严重急性呼吸综合征临床确诊病例与排除疑似病例血清学检测结果比较

严重急性呼吸综合征(SARS)作为一种呼吸道传染病，发病初期尚无客观的实验室诊断指标，给SARS准确诊断和鉴别造成很大困难，在一定程度上增加了疑似患者的范围。血清学诊断是世界卫生组织推荐的SARS病原学检测的主要方法，为临床早期诊断SARS排除疑似病例提供了帮助。我们对SARS临床确诊病例与疑似病例血清学检测结果进行分析。     

离体消化法分离原代肝星状细胞

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离方法,提高肝星状细胞分离的纯度和活力.方法:本研究主要依据Weiskirchen的方法并加以改进,灌注后即将肝脏从原位分离,随之使用0.25%的链霉蛋白酶E和0.025%的胶原酶Ⅳ消化,经DNA酶Ⅰ分散,筛网过滤、离心,将细胞沉淀用18%Nycodenz密度梯度离心,获取肝星状细胞.台盼蓝染色鉴定细胞活率,Desmin免疫细胞化学染色法鉴定肝星状细胞纯度.结果:本方法所建立的离体消化分离肝星状细胞方法,每只大鼠肝约获取2.7×107个肝星状细胞,活率、纯度分别为99%、90%.该方法可有效减少细胞污染、提高细胞活力,值得广泛应用.结论:本文所建立的大鼠离体消化法分离肝星状细胞,方法简单可行,较大程度避免了细胞污染,提高了细胞的存活率和纯度.     

液态芯片技术检测抗人类白细胞抗原抗体抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点抗体在移植肾围手术期急性抗体介导性排斥反应中的应用

目的探讨液态芯片技术(Luminex)检测移植肾受者围手术期发生急性抗体介导性排斥反应者抗人类白细胞抗原(HLA)抗体、抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点(MICA)抗体水平与影响。方法选取我院器官移植研究所2008年1月至2013年6月肾移植术后围手术期患者106例为研究对象,采用Luminex技术检测接受同种异体肾移植手术并明确病理诊断肾围手术期急性抗体介导性排斥反应患者血清中抗HLA抗体、抗MICA抗体,并同步检测血肌酐、尿量及移植肾超声等临床指标。结果参照Banff 2007标准组织病理学诊断移植肾超急性排斥反应2例,急性抗体介导性排斥反应15例,同时应用Luminex方法检测抗HLA抗体、抗MICA抗体水平,HLA抗体检测结果15例阳性,阳性率为88%(15/17),检出PRAⅠ类和Ⅱ类阳性率分别为47%(7/15)和53%(8/15);MICA抗体2例阳性,阳性率为12%(2/17),其余89例其他病理类型检测未见抗HLA抗体、MICA抗体阳性,移植肾穿刺病理结果显示HLA抗体、抗MICA抗体阳性患者C4d沉积均为阳性。结论抗HLA抗体、抗MICA抗体可预测围手术期急性抗体介导性排斥反应发生及治疗效果,对于及时诊断及治疗排斥反应提供了一个重要指标,可影响移植肾的长期存活。     

HLA-G5在健康人和肝肾移植受者体内的表达分析

目的了解国内健康人和器官移植受者体内人类白细胞抗原-G5(HLA-G5)的表达情况,并探索其表达的时间规律。方法分别采集30例健康人(健康查体正常)、50例肝移植受者(肝移植术后3个月且肝功能稳定)、50例肾移植受者(肾移植术后3个月且肾功能稳定)的外周血各3ml,并采集33例肝肾移植受者术前及术后1周、4周、12周、1年的外周血各3ml。提取血清,采用酶联免疫法(ELISA)检测HLA-G5水平。结果30例健康人中,28例HLA-G5的A值低于0.5,根据标准曲线含量为0.0ng/ml,2例分别为8、9ng/ml。50例肝移植受者HLA-G5表达阳性者16例,阳性率为32%,其中4例含量高于30ng/ml。50例肾移植受者HLA-G5表达阳性者10例,阳性率为20%,有1例含量为25ng/ml。健康人、肝移植、肾移植3组血清中HLA-G5平均含量分别为0.56±0.20、8.34±1.50和3.26±0.25ng/ml。对33例肝肾移植受者进行动态检测显示,有1例患者术前和术后1周HLA-G5呈阳性,4例术后4周阳性,12例术后12周阳性,追踪至术后1年有11例阳性。结论HLA-G5在健康人体内低表达,与器官移植免疫耐受有一定相关性。在移植后移植物接受良好的情况下,HLA-G5有不同水平的表达,肝移植受者的HLA-G5表达量高于肾移植受者。33例肝肾移植受者的动态结果证实了HLA-G5的表达从mRNA转录到蛋白表达的时间为15~60d的观点,HLA-G5的表达在第60天到达高峰,并具有稳定性。     

