一种双侧供肾大鼠肾移植模型的建立

目的 探讨同时取大鼠双侧肾脏分别移植的可行性，其目的是节省实验费用、缩短手术时间。方法 以近交系Brown-Norway大鼠为供者，同时取其双肾作为供肾，原位灌洗；近交系Lewis大鼠为受者，切除其左肾，移植供肾1只。以冠状动脉造影支架为支撑行供肾静脉与受者肾静脉端端吻合，供肾动脉与受者的腹主动脉行端侧吻合，供肾输尿管膀胱瓣与受者的膀胱吻合。受者术中预置右侧肾脏血管体外结扎线，术后3d结扎。结果 每只供鼠手术耗时约40min，热缺血时间约10S，冷缺血时间约20min。40次实验均获成功，移植肾功能正常，在不用免疫抑制剂的情况下，受者存活时间均超过7d。结论 同时取双侧肾脏分别移植给2个受者是可行的，可降低实验成本；要获得相同数量的供肾，同时取双肾的耗时较仅取单侧肾脏大大缩短。     

转hCTLA4Ig树突状细胞诱导T细胞免疫耐受的实验研究

目的　通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs ,探讨转人CTLA4Ig(hCTLA4Ig)树突状细胞 (DCsRev)诱导T细胞免疫耐受的可能性。方法　通过重组逆转录病毒将目的基因hCTLA4Ig转染到大鼠骨髓来源的DCs中 ,通过流式细胞检测目的基因hCTLA4Ig表达及DCs表面分子的改变 ;通过混合淋巴细胞反应 (MLR)检测DCsRev抑制T细胞免疫反应的能力。 结果　重组逆转录病毒转染DCs的最大效率为 91 2 5 % ;在功能上 ,DCsRev不但丧失了刺激MLR的能力 ,并且能够强烈抑制MLR中反应T细胞的增殖 ,而且抑制率与加入DCsRev的数量和DCsRev预处理反应T细胞的时间长短有关。具体来说 ,DCsRev数量在 10 3 ～ 10 4之间时 ,抑制率与剂量呈正相关 ,最高为 71 96%。而当DCsRev数量达到 5× 10 4抑制率下降为 5 9 2 %。在 12～ 48h之间 ,随着预处理时间的延长 ,抑制率却不断下降 ,预处理 12h抑制率最高 ,为 99 6%。但不做预处理 ,在反应开始时同时加入DCsRev ,则抑制率明显降低 ,仅为 5 9 2 %。对腹腔注射DCsRev大鼠脾T淋巴细胞体外分析表明 ,DCsRev也能在动物体内诱导耐受 ,但这种免疫耐受状态不能维持终身。结论　通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs,不但DCs表面CD86分子被CTLA4Ig有效的封闭 ,并且能够诱导抗原特异性T细胞的免疫耐受     

腺病毒载体介导CTLA4Ig基因治疗小鼠变应性鼻炎

目的 检测CTLA4Ig-重组腺病毒载体（Ad-CTLA4Ig）在变应性鼻炎治疗中的作用。方法 采用卵清蛋白（OVA）致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎。实验组在OVA激发前30min予以Ad-CTA4Ig腹腔注射。未转CTLA4IgcDNA的腺病毒载体（Adv）作对照。比较各组动物鼻部症状和鼻粘膜形态学改变，并采用ELISA法测定血清中OVA－特异性IgE水平。结果 CTLA4Ig重组腺病毒实验组小鼠鼻部症状和鼻粘膜病理改变不明显，并且血清中OVA－特异性IgE水平明显低于对照组（P＜0.05）。结论 Ad-CTLA4Ig可防治小鼠应变性鼻炎的发生，提示CTLA4Ig-重组腺病毒载体有可能运用于临床变应性鼻炎的治疗。     

临床检验基础强化实验技能训练的教学体会

临床检验基础作为一门实践性很强的专业学科,在临床辅助诊断中占有相当重要的地位,不仅为许多临床疾病提供有重要参考价值的辅助诊断指标,而且有的检测指标可以独立成为某些疾病的确诊依据。随着循证医学时代[1]的到来,许多自动化的先进仪器设备进入临床实验室,如何用最简单、最合理的方法为临床提供有力的诊断证据,是广大检验医学工作者面临的挑战;也对从事该课程实验教学的教员提出了新的要求。1加强培养学生的“三基”训练教师是学生知识的重要来源,因此作为临床检验实验课的教员,首先自身应具备良好的素质:拥有广博的专业知识,既精通本…     

大鼠肾移植三种尿路重建术式的比较

目的 对大鼠肾移植3种尿路重建术式进行比较,筛选出稳定性好、并发症少的手术方案.方法 以3种术式进行大鼠同系肾移植尿路重建:A组,供/受体输尿管端端吻合术(n=14);B组,供体膀胱瓣-受体膀胱吻合术(n=15);C组,供体输尿管-受体膀胱浆肌层隧道术(n=17).对各组尿路重建时间、尿路并发症以及血肌酐动态指标进行比较.结果 A、B、C 3组手术时间分别为(6±2.0)min、(14±2.5)min、(7±2.0)min, A组与C组差异无统计学意义, B组用时分别与A组、C组差异有统计学意义(P＜0.05);术后,A组输尿管梗阻发生率最高(21.4%),B组尿漏发生率最高(13.3%);C组术后尿路并发症总发生率最低,为11.8%,A、B两组术后尿路并发症总发生率分别为28.5%和26.1%,与C组之间差异均有统计学意义(P＜0.05);血肌酐监测显示A组术后40d与C组差异有统计学意义(P＜0.05),术后60d与B、C两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 供体输尿管-受体膀胱浆肌层隧道吻合术后尿路并发症少,对移植肾恢复影响小,是大鼠肾移植尿路重建的较理想方案.     

