胰十二指肠同源框基因-1在骨髓来源nestin阳性细胞的转染及表达

目的 将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率.方法 将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48 h用RT-PCR检测目的 基因的表达情况.结果 质粒2～10 μg获得最佳的转染效率,提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率.RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin阳性细胞有PDX-1表达.结论 通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞的效率,为其成为组织工程的种子细胞提供了实验依据.     

ω-3鱼油脂肪乳剂对肠梗阻患者肠通透性及细菌移位的影响

【摘要】 目的 ω-3鱼油脂肪乳剂对其肠粘膜通透性及细菌移位的影响。 方法 90例肠梗阻患者随机分为治疗组和对照组。对照组按照常规治疗方法,如禁食、胃肠减压、全胃肠外营养、应用抗生素以及纠正水电解质和酸碱平衡紊乱。治疗组在对照组的基础上加用ω-3鱼油脂肪乳剂。检测比较两组病例入院时、治疗后第3日、第7日的常规指标、免疫学指标,采集两组患者外周血进行血浆谷氨酞胺(Gln)浓度和全血细菌DNA检测,同时进行尿中乳果糖/甘露醇(L/M)比值测定。 结果ω-3鱼油脂肪乳剂治疗组血糖升高幅度明显降低(P<0.05),血清白蛋白(ALB)、血清前白蛋白(PA)、血清转铁蛋白(TF)恢复性升高(P<0.05);早期IgA水平较对照明显增高(P<0.05)。另外对照组尿乳果糖/甘露醇(L/M)比值、外周血中细菌DNA阳性率高于治疗组(P<0.01),而血浆谷氨酰胺浓度低于治疗组(P<0.01)。 结论 ω-3鱼油脂肪乳剂使用具有维护肠梗阻患者肠粘膜屏障功能、减少细菌移位、减少并发症起着重要的作用。     

两种先天性巨结肠根治术疗效的对比研究

目的：探讨改良Swenson术和经肛Soave术在先天性巨结肠（Hirschsprung’sdisease,HD）的疗效方面的优劣性。方法：回顾分析1999年10月-2010年2月我院107例HD根治术的临床资料,根据手术方式的不同分为A组（改良Swenson术,共62例）和B组（经肛Soave术,共45例）,统计分析两组的出血量、手术时间、术后禁食时间、术后住院时间及术后肠粘连、小肠结肠炎、切口感染、吻合口瘘、污粪、复发等并发症的发生率。结果：A组的出血量（t=2．63,P〈0．05）、手术时间（t=2．08,P〈0．05）、术后禁食时间（t=2．89,P〈0．05）、术后住院时间（t=1．94,P〈0．05）及术后肠粘连（χ2=-9．33,P〈0．05）、切口感染（χ2=-9．19,P〈0．05）、吻合口瘘（χ2=4．37,P〈0．05）、污粪（χ2=-7．72,P〈0．05）发生率均明显大于B组,其余差异无统计学意义。结论：经肛Soave术在疗效上优于改良Swenson术,但适应证小。术后污粪可能与肛管直肠角的改变有关。     

大鼠近交系间原位肝移植急性排斥模型的建立与评价

背景：目前国内常用的封闭群品系大鼠(SD与Wistar大鼠)所建立肝移植急性排斥模型并不理想,易产生肝移植耐受。 目的：通过二袖套法建立稳定的DA-Lewis大鼠原位肝移植急性排斥模型。 方法：实验分为两组：同基因组：Lewis-Lewis 24例;异基因组：DA-Lewis 24例。观察移植后一般情况及移植后存活时间,两组受体分别于移植后3,5,7,10 d随机取3只处死取标本,观察肝脏组织病理变化,测定天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平变化。 结果与结论：同基因组大鼠无急性排斥反应表现,中位生存时间超过100 d,肝脏组织发生轻度形态学改变。异基因组大鼠移植后黄疸明显,中位生存时间为11 d,移植后第7天肝脏组织病理表现典型急性排斥反应(Banff国际标准)。同期相比异基因组天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平均高于同基因组(P < 0.001)。提示,DA-Lewis是稳定的大鼠肝移植急性排斥模型,是研究肝移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型。     

大鼠肝移植术后受体骨髓间充质干细胞输注肝内示踪与标记方法比较

目的采用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescin diacetate succinimidyl ester,CFSE）与溴化脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine,Brdu）两种细胞标记物观测肝移植术后受体骨髓间充质干细胞（MSCs）肝内分布情况,并对两种方法进行比较。方法在已构建的DA-Lewis大鼠原位肝移植模型及提取培养Lewis大鼠MSCs的基础上分别用CFSE和Brdu对Lewis来源的MSCs进行标记．术中经门静脉输注．通过荧光显微镜和免疫组织化学法观测术后2mo内各时间点受体肝组织内MSCs的分布情况。结果CFSE细胞标记率约为（94．1±1．4）％。受体肝组织第1、7、14天内有CFSE标记的MSCs聚集,对照组第5天肝组织内发布的CFSE标记MSCs消失。Brdu细胞标记率约为（90．3±3．5）％。受体肝组织第14天、1个月、2个月可见Brdu阳性的MSCs分布,对照组相应时间点肝组织内未发现Brdu阳性的MSCs。结论CFSE和Brdu均为MSCs的良好标记物。CFSE标记细胞后荧光迅速减弱,适用于短期示踪。Brdu标记细胞后可维持较长时间．适用于长期示踪。两种标记方法均是MSCs较为简单有效的方法,实验显示受体MSCs大部分分布于移植肝脏。     

