汉滩病毒体外诱导热休克蛋白70的表达

目的定量研究汉滩病毒（HTNV）体外诱导细胞热休克蛋白70（HSP70）及HSP70 mRNA的表达规律。方法以HTNV敏感细胞株Vero-E6为对象，体外实验性感染Hantaan 76—118。采用原位杂交、免疫细胞化学染色法及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察感染后72h内HSP70的表达并加以定量分析。结果与模拟感染组相比，Hantaan 76—118感染Vero-E6细胞后0．5h，HSP70 mRNA开始升高，于感染后12h达高峰，并持续高表达至72h（P＜0．05）。Hantaan 76—118感染后2h可检测到HSP70蛋白表达增加，于感染后12h达高峰，并持续高表达至72h（P＜0．05）。结论体外感染HTNV可诱导Vero-E6细胞产生热休克反应并表达HSP70，这种快速、持久的应激反应，可能对HSP70持续发挥其细胞保护作用具有重要意义。     

抗体工程与病理学

结合抗肝癌基因工程抗体的制备，概述了抗体工程的工作内容及其与病理学的关系，抗体工程的主要目的之一是制备人的或接近人的，而能在病人体内应用的抗体，一方面它可以来源于单克隆抗体的改造，首先克隆出鼠抗体可变区的轻链及重链成为小抗体或重组成单链抗体及人鼠嵌合抗体等基因工程抗体。另一方面，也可以用免疫过的小鼠脾细胞或者人的淋巴细胞建立鼠、人抗体库，然后抗原从抗体库中筛选出鼠或人的各种类型抗体。鉴于抗体对靶细胞一般只起导向作用，要携带效应分子才发挥杀伤肿瘤细胞的作用或其它作用。常用的“弹头”有毒素及细胞因子等。所以必须将这种基因与抗体基因融合在一起才能表达有作用的融合蛋白。抗体工程还包括抗体的增效或抗体的成熟，以及对照人抗体的结构进行置换，使抗体人源化等。     

先天性脊柱畸形手术治疗的总体疗效与并发症

目的:评估先天性脊柱畸形手术治疗的总体效果和并发症。方法 :回顾性分析2007年4月～2018年1月本团队手术治疗的431例先天性脊柱侧凸患者,其中男158例,女273例,平均年龄14.9±6.2岁。术前均行全脊柱CT平扫和全脊柱MRI,排查椎管内畸形情况;心脏彩超和腹部B超检查排除其他内脏畸形。手术方式包括:生长撑开型非融合矫形技术(包括生长棒和人工钛肋)治疗40例,后路半椎体切除短节段固定融合术48例,后路长节段矫形固定融合术(可含1、2级截骨)89例,后路截骨(3级及以上截骨)矫形长节段固定融合术254例。每位患者均于术后3个月、6个月、1年和2年及以上时间进行随访。术前、术后及随访时均拍摄站立位全脊柱正侧位X线片,测量脊柱侧凸Cobb角、矢状面平衡(sagittal vertical axis,SVA)及冠状面平衡(C7PLCSVL)。统计手术时间、术中出血量和手术并发症情况。结果:431例患者合并椎管内畸形351例次、合并其他内脏畸形24例次。平均手术时间为412.4±150.6min,平均术中出血量为1879.9±1727.6ml,平均随访时间48.7±9.3个月。脊柱侧凸术前平均Cobb角为68.88°±27.55°,术后平均Cobb角为28.86°±18.90°,末次随访时30.77°±19.80°;SVA术前平均为22.15±19.37mm,术后24.15±22.22mm,末次随访时19.75±16.06mm;C7PL-CSVL术前平均为17.37±15.47mm,术后21.95±47.29mm,末次随访时13.03±12.39mm,末次随访的脊柱侧凸Cobb角和C7PL-CSVL与术前比较均有统计学差异(P0.05)。术后肺部并发症49例、神经并发症30例、内固定相关并发症20例、术后感染10例以及脑脊液漏8例。结论:先天性脊柱侧凸手术矫形效果良好,但手术相关并发症风险较高,术后并发症总体发生率为30.16%,其中肺部并发症和神经并发症最为常见。     