应用CD4+CD25+Treg细胞诱导大鼠肾移植免疫耐受的研究

目的 应用供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞诱导移植免疫耐受,抑制大鼠肾移植慢性排斥反应.方法 以SD、Wister大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植慢性排斥反应动物模型;受体脾细胞悬液同供体肾组织抗原孵育培养,诱导获得对供体抗原的特异性;采用MACS法分选具有供体抗原特异性的CD4 CD25 T细胞,FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞及CD4 CD25 Treg细胞纯度;获得之供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞于同种异体肾移植术后2、4、6、8、10周,分别经尾静脉注射入受者体内(实验组,n=12),选取未注射组为对照(n=12).观察两组移植肾脏存活时间;术后第10、40、80天MTT法检测比较两组受体脾细胞对供体抗原刺激反应程度;术后第10、20、40、60、80天分别监测各组血肌酐水平.结果 FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞得率为4.13%,分离纯度为73.34%;CD4 CD25 Treg细胞纯度为65.22%.所分选之CD4 CD25 Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%.移植肾存活时间:治疗组移植肾存活时间为(98.83±6.66)d,显著长于对照组的(78.25±4.71)d,组间差异有统计学意义(P＜0.05);术后第40、80天治疗组脾细胞对供体抗原刺激反应程度均明显低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).术后第20、40、60、80天对照组血肌酐指标明显高于治疗组,同治疗组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,有效抑制了移植肾慢性排斥反应的发生.     

GITR抗体对L615白血病抑制作用的实验研究

目的 探讨糖皮质激素诱发型TNF受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)的抗体对抗小鼠L615白血病(T淋巴细胞来源白血病)的效果和作用机制.方法 以L615小鼠建立白血病模型,分3组实验组以及阴性对照组,观察实验小鼠生存状态及时间、外周血白细胞计数及分类、外周血和骨髓中白血病细胞形态变化、肝脾指数、肝脾组织病理改变.结果 GITR抗体可以延长L615白血病小鼠的生存时间,可引起骨髓中白血病细胞发生凋亡、坏死、肝脾指数降低、肝脾组织被白血病细胞浸润,提示GITR抗体能够降低和缓解白血病细胞所致的小鼠外周血白细胞的升高和浸润,以及肝脾的肿大.结论 通过免疫调节机制GITR抗体能够有效地抑制L615白血病细胞的增殖,进而抑制白血病的发展.     

内支架法原位端-端吻合大鼠移植肾静脉

目的 建立一种省时、高效的大鼠肾移植静脉吻合方法.方法 建立同种异体肾移植动物模型.根据移植肾静脉重建方式不同进行模型分组:实验组(n=32):内支架法原位端一端吻合;对照组Ⅰ(n=25):原位端.端吻合;对照组Ⅱ(n=22):cuff管套扎法吻合;对照组Ⅲ(n=20):与受体下腔静脉端侧吻合.比较各组移植肾静脉手术操作时间、手术并发症发生率.结果 实验组供肾静脉切取用时同对照组Ⅲ间差异有统计学意义[(9.08±0.88)main比(12.07±0.88)min,P<0.05];修整用时与对照组Ⅱ间差异有统计学意义[(4.97±0.58)win比(8.14±0.64)min,P<0.05];对照组Ⅱ术后静脉血栓发生率最高,同实验组间差异有统计学意义(X2=4.77,P<0.05);实验组静脉吻合口狭窄的发生率最低,同对照组Ⅰ间差异有统计学意义(x2=3.90,P<0.05).结论 应用内支架法行移植肾静脉端.端吻合操作时间短、并发症少,可有效解决大鼠肾移植静脉重建的问题.     

对检验医师培养的几点认识

通过剖析国家教育部对检验本科培养的目标要求,分析国内对检验医师岗位设立的要求和现实困难,探索培养真正意义上检验医师的具体措施和努力方向,为改进现有培养模式和培养方法提出具体的指导意见。培养真正意义上的检验医师是国内外医学发展的必然趋势,必须按照国家要求对现有培养方式、培养条件和培养措施加以改进,以满足培养检验医师的现实需要。     

基于纳米金/多壁碳纳米管-普鲁士蓝-壳聚糖纳米复合物/蛋白A定向固定甲胎蛋白免疫传感器的研究

目的 以金纳米粒子修饰的氧化铟锡(ITO)玻璃为基底电极,将多壁碳纳米管-普鲁士蓝-壳聚糖(MWNTs-PB-CHIT)纳米复合物及蛋白A(PA)共修饰于其表面固载抗体制得高灵敏甲胎蛋白(AFP)电流型免疫传感器.方法 先在ITO电极表面电沉积一层纳米金,随后将MWNTs-PB-CHIT纳米复合物滴涂于ITO玻璃电极的纳米金膜上,最后利用壳聚糖的吸附性及在酸性(pH=6.5)环境的负电性,静电吸附蛋白A并定向固定甲胎蛋白抗体(anti-AFP),制得电流型免疫传感器.结果 在最佳实验条件下,该传感器响应的峰电流值与AFP浓度在1.0～250.0 ng/ml的范围内保持良好的线性关系,检测下限为0.5 ng/ml, 反应达到稳定电流所用时间为6 min,并且电流值相对标准差小于3%.结论 成功构建一次性使用、价格低廉的新型传感器电极材料.