脂质过氧化对人血管内皮细胞NO合成的影响及维生素E的作用

一、材料与方法1.细胞培养 :人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)培养采用本实验室改进的Ｊａｆｆｅ培养法。经免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原阳性 ,鉴定为血管内皮细胞。2 .实验分组 :分 8组 ,第 1组为正常对照组 ;第 2组为氢过氧化枯烯 0 0 1ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 3组为氢过氧化枯烯 0 0 5ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 4组为氢过氧化枯烯 0 10ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 5组为氢过氧化枯烯 0 5 0ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 6组为氢过氧化枯烯 1 0 0ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 7组为氢过氧化枯烯 0 5 0ｍｍｏｌ/Ｌ +维生素Ｅ(ＶｉｔＥ) 5 0ｍｇ/Ｌ ;第 8组为氢过氧化枯烯 1 0 0ｍｍｏｌ/Ｌ +…     

维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用

目的：研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞（EC）诱发的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡是否具有抑制作用。方法：以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液（EC－CM）作为实验因素作用于培养的VSMC。彩和透射电子显微镜,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果：电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示,VSMC的P53蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调。加维生素E组电镜改变轻微,p53,bcl-2异常表达减轻,结果：维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞诱发的血管平滑肌细胞凋亡具有抑制作用。,     

大鼠脑微血管内皮细胞的培养

血管内皮细胞在动脉粥样硬化的发病机制中发挥重要作用。本文通过胶原酶消化、密度梯度离心等技术建立一种程序简便、经济、稳定、获得细胞纯度较高的体外分离、长期培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法。     

糖基化终末产物对巨噬细胞基质金属蛋白酶9活性的影响以及辛伐他汀的干预作用

目的研究糖基化牛血清白蛋白对巨噬细胞的活化与基质金属蛋白酶9活性的影响,并观察辛伐他汀的干预效应。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,与不同浓度糖基化牛血清白蛋白、辛伐他汀共同培养,采用明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶9活性。结果糖基化牛血清白蛋白可在体外诱发小鼠腹腔巨噬细胞形态变化。不同浓度的糖基化牛血清白蛋白(0、50、100、200、400mg/L)作用48h后,细胞培养基中基质金属蛋白酶9活性明显增强,且均明显高于对照组(n=5,P<0.05),呈剂量依赖效应。400mg/L糖基化牛血清白蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞不同时间后,作用12h时基质金属蛋白酶9活性与对照组比差异无显著性(n=5,P>0.05),作用24、36、48h时基质金属蛋白酶9活性均明显高于对照组,呈时间依赖效应(n=5,P<0.05)。加入辛伐他汀后,基质金属蛋白酶9活性明显降低。结论糖基化牛血清白蛋白可在体外活化巨噬细胞,使基质金属蛋白酶9活性增加,提示其致动脉粥样硬化及斑块破裂作用;辛伐他汀可明显降低基质金属蛋白酶9活性,说明其治疗作用的多向性。     

GM-CSF对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及VEGF的作用

目的： 研究炎性因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及血管内皮生长因子（VEGF）的作用，为探讨GM-CSF和VEGF与动脉粥样硬化斑块内血管新生及斑块稳定性之间的关系提供实验基础。方法： 在 Matrigel上诱导人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）形成管腔结构，从而建立稳定的血管形成的体外培养体系，然后施加实验因素。分别检测rhGM-CSF的浓度效应和时间效应，及加入VEGF165的作用。然后各实验组用CD34免疫细胞化学染色，光学显微镜下计数各组管腔数。最后用统计学方法进行分析。结果： 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。rhGM-CSF作用后，培养体系的管腔数逐渐增多，呈剂量及时间依赖效应；加入VEGF165后，管腔数显著增多。结论： 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。GM-CSF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成，并在一定范围内呈剂量及时间依赖效应。VEGF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成。     

急性海洛因合并地芬诺酯中毒1例报告

患者,男,32岁,已婚,初中文化,工人,住院号7746,反复吸海洛因14年,昏睡不醒5小时,于2004年5月15日下午3:20急诊入院.患者自1990年5月左右出于好奇开始吸食海洛因,曾先后在强制戒毒所戒断5次,但每次回家不到一个月又复吸,开始仅单独吸食海洛因,后随着经济来源日趋减少,以及毒品来源缺乏,常用地芬诺酯代替,两药交替使用,每日服地芬诺酯60～80片,分3～4次服用,或者吸海洛因0.5～0.8克,分3次烫吸.2004年5月14日下午5点患者吸食海洛因0.8克左右,5月15日感头晕、乏力、身体不适再次于上午10点服地芬诺酯20片,服药后一直昏睡不起,呼之不应、推之不动,而急诊入院.查:T35℃,R 5～10次/分,P 62次/分,BP 90/60mmHg,双侧瞳孔缩小,呈针尖样,呼吸浅慢,对光反射及角膜反射减弱,跟腱反射及膝反射消失,病理反射未引出,余无特殊发现.     

抑郁症的序贯治疗

抑郁症难治疗,易复发,近年来研究证实它是一种慢性衰退性、复发性障碍,尤其是难治性抑郁症,更使医者颇感头痛。积极的诊治和预防抑郁症非常重要,否则将导致抑郁病人反复发作并发展为慢性疾病,降低病人的生活质量,给病人造成身心和经济损失。本文以近年抑郁症治疗的资料为依据,结合工作体会,提出抑郁症的序贯治疗意见,以期达到抛砖引玉之目的。 一、抑郁症治疗中需强调的几个问题 1、给予足量疗程抗抑郁剂是治疗的关键,能有效减少病情的复发,合理应用丙咪嗪     

血管内皮细胞的活化或损伤诱导平滑肌细胞的增生和凋亡

一、材料与方法1.细胞培养 :采用改进的Ｊａｆｆｅ氏培养法 ,培养人脐带静脉内皮细胞。采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞并传代。培养液均为含 2 0 %胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液。2 .内皮细胞的脂质过氧化引发实验 :将培养达融合状态的内皮细胞分组 ,分别加入含不同浓度氢过氧化枯烯的培养液孵育后 ,测定脂质过氧化物的代谢终产物丙二醛 (ＭＤＡ)的含量。3.培养液中乳酸脱氢酶 (ＬＤＨ)活性的测定 :ＬＤＨ是细胞内的可溶性酶 ,当细胞膜被破坏时可漏出细胞外 ,可作为细胞损伤的早期检测指标。采取内皮细胞培养液 ,以Ｓｉｇｍａ公司的ＬＤＨ测…     

脂质过氧化损伤的内皮细胞对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究脂质过氧化损伤的内皮细胞(endothelial cell,EC)对血管平滑肌细胞(vessel smooth musclecells,VSMC)凋亡的影响.方法以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液(endothelial cell conditional medium,     

人脐带动脉中膜平滑肌细胞的培养

人脐带动脉中膜平滑肌细胞的培养张亚佳王跃中杨向红洪伟（基础医学院实验病理研究室，沈阳１１０００１）关键词中膜平滑肌；动脉；细胞培养细胞培养方法是多种实验研究中不可缺少的实验手段。本室在国内首先培养原代及继代人脐带静脉内皮细胞取得成功。为了研究血管壁细...