IL-15联合肿瘤全细胞疫苗抗小鼠结肠癌的实验研究

目的 研究IL-15能否协助肿瘤全细胞疫苗诱发有效的抗肿瘤免疫反应.方法 建立小鼠皮下CT26结肠癌模型,将32只荷瘤小鼠随机分为4组:对照组(200 pL PBS)、CT26疫苗组(200 μL细胞疫苗,含2×106细胞)、mIL-15组(200 μL脂质体-质粒DNA复合物,含20 μg pORF9-mIL-15质粒)和CT26十mlL-15联合治疗组C100 μL脂质体-质粒DNA复合物(20 μg pORF9-mIL-15质粒)和100 μL细胞疫苗(2×106细胞)].阳离子脂质体按3:1的比例包裹真核表达质粒pORF9-mIL-15制成纳米复合物.各组小鼠采用皮下多点注射的方式进行治疗,定时观察各组小鼠肿瘤生长情况并测量肿瘤体积.实验结柬时取肿瘤进行组织病理学观察及肿瘤组织原位凋亡检测.结果 CT26十mIL-15组小鼠肿瘤的生长受到抑制.抑瘤率为45%,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织病理学分析显示CT26十mlL-15组小鼠肿瘤内部坏死区域较其他3组明显增多;肿瘤组织原位凋亡检测显示CT26+raiL-15组小鼠肿瘤内部细胞凋亡增多,凋亡指数为(46.7±7.2)%,与对照组(4.9±1.4)%、CT26疫苗组(5.4±1.4)%和mlL-15组(15.6±4.2)%比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 IL-15能够增强全细胞疫苗的免疫治疗效果.     

DNA修复酶MGMT的研究进展

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）是一种高效的DNA直接修复酶,能修复烷化剂所致的DNA损伤。该酶的结构、功能的异常与肿瘤的发生及特征都有密切关系。本文就近几年对DNA修复酶MGMT的研究和它在肿瘤诊断与治疗中的应用作一综述。     

新基因AY358935的生物信息学分析及功能预测

目的对新基因AY358935的功能性质进行生物信息分析,为深入研究该基因功能奠定基础。方法利用生物信息学分析软件,分析新基因AY358935及其编码蛋白的性质、定位、结构、表达谱等特征,并根据相关信息预测其生物学功能。利用Western blotting检测病毒感染早期AY358935的表达变化。结果AY358935基因进化保守,与马、小鼠、斑马鱼、非洲爪蟾的相似性分别为74%、60%、38%、33%。亚细胞定位于线粒体的可能性大。含有一个N末端信号肽序列和单次跨膜结构,多个磷酸化位点,二级结构主要是α螺旋和无规则卷曲。在正常组织和癌组织表达广泛,并受双链RNA依赖蛋白激酶的表达调控。AY358935蛋白表达在水泡性口炎病毒感染2h后即明显上调。结论初步预测AY358935为具有重要功能的小分子分泌蛋白,可能参与细胞增殖和抗病毒天然免疫调控。     

小鼠骨髓间充质干细胞在体外对淋巴细胞增殖和凋亡的影响

骨髓间充质干细胞(MSC)是骨髓基质祖细胞,具有多向分化潜能,可应用于各种组织的修复和重建。MSC同时还具有调节免疫系统的作用。在体内及动物实验中,MSC可以减少移植物抗宿主病的发生率并减轻其严重程度。能够延长皮肤移植物的存活时间。国内也有资料显示MSC能够抑制脐血淋巴细胞的转化。但MSC对淋巴细胞的免疫抑制作用机制尚不清楚。我们对此进行了探索。     

非洲爪蟾肝脏肿瘤cDNA表达文库异种同源抗原的筛选

目的:通过重组cDNA文库的血清学筛选(SEREX)技术获得来自非洲爪蟾(Xenopus laevis)肝脏肿瘤文库中具有潜在治疗价值的异种同源抗原的cDNA序列.方法:用人肝癌细胞株SMMC-7721免疫家兔后收集的抗血清作为筛选血清,采用SEREX技术筛选Xenopus laevis肝脏肿瘤cDNA表达文库.结果:通过两轮筛选获得19个阳性克隆,通过DNA序列测定和分子生物学技术确定这19个克隆编码16个蛋白.其中Transgelin 2、RAS guanyl releasing protein 1和Chromobox protein homolog 6可能与肝细胞肝癌有关.结论:用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了SEREX 技术的应用范围,鉴定Transgelin 2、RAS guanyl releasing protein 1和Chromobox protein homolog 6可能为异种同源抗原.     