流式细胞技术检测肾脏移植受者pp65抗原血症的意义

背景：临床对pp65抗原的检测主要采用免疫荧光技术，但是该方法步骤繁琐，需要对标本进行人工计数，在检测过程中受人为的影响因素较多。 目的：探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒pp65抗原血症的可行性及其特点。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2007-09/2008-03在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。 材料：肾脏移植受者外周血标本145份。 方法：分离人外周血白细胞，分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒pp65抗原检测。 主要观察指标：流式细胞仪在激发波长为488 nm处的吸收峰判断阳性检出。 结果：对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测，在15例受者的25份标本中检出阳性，检出的特异性为76.0%；对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测，在5例受者的11份标本中检出阳性，检出的特异性为54.5%。使用Fisher确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验，结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：免疫荧光技术和流式细胞技术两种pp65抗原检测方法的检出效果无差异，因此可以通过流式细胞技术对pp65抗原进行检测，并且结果更加客观。     

流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值

目的探讨流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值。方法根据术后影像学和实验室检查结果,将51例首次肾移植受体分为细菌组33例、真菌组9例、BK病毒组9例;另选择肾移植术后稳定的受体28例作为稳定组。采用流式细胞术分析各组受体外周血淋巴细胞亚群比例和绝对计数。比较各组肾移植受体的肾功能、外周血淋巴细胞亚群的比例及绝对计数;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析淋巴细胞亚群比例和绝对计数在肾移植术后感染性疾病中的诊断价值。结果与稳定组相比,细菌组、真菌组和BK病毒组血清肌酐(Scr)水平和血尿素氮(BUN)水平均有不同程度升高,差异均有统计学意义(P=0.035、0.007、0.024;0.037、0.006、0.032)。与稳定组比较,细菌组和真菌组CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例均下降(P=0.036、0.015);真菌组CD4+/CD8+T细胞比例明显下降(P=0.004)。与细菌组相比,真菌组和BK病毒组的CD3+CD8+T细胞比例均升高(P=0.013、0.008),CD3+CD4+T细胞比例均降低(P=0.003、0.010),CD4+/CD8+T细胞比例均明显下降(P=0.003、0.005)。与稳定组比较,细菌组、真菌组、BK病毒组CD3+T细胞数量、CD3+CD8+T细胞数量、CD16+CD56+NK细胞数量均明显降低(P=0.025、0.002、0.003;0.015、0.005、0.006;0.001、0.001、0.031);真菌组和BK病毒组CD3+CD4+T细胞数量降低(P=0.001、0.003);BK病毒组CD19+B细胞数量明显降低(P=0.019)。与细菌组比较,真菌组CD3+CD4+T细胞数量明显降低(P=0.023)。ROC曲线分析显示,CD3+CD4+T细胞和CD16+CD56+NK细胞数量诊断真菌感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8492和0.8889;CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD19+B细胞数量诊断BK病毒感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8472、0.8452和0.8115。结论采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群可以评估患者机体免疫功能状态,绝对计数能够直观地判断免疫程度,两者结合对于肾移植受者感染性疾病的诊断和鉴别诊断具有指导意义。     

更昔洛韦对原位肝移植术后巨细胞病毒感染的预防和治疗:19例临床资料回顾

目的:巨细胞病毒感染是器官移植后的一个严重并发症,回顾性分析肝移植术后患者巨细胞病毒感染的诊断和防治方法.方法:①回顾分析2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院全军器官移植中心收治的19例肝移植受者的临床资料,供者均为健康献肝者.供者、受者对治疗方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.②术后1个月检测1次巨细胞病毒血清抗体,预防和治疗巨细胞病毒感染均采用静脉注射更昔洛韦.术后采用三联免疫抑制疗法,根据术后血药浓度及肝功能改变调整免疫抑制药物用量.③采用酶联免疫吸附法检测患者血中巨细胞病毒抗体巨细胞病毒IgG、巨细胞病毒IgM.结果:19例受者中6例发生巨细胞病毒感染,均无临床症状,并全部治愈.结论:更昔洛韦能够有效治疗肝移植术后巨细胞病毒感染.积极预防、早期治疗肝移植术后患者巨细胞病毒感染是治疗成功的关键.     