脊柱截骨术治疗合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸

目的:探讨脊柱截骨术治疗合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸的安全性和有效性。方法:回顾性分析2007年6月~2013年6月在我院采用脊柱截骨手术治疗的23例合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸患者。其中男6例,女17例;手术时年龄16.9±3.4岁(10~23岁)。腰骶部疼痛8例,其中5例仅表现为腰骶部疼痛,神经功能损害18例。术前冠状位Cobb角95.4°±25.2°(65°~156°)。Ⅰ型脊髓纵裂9例,Ⅱ型脊髓纵裂14例。脊髓圆锥位置均在L3水平以下。对合并Ⅰ型脊髓纵裂伴脊髓拴系的患者,采用骨性纵隔切除、一期脊柱截骨矫形;合并Ⅱ型脊髓纵裂伴脊髓拴系的患者单纯行一期脊柱截骨矫形(未处理纤维纵隔)。其中行全脊椎截骨13例,经椎弓根截骨10例。术前、术后3个月和末次随访时分别测量患者侧凸Cobb角,并按脊柱裂神经功能评分(SBNS)分级评估神经功能恢复情况。结果:手术时间571.1±136.5min(310~835min);术中失血量4888.3±2482.3ml(500~9600ml)。随访38.9±18.3个月(24~79个月)。术后冠状面Cobb角33.7°±15.9°(3°~73°),较术前明显改善(P0.05),矫正率平均为(62.3±14.1)%;末次随访时冠状面Cobb角37.4°±17.2°(5°~82°),矫正率平均为(58.1±14.7)%,较术后平均丢失4.2°±2.3°,与术后比较无明显矫形丢失(P0.05),但与术前相比有明显改善(P0.05)。末次随访时,18例患者神经损害症状获得不同程度改善,其中13例术前SBNS神经功能分级为Ⅱ级者术后恢复至Ⅰ级;2例Ⅲ级恢复至Ⅱ级;另外3例神经损害评分提高,SBNS分级维持不变,脊柱侧凸畸形及局部疼痛明显好转。围手术期出现并发症5例,其中2例术后出现单侧下肢肌力下降,1例术后2周下肢肌力恢复至4级,另1例于术后3个月恢复至术前水平,术后2年随访肌力基本恢复正常;术中发现胸膜破裂1例,术后脑脊液漏1例、泌尿系感染1例。所有病例术后无伤口感染、假关节形成、内固定松动/断裂及永久性神经损害并发症。结论:脊柱截骨术治疗合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸患者安全有效,且对神经功能恢复有促进作用。     

汉坦病毒体外感染Vero-E6细胞诱导多种热休克蛋白的表达

目的：观察汉坦病毒（HV）体外感染非洲绿猴肾上皮细胞（Vero-E6细胞）诱导热休克蛋白（HSP）的表达并探讨其与病毒结构蛋白的相互关系。方法：采用HV76-118株体外实验性感染Vero-E6细胞,随机分为对照组和病毒感染组,运用免疫细胞化学染色、Western blot及双特异性抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）,观察HV感染后HSP27、HSP70、葡萄糖调节蛋白（Grp94）3种HSP的表达情况,并分析上述HSP与病毒核衣壳蛋白（NP）之间的相互关系。结果：HV76-118株感染Vero-E6细胞24 h后,免疫细胞化学染色法可检出HV-NP阳性信号。Westernblot结果表明,与对照组相比较,HSP27、HSP70、Grp94的表达水平在感染后24 h显著升高（P〈0.05,n=5）。更为重要的是,ELISA检测发现HV-NP同时与HSP27、HSP70、Grp94呈复合物形式存在。结论：HV体外感染可诱导Vero-E6细胞高表达多种HSP,且能与病毒结构蛋白形成复合物,上述过程可能参与了HV-宿主细胞的相互作用。     

乳腺癌组织NRF-1表达及其意义的探讨

目的:探讨乳腺癌组织中核呼吸因子-1(NRF-1)蛋白表达与乳腺癌发生、发展及临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化EnVision二步法,对211例乳腺癌组织和50例乳腺良性病变组织中NRF-1蛋白表达进行检测。结果:NRF-1蛋白表达定位于细胞核,着色呈棕黄色,乳腺癌中阳性表达(82.7%)低于乳腺良性病变组织阳性表达(100%),χ2=100.288,P=0.000;高分化乳腺癌NRF-1阳性率明显高于中、低分化乳腺癌(χ2=16.242,P=0.001;χ2=72.802,P=0.000),中分化乳腺癌也明显高于低分化乳腺癌,χ2=30.190,P=0.000。乳腺癌淋巴结转移患者NRF-1蛋白阳性表达率明显低于未转移者,χ2=12.025,P=0.007;TNM分期中I期NRF-1蛋白阳性表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ期,χ2=12.025,P=0.007。结论:NRF-1蛋白的表达可能与乳腺癌的发生发展密切相关,可作为乳腺癌患者疾病进展监控和预后观测的指标,具有临床应用价值。     

