人心肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的高效表达及纯化

目的:获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白,为临床上检测心肌损伤及预后提供新的诊断方法.方法:利用RT-PCR方法从人心肌细胞的cDNA文库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA,并克隆到大肠杆菌表达载体中,表达含凝血酶识别序列的MS2-cTnI 融合蛋白,纯化后用Western-blot进行鉴定.结果:从人心肌cDNA文库中扩增出编码人cTnI的cDNA,克隆并在大肠杆菌中表达,表达量达30%以上.经离子交换柱纯化,最终产物纯度在95%以上.可与其特异性单克隆抗体反应.结论:cTnI能够在大肠杆菌中高效表达和纯化,为今后检测心血管疾病提供了一种高效快捷的方法.     

高原低氧环境下大鼠血浆抗利尿激素水平变化研究

目的：研究高原低氧环境下大鼠血浆抗利尿激素（PAVP）水平变化，探讨其与急性高原病的关系。方法：将50只雄性SD大鼠随机分为5组．分别为24h、48h、72h、1w及1个月（A、B、C、D、E）组，同时设立对照组（西宁地区，海拔2260m），将5个实验组由西宁地区带至青海大学可可西里高原医学研究基地（海拔4600m），在不同时间点处死取材，应用放射免疫法检测PAVP的浓度，并与对照组比较。结果：PAVP浓度在初入高原后呈下降趋势，在48h达到最低，后逐渐回升，至1w时已经接近对照组水平，1个月时达到最高水平。结论：高原慢性低氧环境下，PAVP的浓度随着缺氧时间的延长而变化，此可能与机体缺氧程度及高原低氧习服过程有关。     

人类新细胞因子(CKLF-1)在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的：进一步研究人类新细胞因子－－趋化素样因子1（CKLF－1）蛋白的结构与生物学活性。方法：构建了融合蛋白的原核表达质粒，并在大肠杆菌中进行诱导表达，获得了原核表达的融合蛋白，经凝血酶切割获非融合重组蛋白，并进行体外活性鉴定。结果：CKLF－1原核表达蛋白获得了高表达，纯化后获得约90％纯度以上蛋白，发现其可以与肝素结合，生物学活性检测表明其对人中性粒细胞，外周血单个核细胞和大鼠的巨噬细胞具有明显的趋化作用。结论：CKLF－1原核表达蛋白具有与真核表达蛋白类似的生物学活性。     

高原低氧环境下大鼠肾脏水通道蛋白2的表达及意义

目的 研究高原低氧环境下大鼠肾脏内髓水通道蛋白2（AQP2）mRNA及蛋白的表达。 方法 将40只雄性SD大鼠随机分为24 h、48 h、72 h及1周组，同时设立对照组（西宁地区）。将4个实验组由西宁地区（2260 m）带至青海大学可可西里高原医学研究基地(4600 m)，在不同时间点处死取材。用放射免疫法检测血浆抗利尿激素(AHD)浓度，Western印迹、实时定量PCR、免疫荧光等方法检测AQP2蛋白及mRNA的表达。 结果 暴露于高原低氧环境后，大鼠AHD水平首先呈下降趋势，24 h为（142.46±10.57）；48 h时达到最低水平，仅为对照组的28.5%[（86.94±6.49） μg/L比（302.53±10.48） μg/L]；后逐渐上升，72 h组为（169.65±11.15） μg/L，与对照组差异均有统计学意义（均P < 0.01）；1周时为（306.46±11.14） μg/L达到对照组水平。AQP2 mRNA的表达与AHD水平的变化相一致，初入高原后呈下降趋势，48 h时达到最低水平，后逐渐上升，24 h、48 h、72 h组与对照组差异均有统计学意义（分别为0.04±0.005，0.03±0.002，0.04±0.003比0.09±0.008，均P < 0.01），1周时为（0.09±0.01），达到对照组水平。AQP2蛋白表达与mRNA的表达变化一致。免疫荧光结果显示，对照组及1周组大鼠肾脏荧光强度表达一致，其余各组较低，48 h组荧光强度最低。 结论 在高原低氧环境下大鼠肾脏内髓AQP2 mRNA和蛋白的表达在缺氧早期呈下降趋势，后逐渐上升到正常水平，其改变可能和机体对缺氧的程度和高原低氧的习服过程有关。     

