泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性

目的：克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛 素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法：采用PCR扩增MKK6基因启动 子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达 载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下 调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果：成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体; USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结 合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论：在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的 转录。     

关节镜下Intrafix联合Femoral-intrafix系统固定自体腘绳肌腱重建前交叉韧带的临床研究

目的探讨关节镜下应用Intrafix联合Femora-intrafix系统固定自体腘绳肌肌腱重建膝关节前交叉韧带(ACL)的临床效果。方法关节镜下应用Intrafix联合Femora-intrafix系统固定自体腘绳肌肌腱重建膝关节前交叉韧带33例,术后以膝关节的活动度、前抽屉试验、Lachman试验,参照Lysholm膝关节评分、国际膝关节文献委员会(IKDC)膝关节评分标准评价疗效。结果术前Lachman试验、前抽屉实验均为阳性。术后所有患者前抽屉实验为阴性。Lachman试验32例阴性,1例Ⅰ度阳性,术后与术前相比阳性率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。术前Lysholm评分(36.76±3.69)分、膝关节IKDC评分(27.67±4.43)分,术后Lysholm评分(91.28±4.75)分、膝关节IKDC评分(82.16±3.13)分,术后评分与术前相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Intrafix联合Femoral-intrafix系统固定自体腘绳肌腱重建前交叉韧带术中操作简易,创伤小,手术时间短,长期随访疗效满意。     

野生型stathmin 1及其C末端突变体的功能研究

目的： 研究stathmin 1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用;探讨C末端7个氨基酸残基的突变对stathmin 1生物功能的影响。方法: 构建stathmin 1克隆载体及其C末端定点突变载体。转染载体到黑色素细胞中,MTT、流式细胞仪、分光光度法等研究野生型以及突变型stathmin 1对于黑色素细胞生长以及细胞特异性功能的影响。结果: 成功构建含有野生型stathmin 1的克隆载体pAdTrack-stathmin 1及其定点突变载体pAdTrack-stathmin 1-mut;MTT法和流式细胞仪检测到突变型和野生型stathmin 1 都能有效抑制黑色素细胞生长、诱导细胞凋亡;分光光度法检测黑色素细胞特异性功能黑色素产量以及酪氨酸酶活性因stathmin 1的转染而受到明显影响。结论: Stathmin 1稳定表达对于黑色素细胞的生长有重要意义,高表达可以抑制细胞生长以及细胞特异性功能,C末端模序结构的破坏并不能影响stathmin 1的生物学功能。     

Stathmin 1 RNA干扰载体的构建及功能检测

目的 构建用于stathmin 1 RNA干扰的重组质粒并验证其干扰效果,初步探讨stathmin 1 对于黑色素细胞生长的影响.方法 两步PCR法构建含有shRNA编码序列的重组质粒,脂质体转染黑色素细胞.RT-PCR、Western 印迹等方法检测stathmin 1在黑色素细胞中表达水平改变;MTT、流式细胞仪等方法检测黑色素细胞生长状态.结果 成功构建3个stathmin 1特异性的RNA干扰载体,在黑色素细胞中能有效降低stathmin 1在mRNA水平的表达,蛋白质表达水平分别降低为对照组的6 %、17 %和15 %;黑色素细胞的生长由于stathmin 1 减弱表达而受到明显抑制,凋亡率提高到约60 %.结论 干扰质粒能有效介导stathmin 1的RNA干扰;stathmin 1对于黑色素细胞的生长具有重要意义.     

有螺洲滩封洲禁牧防制血吸虫病五年效果观察

1方法 1.1 概况 人民洲属湖北省鄂州市华容区和黄冈市团风县所共有,为湖沼型洲滩亚型血吸虫病流行区,总人口6461人,有螺面积276668 m2,曾于1988、1993和1998年3次暴发急性血吸虫病,仅1993年当年就发生急性血吸虫病36例.居民以种植油菜等早熟农作物为主,频繁往返于洲滩,大量耕牛敞放于洲滩,人畜感染和重复感染严重.2006年人群粪阳率为0.73％,家畜粪阳率为4.87％.钉螺感染率为1.24％.     

