日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定

目的 :分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原 (AWA)中的特异蛋白带 ,为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法 :免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带 ,电泳层析法分离靶抗原。结果 :获得了感染血清和免疫血清识别的 6 7kD蛋白。结论 :电泳层析法是一种分离血吸虫抗原的有效方法     

弓形虫主要表面抗原1截短型片段的纯化与鉴定

目的:表达和纯化弓形虫SAG1,分析其免疫原性。方法:将诱导表达SAG1后菌体裂解,离心,分别收集其上清和沉淀;亲和层析分离纯化裂解上清液中的SAG1,SDS-PAGE和Western blot鉴定SAG1纯度和免疫原性。结果:诱导后重组体pGEX-SAG1/Bl21超声裂解上清液、8M脲溶解沉淀的上清中都含有融合蛋白GST-SAG1,从超声裂解上清液中纯化获得融合蛋白GST-SAG1。结论:亲和层析获得具有免疫原性的SAG1。     

RNA干扰技术在抗病毒性疾病中的应用

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是多种生物体内由双链RNA介导的同源mRNA降解现象.它首先是在1990年由Jorgensan R等[1]在矮牵牛花的研究中发现的.他将紫色色素合成酶基因导入矮牵牛花以加深花色,结果不仅未加深颜色,反而使许多花呈现杂色甚至白色.Jorgensan 把这种现象称为“共抑制”（Cosuppression）.     

SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫

目的构建SARS病毒核衣壳蛋白（N）的真核表达质粒，并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段，定向克隆入真核表达栽体pVAC，构建pVAC-N重组质粒；大量制备该重组质粒，经基因枪腹部皮内注射免疫BALB／c小鼠三次，间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N，免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体，为SARS疫苗的进一步研究打下基础。     

胱抑素C与早期肾功能损害的关系

目的 探讨内源性标志物血清胱抑素C（cystatin C,cys C）在评价早期肾功能损害中的价值。方法 收集住院的慢性肾病患者108例,按内生肌酐清除率(Ccr)值分早期肾功能不全组、中晚期肾功能不全组,40例正常对照组取自本院体检健康人群。乳胶颗粒增强免疫透射比浊分析法( PETIA) 测定血清cys C的浓度,肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐（Scr）浓度,酶偶联法测定尿素氮（BUN）。比较cys C、Scr、BUN与Ccr的相关性及其阳性检出率。采用似然比（LR）评价cys C的可靠性。结果 对照组、早期肾功能不全组、中晚期肾功能不全组的血清cys C分别为（0.63±0.41）、（2.59±1.32）、（7.13±1.68）mg/L。cys C、Scr 、BUN与Ccr均呈显著相关( P < 0.05),以cys C与Ccr的相关程度最密切。血清cys C的阳性检出率最高,LR以血清cys C为最佳。结论 血清cys C是一个敏感的反映肾小球滤过功能的指标,对早期诊断肾功能损害具有重要价值。     

重组结核分枝杆菌CFP10的克隆与表达

目的:克隆和表达结核分枝杆菌CFP10,并分析其免疫学活性。方法:自结核分枝杆菌标准株H37Rv提取基因组DNA,PCR扩增cfp10基因,克隆至T载体pMD18T,转化入大肠杆菌JM109,菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析。将测序正确的pMD18-cfp10的cfp10基因亚克隆至表达载体PQE30,构建重组质粒PQE30-cfp10,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,PCR和双酶切鉴定阳性重组体,IPTG诱导CFP10表达,亲和层析纯化,western-blot分析其免疫活性。结果:成功构建PQE30-cfp10重组表达质粒,表达、纯化获得分子量约10kDa的CFP10,并能被结核病人血清识别。结论:克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌CFP10。     

重组Calpain蛋白诱导抗体产生及检测日本血吸虫感染的研究

目的 研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫病诊断上的应用。方 法用重组Calpain蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)产生特征；同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原，粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗，肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清。结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后，产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体，免疫4周IgG类抗体达到高峰，与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1，IgG2a，IgG2b特异性抗体也显著上升；Calpain重组抗原血清检测日本血吸虫和粪检的符合率为100％，粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高，EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低，与肝吸虫的交叉反应率为37％。结论 日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白，能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白，能够敏感地测定日本血吸虫的感染，提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。     

编码日本血吸虫钙蛋白酶80kDa大亚基的cDNA的鉴定和表达

钙蛋白酶是一种钙激活的中性蛋白酶, 由80 kDa的催化亚基和30 kDa的调节亚基组成,为异二聚体,对细胞内Ca2+的结合、蛋白质修饰、信号转导及膜生物合成等起重要调节作用。本文作者克隆了日本血吸虫(Sj)钙蛋白酶80 kDa大亚基,并对其作为一种Ca2+结合蛋白的重组表达进行了分析。