不同海拔地区不同年龄组人外周血白细胞端粒DNA长度变化

目的 探讨不同海拔地区不同年龄组人外周血白细胞端粒DNA长度变化.方法 分别选取高原组(花石峡海拔4380 m)与平原组(北京海拔43 m)健康人外周血标本172份.其中高原组95名(男性47名,女性48名),平原组77名(男性39名,女性38名).两组年龄分布基本相同.实验采用Southern杂交方法检测其端粒限制性片段长度(terminal restriction fragment,TRF),邻苯三酚氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD),硫代巴比妥(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)并做统计学分析.结果 高原组与平原组健康人平均TRF检测结果,高原组男性TRF值为10.45±1.35,女性为10.50±1.45;平原组男性TRF值为11.29±1.10,女性为11.31±1.13;高原组与平原组男性与女性TRF.值均与年龄呈负相关性;对高原组与平原组分别进行男性与女性4个不同年龄段间方差分析,4个年龄段均数间进行比较发现无论男性或女性,高原组与平原组25及55岁组比较,差异有统计学意义.25～44岁和45～65岁高原组和平原组相同年龄段组SOD,MDA测定值相比较,差异有统计学意义.结论 高原组人FRF均随年龄增长而逐渐缩短,TRF与年龄间存在负相关关系;高原组与平原组不同性别TRF不同,高原组TRF水平低于平原组;随着年龄的增长高原组TRF缩短更明显.     

血流感染碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药特征及机制研究

目的 探讨无菌血标本分离碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制及分子分型.方法 测定32株CRKP最低抑菌浓度(MIC),mCIM和eCIM法检测碳青霉烯酶;PCR法检测耐药基因;多位点序列分型(MLST)进行分子分型;RT-PCR检测膜孔蛋白OMPK35/36基因相对表达情况.结果 药敏试验显示32株CRKP...     

浅谈如何提高美国雅培AXSYM全自动快速免疫分析仪的使用效率

介绍几种能提高美国雅培AXSYM全自动快速免疫分析仪使用效率的方法,并总结常见的报警代码和处理方法,以提高仪器的使用效率,减少仪器报警数量,提高日常工作效率.     

髓样造血抑制因子(MPIF)存在一种新的mRNA剪切变异体

目的　克隆并原核表达趋化因子 ,研究其结构与功能。方法　RT PCR技术 ,DNA测序和计算机网上比对 ,DNA重组及原核表达技术 ,离子交换层析技术 ,半固体骨髓集落培养。结果　在利用RT PCR扩增趋化因子MPIF 1的过程中发现存在一种新的变异体形式。该变异体比MPIF 1多5 1个碱基 ,编码的蛋白质比MPIF 1长 17个氨基酸 ,基因定位于人类第 17号染色体上 ,其序列符合内含子和外显子的剪切规律 ,因而很可能为MPIF 1的mRNA不同剪切形式 ,将其命名为MPIF 1β。应用DNA重组技术构建原核表达质粒PKPL MPIF 1β ,转化大肠杆菌 ,诱导表达 ,获得重组蛋白。SDS PAGE表明MPIF 1β的表达效率达 15 % ,相对分子质量 (Mr)约为 (14～ 15 )× 10 3。功能研究表明 ,MPIF 1β有抑制小鼠骨髓集落形成的作用。结论　MPIF 1β是与MPIF 1功能类似的新变异体。     

青蒿琥酯联合左氧氟沙星对耐碳青霉烯类大肠埃希菌抗菌活性的影响

目的 探讨青蒿琥酯与抗生素联用对耐碳青霉烯类大肠埃希菌（CRECO）抗菌活性的影响。方法 收集分离的CRECO 20株,采用肉汤稀释法测定抗菌物质青蒿琥酯（ASN）、左氧氟沙星（LEV）、头孢他啶（CAZ）、亚胺培南（IMP）最小抑菌浓度（MIC）。用棋盘法测定ASN与LEV、CAZ、IMP协同抗菌活性;用细菌生长曲线法观察不同处理组CRECO临床菌株（E5）生长的情况;用RT-PCR检测外排泵基因以及调控基因的表达。结果 抗菌物质ASN、LEV、CAZ、IMP的MIC50分别为>8 192、64、2 048、32μg/mL。协同抗菌试验显示：ASN (1 024μg/mL)与LEV联用时,LEV的MIC50由64μg/mL降至16μg/mL （即1/4 MIC50）,联合作用效果以协同为主;与CAZ联用时,CAZ的MIC50由2 048μg/mL降至1 024μg/mL （即1/2 MIC50）,联合作用效果以相加为主。生长曲线显示,ASN联合LEV能有效抑制CRECO生长,曲线走向平缓。20株菌株全部携带外排泵基因AcrA和AcrB基因。RT-PCR结果显示ASN联合LEV可...     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的高效表达及纯化

目的：获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白,为临床上检测心肌损伤及预后担任新的诊断方法。方法：利用ＲＴ－Ｐ０ＣＲ方法从人心肌细胞的ｃＤＮＡ库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的ｃＤＮＡ,并克隆支大肠杆菌表达载体中,表达含凝血酶识别序列的ＭＳ２－ｃＴｎⅠ融合蛋白,纯化后用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行鉴定。结果：从人心肌ｃＤＮＡ库中扩增出编码人ｃＴｎⅠ的ｃＤＮＡ,克隆并在大肠杆菌中表达,表达量达３０％以上。经离