先天性胆总管囊肿65例分析

目的探讨先天性胆总管囊肿的诊断方法、手术方式及治疗效果。方法65例均常规行二维B型超声检查及CT检查,部分行三维彩色B型超声检查及磁共振胰胆管造影（MRCP）,均得到明确诊断;再根据患儿的全身情况分别采用外引流术、内引流术及囊肿切除、胆道重建术,术后常规禁食、输液、抗炎、营养、支持治疗。结果65例患儿均痊愈出院,其中4例出现上行性胆管炎经抗炎及二次手术后痊愈出院。远期随访51例无吻合口狭窄和其他远期并发症,均达到良好效果。结论B型超声检查、CT检查及MRCP是诊断先天性胆总管囊肿的重要手段,囊肿切除、胆道重建术是治疗先天性胆总管囊肿的最佳术式。     

标记后转输的凋亡细胞流式细胞术体内示踪方法

目的 探索一种可用于转输凋亡细胞体内示踪研究的方法。方法 首先对分离所得活细胞进行（CFSE）荧光标记，再诱导细胞凋亡。将该细胞经静脉注射入受体后，采用流式细胞术和组织学荧光显微镜观察标记凋亡细胞在不同组织的动态分布。同时进行CFSE标记稳定性观察实验。结果 CFSE标记凋亡细胞的阳性率高，荧光强度大，不会迅速衰减和外漏。流式细胞术检测可发现标记凋亡细胞在不同组织的动态分布。结论 CFSE标记细胞后诱导凋亡，再经流式细胞术检测组织内细胞分布，必要时辅以组织学检测可以作为一种可靠、高效，经济的凋亡细胞体内示踪研究技术方法．     

DA-Lewis大鼠肝移植急性排斥模型免疫状态的观察

目的通过建立DA-Lewis大鼠肝移植急性排斥模型,研究急性排斥反应的发生发展。方法实验分为两组:同基因(Lewis-Lewis)组24例;异基因(DA-Lewis)组24例。分别于术后第3、5、7、10天随机取3只受体鼠处死取标本并对大鼠肝脏进行检测,观察其病理变化,并对天冬氨酸转氨酶、总胆红素及细胞因子水平变化进行检测。结果异基因组大鼠在术后各个时间点观察的一般表现、肝功能及病理改变、细胞因子水平的变化,都与同基因组存在显著的差别,其排斥反应观察的最佳时间是第7天。结论选择DA-Lewis大鼠建立肝移植急性排斥模型,第7天出现重度排斥反应,可作为反应排斥程度检测指标的时间点。     

大鼠近交系间原位肝移植急性排斥模型的建立与评价

背景:目前国内常用的封闭群品系大鼠(SD与Wistar大鼠)所建立肝移植急性排斥模型并不理想,易产生肝移植耐受.目的:通过二袖套法建立稳定的DA-Lewis大鼠原位肝移植急性排斥模型.方法:实验分为两组:同基因组:Lewis-Lewis 24例;异基因组:DA-Lewis 24例.观察移植后一般情况及移植后存活时间,两组受体分别于移植后3,5,7,10 d随机取3只处死取标本,观察肝脏组织病理变化,测定天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平变化.结果与结论:同基因组大鼠无急性排斥反应表现,中位生存时间超过100 d,肝脏组织发生轻度形态学改变.异基因组大鼠移植后黄疸明显,中位生存时间为11 d,移植后第7天肝脏组织病理表现典型急性排斥反应(Banff国际标准).同期相比异基因组天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平均高于同基因组(P < 0.001).提示,DA-Lewis是稳定的大鼠肝移植急性排斥模型,是研究肝移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型.     

NucleofectorTM电转仪转染外源基因至骨髓基质细胞优化方案

目的用Nucleofector^TM电转仪介导真核表达载体pEGFP-C1及pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源细胞，并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体以Nacleofector^TM电转仪转染不同方法获得的骨髓来源细胞，改变DNA的量、转染后血清浓度，在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率；转染后48h进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测目的基因的表达情况。结果相同条件下转染骨髓来源的神经干细胞（NSC）较转染骨髓基质细胞（MSC）可获得更高的转染效率；质粒2～10雌获得最佳的转染效率；提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率；RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin＋细胞有PDX-1表达。结论通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin＋细胞的效率，为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。