 0 .0 4mg/kgHgCl2 与不同剂量的CdCl2 联合染毒 ,可致去卵巢SD雌性大鼠子宫明显增重 ,与阴性对照组相比 ,不仅高剂量组差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,低剂量也有统计学意义 (P<0 .0 5 )。结论　低剂量HgCl2 对CdCl2 具有雌激素样的联合作用。     

氯化镉对大鼠子宫内膜细胞的增殖作用

目的研究氯化镉对去卵巢大鼠子宫内膜细胞的增殖作用。方法将成年雌性大鼠去卵巢后,给予不同剂量的CdClz（0．08mg,／kg、0．40mg／kg和2．00mg／kg）连续3d,观察子宫内膜细胞有丝分裂指数和嗜银染色颗粒数。结果氯化镉中、高荆量组有丝分裂指数分别为0．81％,0．97％,均高于阴性对照组,差异有显著性（P〈0．05）。同时氯化镉高剂量组嗜银染色颗粒数为1．36～1．53,与阴性对照组相比,差异有显著性（P〈0．05）。结论氯化镉能加速细胞的分裂和增殖,因此,推断它在大鼠体内可能具有雌激素样作用。