再生方治疗低危骨髓增生异常综合征临床研究

目的：观察中药再生方治疗治疗低危MDS的疗效及安全性。方法2008年2月至2010年7月低危MDS60例,按WHO诊断和分型,其中RA12例,RCMD42例,RAS2例,MDS-U 4例。随机分为再生方组与对照组,每组30例。再生方组应用再生方,水煎服,日一剂。对照组给予司坦唑醇,2 mg,3次/d,口服,或十一酸睾丸酮40 mg,2次/d,口服。治疗期间患者如有感染发热及时应用抗菌药物,贫血严重或出血明显时输注红细胞悬液或血小板,并统计血细胞输注数量。结果再生方组完全缓解3例、部分缓解3例、血液学改善14例,总有效率66 T．7％。对照组部分缓解2例、血液学改善9例,总有效率36．7％。2组疗效比较差异有统计学意义（χ2＝5．41, P ＜0．05）。细胞形态观察,中药再生方治疗低危MDS,可以使红系病态造血减轻。再生方组红细胞输注量为（15±10）U,对照组为（22±15）U,2组比较红细胞输注量差异有统计学意义（ t ＝2．18, P ＜0．05）。再生方组血小板输注量为（6±4）U（1人份为1 U）,对照组为（13±6）U,2组比较差异有统计学意义（ t ＝2．31, P ＜0．05）。再生方组4例发生不良反应,发生率为13．3％,均为轻微的消化道反应,未发现肝肾功能损害。对照组30例有20例发生各种不良反应,发生率为66．7％。2组不良反应发生率差异有统计学意义（χ2＝17．78, P ＜0．01）。结论再生方治疗低危MDS有较好疗效,有效率高于雄性激素类药物,并减少红血细胞和血小板输注,无严重不良反应。形态学观察再生方可改善红系病态造血,使红细胞和血红蛋白显著改善。     

雷帕霉素治疗28例复发性自身免疫性溶血性贫血患者疗效观察

自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是体内免疫调节功能紊乱,产生自身抗体和(或)补体结合在红细胞膜上,红细胞破坏加速而引起的一组溶血性贫血.一般糖皮质激素为首选治疗,但一些患者停用激素后很快复发或需要较大剂量的维持治疗,不少患者因为糖皮质激素的相关不良反应,难以坚持用药.雷帕霉素是近年开发应用的新的免疫抑制剂,我院2008年至2010年应用雷帕霉素治疗28例复发性AIHA患者,取得较好疗效,报道如下.     

原癌基因USP22启动子的克隆及转录活性分析

 目的克隆原癌基因USP22部分启动子序列,探讨其转录活性。方法应用cDNA 5忆末端快速扩增（5'RACE）方法定位
USP22基因转录起始点;在此基础上针对其5'端非编码区处包括转录起始点在内的-2 828~+52片段进行PCR扩增,产物克隆
入荧光素酶表达载体pGL3-Basic。重组质粒与内参质粒pRL-TK共转染HepG2 与Hela 细胞,双荧光素酶活性检测确定其转录
活性。结果成功确定USP22基因转录起始位点,酶切及测序结果证实USP22基因5'端非编码区2 880 bp 序列正确插入到荧
光素酶报告基因载体pGL3-Basic。重组质粒pGL3-USP22 promoter 转染HepG2 细胞和Hela 细胞后,检测到荧光素酶的高表达
（ P<0.05）。结论成功构建具有转录活性的USP22启动子片段,为进一步研究USP22表达调控机制奠定基础。     

Sp1真核表达载体的构建及对USP22基因转录活性的影响

目的 克隆人sp1基因,构建真核表细胞达载体pVAX-Sp1,研究其对USP22基因转录活性的影响.方法 Trizol试剂快速提取人肝癌细胞株HepG2总RNA,经RT-PCR扩增Sp1基因序列,与pVAX1真核表达载体连接;测序、酶切鉴定重组载体;pVAX1-Sp1与含USP22启动子的萤光素酶报告质粒共转染Hep...     

宁夏全球基金结核病防治措施评价

宁夏回族自治区位于我国西北地区东部 ,总人口 5 70万 ,为全国欠发达省份之一 ,2 0 0 3年 4月开始实施全球基金结核病控制项目 (下简称“项目”) ,覆盖全自治区 2 2个市、县 (区 ) ,实施一年来成绩显著 ,现将项目实施情况总结如下。1　资料与方法资料来源于 2 0 0 3年 4月 1日— 2 0 0 4年 3月 31日各项目执行单位的季报表。实施方法严格按照《中国结核病防治规划实施工作指南》要求进行。2　结果2 .1.　病例发现　全区共接诊可疑患者 2 5 4 5 3例 ,可疑者就诊率为 4 .4 7‰ ,拍X线胸片 80 6 3例 ,活动性肺结核患者 2391例 ,初诊查痰 115 9…