器官移植受者术后巨细胞病毒感染的监测

目的:评价外周血巨细胞病毒pp65抗原检测在器官移植受者移植术后巨细胞病毒感染监测中的价值,并与巨细胞病毒抗体检测进行对比.方法:选择2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院器官移植中心器官移植受者43例,于移植术后两三个月取外周血检测巨细胞病毒抗原和抗体.①巨细胞病毒早期抗原pp65检测:取5～7 mL外周血加入EDTA抗凝,采用间接免疫荧光方法进行,以每2×105个白细胞中发现1个或以上阳性细胞定为阳性.②巨细胞病毒特异性IgG,IgM抗体检测:取3 mL外周血,不抗凝,以间接ELISA法检测.结果:43例受试者均进入结果分析,无脱落.①43例中术后外周血巨细胞病毒早期抗原pp65阳性9例,均在检测同时或2～10d后出现明显的巨细胞病毒感染症状.②巨细胞病毒抗体IgG均为阳性,仅能说明受试者有过巨细胞病毒感染史.③巨细胞病毒抗体IgM阳性2例,检出率低于pp65抗原阳性者.结论:应用间接免疫荧光方法检测巨细胞病毒pp65抗原具有快速、特异、更易于接受的优点,适用于器官移植术后巨细胞病毒感染的监测,而巨细胞病毒抗体的检测仅能作为辅助参考.     

慢性荨麻疹患者外周血Th淋巴细胞分化取向

目的探讨慢性荨麻疹患者外周血辅助性T淋巴细胞（Th）亚群的分化取向及其在慢性荨麻疹发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测经四色荧光抗体染色的慢性荨麻疹患者及正常对照外周血CD4^＋/IFN-γ^＋Th1）、CD4^＋/IL-4^＋（Th2）细胞含量,并采集外周血单一核细胞（PBMCs）提取RNA,应用逆转录聚合酶链扩增（RT-PCR）检测Th1细胞因子受体IFN-γR mRNA表达水平。结果慢性荨麻疹组Th1细胞含量、Th1/Th2比值均明显低于正常对照组（P〈0.05）,Th2细胞含量高于正常对照组（P〈0.05）,慢性荨麻疹患者外周血单一核细胞（PBMC）中Th1细胞因子受体IFN-γR mRNA表达水平低于正常对照组。结论慢性荨麻疹患者外周血存在着Th细胞亚群分化失衡,可能是慢性荨麻疹发病的机制之一。     

化疗对肺癌患者外周血中CD4~＋ CD25~＋调节性T细胞数目的影响及意义

目的研究化疗药物对肺癌患者外周血中Treg（CD4＋ CD25＋调节性T细胞）的影响及意义。方法采集60例肺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD3＋、CD4＋、CD8＋T、NK细胞占T淋巴细胞百分比,CD4＋T/CD8＋T比值。结果化疗前NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞比率明显高于健康对照组（P〈0.05）;且Ⅳ期患者调节T细胞比率明显高于Ⅲ期患者（P〈0.05）。化疗后NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞较化疗前显著降低（P〈0.05）。化疗前后不同病理分型患者外周血中CD4＋CD25＋细胞变化差异无统计学意义。化疗后CD8＋T细胞占T淋巴细胞比例（28.129±10.900）%较化疗前（24.876±6.631）%升高（P〈0.05）。化疗后CD4＋/CD8＋（1.506±0.691）较化疗前（1.680±0.704）降低（P〈0.05）。结论肿瘤负荷可显著促进肺癌患者外周血Treg细胞分化,化疗后肺癌患者Treg细胞比例下降。