核呼吸因子-1和Ki-67在乳腺癌组织中的表达及意义

探讨核呼吸因子-1（NRF-1）蛋白表达与乳腺癌发生发展、临床病理特征及Ki-67的关系。方法:采用免疫组化EnVision二步法,对211例乳腺癌组织、50例乳腺良性病变组织中NRF-1和Ki-67进行检测。结果:NRF-1表达定位于细胞核,在乳腺癌中表达率为87.2%,低于乳腺良性病变组织的100%（χ2=100.288,P<0.001）;高分化乳腺癌NRF-1表达率明显高于中、低分化乳腺癌（χ2=16.242,P=0.001;χ2=72.802,P<0.001）,中分化乳腺癌也明显高于低分化乳腺癌（χ2=30.190,P=0.000）。乳腺癌淋巴结转移患者NRF-1表达率明显低于未转移者（χ2=12.025,P=0.007）;TNM分期中I期NRF-1表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ期（χ2=12.025,P=0.007）。211例乳腺癌中Ki-67表达率为78.7%,Ki-67表达与NRF-1（χ2=42.914,P<0.001）、病理组织学分级（χ2=40.239,P<0.001）、淋巴结转移（χ2=16.061,P=0.001）和TNM分期（χ2=13.589,P=0.004）间比较差异有统计学意义。结论:NRF-1参与了乳腺癌的发生发展,也与Ki-67表达有相关性,可作为乳腺癌患者疾病进展监控和预后观测的指标,有可能成为乳腺癌新的治疗靶点。      

抗体工程与病理学

抗体是一种免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）。抗体工程指的是抗体的人工改造、构建与重组。如同桥梁工程、水力工程是人力对桥梁及水力的构建与改造一样。抗体工程可以分为两种，一种是抗体化学工程，如抗体的标记，抗体与亲合物质结合以及EnVision法等。一般所谓抗体工程是指抗体的基因工程，是通过基因操作、扩增、酶切、连接、构建以及重组来实现的。乍看起来，抗体工程与病理学，特别是诊断病理学，并不那么亲切。但是，实地考查起来，它们之间也不那么遥远，而且随科学的发展，正让它们越走越近。     

不同浓度离子作用于颈动脉小体对血压的影响

背景:颈动脉窦存在压力感受器,是离子对血压调节最敏感的部位,在血压的调节中起到重要的作用,但不同离子通过颈动脉窦对血压的调节作用还不十分清楚。目的:观察用不同浓度、不同离子浸泡颈动脉窦后血压的变化。设计:自身对照实验。单位:解放军第四军医大学基础部教学实验中心。材料:实验于2000-12/2001-06在解放军第四军医大学基础部教学实验中心机能实验室完成。选取纯种新西兰兔18只,实验动物标准为二级,雌雄不限,体质量(2.0±0.2)kg,由解放军第四军医大学动物实验中心提供。方法:采用随机数字表法将白兔分为Na 组、K 组和Ca2 组,每组6只。将家兔麻醉后,气管插管,分离两侧颈动脉,一侧分离出颈动脉窦,另一侧进行血管插管并记录血压,用加液枪于颈动脉窦外分别由低浓度到高浓度滴加Na 、K 和Ca2 溶液,将颈动脉窦完全浸泡;记录每次加液前血压的基础值和加液后血压变化的峰值。主要观察指标:家兔颈动脉血压的基础值和加液后血压变化的峰值。结果:0.15,1.5mol/L的高浓度Na 加液后血压为(97±12),(83±17)mmHg,与基础值(106±14),(105±12)mmHg比较有显著的降血压作用(t=2.946,P<0.05);0.4mol/L的高浓度K 有显著的降血压作用[(106±12),(64±13)mmHg,(t=13.496,P<0.01)],其他浓度的K 降血压作用不明显(P>0.05);0.07mol/L的低浓度Ca2 加液后血压为(113±16)mmHg,与基础值(103±12)mmHg比较有显著的升血压作用(t=-3.627,P<0.01)。结论:Na 、K 和Ca2 可以通过直接作用于颈动脉窦调节血压。高浓度的Na 、K 具有降压作用,低浓度的Ca2 具有升压作用,这可能是血压调节的一种重要机制。     

热休克蛋白70、葡萄糖调节蛋白94和IgG在人肺癌组织中的表达

目的:探讨热休克蛋白70(Hsp70)、葡萄糖调节蛋白94(Grp94)、IgG在人肺癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学方法结合病理学图像分析系统研究40例肺癌组织中Hsp70、Grp94和IgG的表达.并用免疫荧光双标染色及激光共聚焦技术研究三者的定位关系.结果:人肺癌组织中Hsp70、Grp04、IsG都有高表达,阳性率分别为65%(26/40)、45%(18/40)和82.5%(33/40),Hsp70阳性定位胞核胞质,Grp94和IgG阳性定位主要在胞质,平均光密度值分别为(5.10±0.32)、(3.52±0.35)和(8.12±0.31).26例Hsp70阳性的肺癌病例中有10例与IsG有共定位关系,18例Grp94与IgG有共定位关系.结论:Hsp70、Grp94和IgG在肺癌组织中高表达,提示三者在肺癌的发生发展中起重要作用;肺癌肿瘤细胞表达的ISG与rap70、Grp94分别存在一定共定位关系,其在肿瘤的发展中可能具有协同作用或者在肺癌组织中存在Hsp70-IgG、Grp94-IgG和Hsp70-GW94-IgG复合物的形式.