P2z/P2x7受体检测的研究进展

P2z/P2x7嘌呤能受体是P2受体的一个亚型 ,存在于多种细胞膜上 ,有其特异的激动剂和拮抗剂。P2z/P2x7受体功能独特 ,如参与炎症和免疫反应 ,介导细胞死亡等。检测P2z/P2x7受体的方法很多 ,包括荧光染料法、分子生物学方法及免疫学方法等。其分析方法与原理各不相同 ,特点各异。本文将对检测P2z/P2x7受体的方法及其研究进展予以综述。     

真核表达人和鼠可溶性VEGFR 2的双基因疫苗的构建及抗肿瘤实验研究

目的 构建能同时表达人和鼠可溶性VEGFR2的双基因真核表达载体.并初步验证其功能.方法 分别以pORF-hVEGFR2和pORF-mVEGFR2为模板,通过PCR将人和鼠的sVEGFR2基因定向克隆人真核细胞双顺反子载体pVITR02的多克隆位点区.构建pVITRO2-hm-sVEGFR2双基因表达质粒.通过体外实验研究pVITRO2-hm-sVEGFR2的表达产物能否阻断VEGF对脐静脉血管内皮细胞的促增殖能力,体内实验建立小鼠B16肿瘤模型研究其抗肿瘤活性,CD31免疫组化染色检测其对肿瘤新生血管的抑制情况.结果 pVITR02一hm-sVEGFR2双基因表达质粒成功构建,体外能阻断VEGF对血管内皮细胞的促增殖能力,能明显抑制肿瘤在小鼠体内的生长以及肿瘤组织内的新生血管生成,其抑制作用大于人或鼠可溶性VEGFR2单基因治疗方案.结论 pVITRO2-hm-sVEGFR2明显抑制新生血管生成活性,是一种新型的抗血管生成DNA疫苗,为抗肿瘤治疗研究提供了新的思路和方法.     

大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选

目的 通过重组cDNA表达文库的血清学分析(SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的cDNA序列。方法 将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清,采用SEREX技术筛选大鼠睾丸cDNA文库。结果 通过两轮筛选获得10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这10个阳性单克隆cDNA序列编码7种不同的蛋白,其中OV-2、OV-4为肿瘤相关序列,OV-6、OV-7为编码未知蛋白的序列。结论 用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了SEREX技术的应用范围,是一种行之有效的方法。     

FUS1和IL-12双基因真核共表达质粒的构建及对A549细胞促凋亡作用研究

目的 构建FUS1和人IL-12双基因真核共表达质粒并在肺癌A549细胞中检测基因表达及诱导细胞凋亡作用.方法 采用RT-PCR技术从人肺成纤维细胞MRC-5中逆转录扩增全长FUS1基因,通过PCR技术从pORF-hIL-12质粒中扩增含双亚基的全长IL-12基因.FUS1和IL-12分别经酶切后定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点中,酶切和测序鉴定双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12的构建.以pVITRO2-FUS1-IL-12转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR、ELISA 和Western blot方法 检测目的 基因的表达,以Hoechst33258染色及流式细胞术验证pVITRO2-FUS1-IL-12在体外的促凋亡作用.结果 酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达质粒 pVITRO2-FUS1-IL-12,在转染后的细胞中同时检测到了FUS1和IL-12的表达,两种基因在双基因表达载体上的表达量基本不受影响.双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12具有明显诱导肺癌细胞凋亡的作用.结论 成功构建pVITRO2-FUS1-IL-12双基因真核共表达质粒,为肺癌的多基因联合治疗提供了又一新的思路和方法.