利用酵母双杂交技术筛选鉴定STCH与RanBP9的相互作用

以人应激和分子伴侣蛋白(STCH)为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术在高严格条件下筛选人脑cDNA文库。在SD/-4培养基上共获得156个阳性克隆,将酵母菌扩增后抽提质粒,转化大肠杆菌,进行序列分析,并经过回复杂交验证,潜在的与STCH相互作用的蛋白有:VDAC、MBP2、ZNF251、RanBP9、Phosophate glycolase、β-tubulin、up1、up2和WW adaptor蛋白。基于各候选蛋白与神经系统疾病的关系,选择RanBP9作进一步验证实验。经体外GST-Pulldown和体内免疫共沉淀实验证实RanBP9和STCH能够相互作用,明确RanBP9的羧基端为相互作用的最小功能域。此结果为我们进一步揭示STCH作用的分子机制提供了线索。     

PCR介导化学合成广谱细胞生长因子基因半分子

目的建立一种通过PCR介导的单链法人工合成基因的新方法.方法采用固相亚磷酰胺法,化学合成广谱细胞生长因子基因5′端半分子各寡核苷酸片段,其间按搭桥方式相接,通过重叠PCR扩增的方法以获得全长半分子基因,再通过带酶切位点的两端引物扩增,以获得大量特异的半分子基因,而后克隆,测序,筛选阳性重组子.结果随机检测4个阳性重组子,有3个序列完全正确,一个有一位点突变.结论 PCR介导的单链化学合成法是一种简单、有效的人工合成基因的新方法.     

人工合成广谱细胞生长因子全基因

目的利用PCR介导的半酶促半化学法人工合成经改造的广谱细胞生长因子基因.方法将基因依据其限制性内切酶切点分为左中右三个区段.化学合成若干寡核苷酸小片段,利用PCR的方法介导寡核苷酸小片段之间的连接.最后将三条基因区段组合为完整的基因.结果各区段及全基因的序列经测定与设计方案完全相符.结论广谱细胞生长因子基因的成功合成为将来的表达与应用研究创造了条件,同时证明PCR介导的人工基因合成法是一种简便快速并且行之有效的人工基因合成的新方法.     

甲状腺素对仔鼠脑NAPOR基因表达的影响

目的研究甲状腺素对仔鼠脑成纤维母细胞瘤凋亡相关的RNA结合蛋白(neuroblastoma apoptosis-related RNA-binding protein,NAPOR)基因表达的影响。方法以丙基硫氧嘧啶灌胃复制孕鼠甲状腺功能低下模型,采用逆转录-聚合酶链反应检测仔鼠出生后第1、5、10天仔鼠皮层NAPOR的表达,年龄匹配的正常仔鼠为对照组。结果NAPOR在甲状腺功能低下孕鼠所产仔鼠表达均高于正常对照组;在出生后一段时期内,随着鼠龄增长表达降低。结论转录后水平的调节机制可能参与甲状腺素对脑基因表达的影响。     

TMEFF2基因对SH-SY5Y细胞增殖的影响

目的探讨TMEFF2基因过表达对体外培养SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法克隆全长的TMEFF2基因,连接入pEGFP-N2载体。以脂质体包裹重组质粒转染SH-SY5Y细胞。在细胞中可表达生成TMEFF2-EGFP融合蛋白。经G418筛选,建立TMEFF2过表达细胞株,同时筛选作为对照的pEGFP-N2稳定转染细胞株。MTT法测定TMEFF2过表达细胞株和pEGFP-N2稳定转染细胞株以及SH-SY5Y细胞增殖。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-TMEFF2,并筛选得到稳定表达细胞株。在细胞接种密度较高时,TMEFF2过表达细胞株的增殖较pEGFP-N2稳定转染细胞株以及SH-SY5Y细胞株均明显降低。结论TMEFF2基因可以抑制SH-SY5Y细胞的增殖,且抑制作用具有明显密度依赖性。     

新生大鼠小脑内发育相关基因的筛选

为筛选脑发育相关的基因,应用新发展的抑制消减杂交技术,以新生大鼠小脑mRNA逆转录cDNA作为测试者(tester),成年大鼠小脑mRNA逆转录cDNA作为驱动者(driver),进行消减杂交,克隆制备成新生大鼠小脑高表达的cDNA文库.挑选出50个重组质粒,测序得到37个不同基因片段序列.再次用反Northern杂交确认有意义的差异表达基因.同时将测序结果与GenBank注册序列进行同源性比较,20个大鼠中首次测得的基因表达序列标签(EST)已被GenBank收录(BG695726-BG695745).     

人膜相关蛋白TEB4的结构及其E3连接酶活性

TEB4(MARCH Ⅳ)是酵母Doa10的同源体,作为E3连接酶参与内质网相关蛋白的降解。TEB4和酵母Doa10定位于内质网上,包含一个环指域和多个跨膜域。这个环指结构位于蛋白的N端,具有特殊的C4HC3结构。在泛素结合酶UBC7参与的底物第48位赖氨酸特异点的泛素化反应中,分离开的环指域在细胞液中催化泛素的连接。这些特性与E3酶有关,E3酶是参与内质网相关蛋白降解的重要酶。和一些E3连接酶一样,TEB4可能参与神经退行性病变的调节。     

W基因组织表达的特异性

目的Ｗ基因是利用周围神经髓鞘蛋白ＰＭＰ－２２基因的编码区５′－及３′－序列为引物，藉ＰＣＲ方法自人脑胶质瘤ｃＤＮＡ文库中扩增的一个基因片段，本实验研究Ｗ基因组织表达的特异性。方法搜集不同组织来源的肿瘤及正常脑组织标本，行ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＮＡ斑点杂交检测。结果在非神经组织来源的肿瘤及正常脑组织中未检出Ｗ基因表达，在一例星形胶质瘤Ⅲ级组织可检测到Ｗ基因表达。ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＮＡ斑点杂交结果一致。结论提示Ｗ基因表达可能具有组织特异性。     

超声在肝癌门静脉癌栓诊断中的价值

目的 探讨超声在肝癌门静脉癌栓诊断中的价值.方法 回顾性分析大理学院附属医院72例肝癌门静脉癌栓患者超声检查资料,观察在超声检查中肝癌所发生的部位、门静脉内部回声特征及血流特点.结果 肝癌门静脉癌栓发生率为30％,主干及左支是其好发部位,且在超声中回声的特点均为低回声、内部回声欠均匀声像,充满型癌栓可见不规则线状或星状血流信号,约占20％,其中癌栓所在支血流完全中断占80％.10例孤立型癌栓附着处彩色血流信号充盈缺损,血流束变细,其血流速度明显加快,与CT、磁共振成像(MRI)影像学检查结果比较,超声检查敏感性较高.结论 超声在肝癌门静脉癌栓诊断中起重要作用,可在临床推广应用.     

乳腺黏液腺癌中超声与X线检查诊断价值的比较

目的：探讨超声与X线两种检查方法对乳腺黏液腺癌的诊断价值。方法：回顾性收集本院先后行术前超声检查和X线检查,手术治疗并经术后病理学确诊的44例黏液腺癌患者。结果：44例病例中,30例为单纯型黏液腺癌,14例为混合型黏液腺癌;超声诊断癌灶者40例,诊断准确率为90.90%,乳腺X线诊断为癌灶者共26例,诊断正确率59.09%,超声诊断准确率明显高于X线（P=0.039）。结论：乳腺超声检查诊断的准确性高于X线。