s、Fy~a、OK~a阴性稀有血型的多重PCR筛选技术应用

目的采用多重PCR筛选技术(PCR-ssp反应体系)同时扩增s、Fya、OKa阴性稀有血型。方法根据s、Fya、OKa血型基因核心序列设计相应引物,采用序列特异引物引导的PCR反应(PCR-SSP)体系对模版DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据扩增出目标片段图谱判断该稀有血型基因的存在与否,以此判断是否阴性稀有血型。结果随机抽取本站2010年6～8月参加献血的650名献血者进行筛选鉴定,未发现s、Fya、OKa阴性的稀有血型。结论该方法能在一个反应体系内同时扩增3个稀有血型,具有准确、高效的优点,可以用来进行献血人群s、Fya、OKa阴性稀有血型的筛选与建库工作。     

温度与时间对HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗梅毒抗体的影响

严格的血液检测是保证输血安全的重要手段，日常的检测工作中常会遇到阳性或可疑标本、质控品放置不同温度和时间时出现测定值明显差异现象，严重影响血液标本检测结果的正确性，导致室内质控图曲线的失控。为此，笔者对12份阳性标本、4份质控品分别在室温、2～6℃冰箱及-20℃冰箱中贮存，在不同时间用ELISA法分别进行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗梅毒抗体检测，结果如下。     

番禺地区RhD阴性献血者部分D频率调查发简

目的 分析番禺地区RhD阴性献血者部分D（partial D）基因分型特征.方法 采用微量板法对献血者进行RhD阴性筛查;采用抗人球蛋白法对初筛RhD阴性的样本进行确认;采用PCR-SSP法（RH基因变异体分型检测试剂盒）对献血者基因组DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断部分D基因分型.结果 初筛检出60例RhD阴性,经抗人球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率约为0.23％.59例RhD血清学筛选阴性的基因分型检测发现2例部分D,血清学筛选RhD阴性中出现部分D的频率约为3.4％.结论 本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD-CE （5）-D、RHD-CE（6-9）-D等位基因型,采用PCR-SSP法对RhD阴性表型献血者进行基因分型,可以准确鉴定RHD基因型.     

多重PCR技术筛选Co^a、Lu^b、Yt^a、Kp^b阴性稀有血型方法的建立

目的采用多重PCR筛选技术建立一个PCR反应体系,同时扩增Co^a、Lu^b、Yt^a、Kp^b阴性稀有血型,并应用于无偿献血人群稀有血型的筛选与建库。方法根据Co^a、Lu^b、Yt^a、Kp^b血型基因核心序列设计相应引物,采用多重PCR体系对献血者模版DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据是否扩增出对应片段图谱判断该稀有血型基因的存在。结果随机抽取500名献血者进行筛选鉴定,没有发现Co^a、Lu^b、Yt^a、Kp^b阴性的稀有血型。结论该方法能在一个反应体系内同时扩增4个稀有血型,具有准确、高效的优点,可在无偿献血人群稀有血型的筛选与建库工作中应用。     

采用多重PCR技术筛选k、Js~b及Di~b阴性稀有血型

目的利用多重PCR筛选技术,建立一个PCR-ssp反应体系同时扩增k、Jsb、Dib阴性稀有血型。方法根据k、Jsb、Dib血型基因核心序列设计相应引物,采用序列特异引物引导的PCR反应(PCR-SSP)体系对献血者模板DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据是否扩增出目标片段图谱判断该稀有血型基因的存在。结果随机抽取参加献血的600例进行筛选鉴定,没有发现k、Jsb、Dib阴性的稀有血型。结论该方法能在一个反应体系内同时扩增3个稀有血型,具有准确、高效的优点,可应用于献血人群k、Jsb、Dib阴性稀有血型的筛选与建库工作。     

番禺地区RhD阴性献血者Del表型的基因分型研究

目的 研究分析番禺地区RhD阴性献血者Del表型的基因分型特征.方法 采用120孔微量板法对参加无偿献血的样本进行RhD阴性筛查;采用抗人球蛋白法进行确认,采用吸收放散实验进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对确认阴性样本进行RH DEL基因分型.结果 在26 172例献血者中筛选出60例RhD阴性,经确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23％;吸收放散实验检出10例Del表型;基因分型检测出10例RHD 1227A DEL基因型.结论 番禺地区RH DEL发生频率约为16.9％(10/59),以RHD 1227A DEL为主.吸收放散实验联合PCR-SSP法检测,能进一步提高RH DEL鉴定的准确性.     

番禺地区Mur抗原与抗-Mur频率调查

在MNS血型系统众多的变异型及卫星抗原中,Mur抗原及抗-Mur与输血密切相关,而国内也有抗-Mur引起输血反应的相关报道[1].我们对本地区献血人群中Mur抗原与抗-Mur的频率进行了调查,报道如下.     

番禺地区无偿献血人群中Jk(a-b-)表型的筛选与研究

目的研究番禺地区献血人群中Jk(a-b-)表型的分布特点。方法用2mol/L尿素攻膜试验(96孔微量板法)筛选出阴性(不溶血)样本,然后作血清学表型鉴定,对Jk(a-b-)表型进行基因分型及基因组DNA编码区外显子4-11及其侧翼区的分段扩增和测序。结果从本站2004年6月-2006年8月献血的50034名汉族人中筛选出10例Jk(a-b-)表型,频率为0.02%;发现3种突变序列:1)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(△6);2)Exon5:nt222C>A、AA74AAC(Asn)>AAA(Lys),Exon7:nt536C>G、AA179CCT(Pro)>CGT(Arg),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(222A)/JKb(536G);3)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt499A>G,AA167ATG(Met)>GTG(Val),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(499G)。结论在番禺地区献血人群Jk(a-b-)表型查中发现的Exon7:nt499A>G和Exon7:nt536C>G2种突变为首次报道。     

孕妇产前血型免疫抗体分析

[目的]回顾性分析孕妇产前血型免疫抗体效价及追踪新生儿溶血病发生率。[方法]用经典抗人球方法对孕妇血清进行不规则抗体筛选和鉴定。用2-Me处理破坏IgM型抗-A和抗-B,用经典抗人球测定孕妇血清的抗-A或抗-B效价。追踪新生儿溶血病发生率。[结果]在408名夫／妻血型为A—O组合孕妇血清中IgG抗-A效价≥64有65例。其中,有35例发生了ABO—HDN,发生率约为52．3％。在882名夫／妻血型为B—O组合孕妇血清中IgG抗-A效价／〉64有118例。其中,有67例发生了ABO～HDN,发生率约为54．2％。在135名夫／妻血型为AB—O组合孕妇血清中IgG抗-A效价≥64有15例。其中,有6例发生了ABO—HDN,发生频率约为40％。[结论]夫妻血型不合的孕妇应进行IgG血型抗体效价测定,为HDN的早期诊断和治疗提高依据。     

单核细胞单层试验在ABO系统新生儿溶血病中的应用

目的比较单核细胞单层检测方法(MMA)与血型血清学方法在诊断ABO系统新生儿溶血病(HDN)中的作用。方法对74名孕妇在孕22周、32周、36周以及新生儿出生当天的血液分别进行抗体效价检测和MMA实验,并对这两种方法进行评价。结果抗体效价检测的灵敏度为80.9%,特异性为73.9%,阴性预示值为65.4%,阳性预示值为79.2%,准确率为74.3%,而MMA的相应评价指标分别为89.4%,85.2%,82.1%,91.3%,和87.8%。结论在早期诊断ABOHDN时,MMA方法较抗体效价测定更为灵敏和准确。