探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

逆转录病毒介导人细胞色素p450IA＿2cDNA在V79细胞中稳定表达及其代谢活化黄曲霉毒素B＿1

逆转录病毒介导人细胞色素ｐ４５０ＩＡ＿２ｃＤＮＡ在Ｖ７９细胞中稳定表达及其代谢活化黄曲霉毒素Ｂ＿１袁宝珠，孙宗棠目前认为黄曲霉毒素Ｂ１（ＡｆｌａｔｏｘｉｎＢ１，ＡＦＢ１）是肝细胞致癌剂，它经肝细胞内微粒体细胞色素ｐ４５０代谢活化成最终致癌剂。为了加强...     

IL-12基因转染的人树突状细胞加强细胞免疫反应的体外研究

目的:探讨IL-12基因转染的树突状细胞(DCs)能否体外加强细胞免疫反应.方法:脂质体转染(经过Flt-3L、SCF、GM-CSF刺激)增殖周期中的DCs前体细胞.加入GM-CSF、IL-4和TNF-α扩增转染细胞.在流式细胞仪上分析细胞表型及IL-12的表达.成熟DCs装载上分别能与HLA-I 类和HLA-II类分子结合的多肽,观察IL-12基因转染DCs对特异性Th细胞发育及特异性CTL诱导和功能的影响.结果:IL-12基因转染细胞在上述细胞因子作用下发育成为能有效表达IL-12并具有典型形态学与表型特征的DCs.在装载上CD4+T细胞表位HBcAg50-69后,能诱导这些细胞发育成为IFN-γ产生型的Th1细胞.HLA-A201亚型DCs在其同时装载CD4+T和CD8+T细胞相应的表位后,IL-12 基因转染DCs所诱导产生的自身淋巴细胞的CTL效应增强.结论:IL-12基因转染的DCs能增强对Th1细胞的刺激和CTL效应的诱导能力,提示它在肿瘤疫苗发展中的潜力.     

中国北方肝细胞癌与乙肝病毒感染的紧密关联性

目的确立乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)及丙肝病毒(hepatitis C virus，HCV)感染在中国北方肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)发生中的病因学地位。方法采用Abbott AxSym系统检测119例连续系列中国北方地区HCC病例的血清HBV、HCV标志，对血清HBV标志阴性病例，采用免疫组化、巢式PCR和DNA测序等对HBVX基因进行鉴定。结果119例HCC中，血清HBsAg阳性率为82．4％(98／119)；anti-HBc阳性率为94．1％(112／119)；4例血清HBsAg及anti-HBc均阴性病例中，3例HBVX基因阳性，因而HBV感染的阳性率达99．2％(118／119)。本组anti-HCV阳性率11．8％(14／119)，且均伴有HBV感染标志。结论中国北方地区HCC与HBV感染具有紧密关联性，是本地区HCC发生的主导病因。HCV感染是一个HOC发生的重要辅助因素。     

黄曲霉毒素B1转化体外原代培养的大鼠肝上皮细胞

利用基因转染技术，研究黄曲霉毒素B1在人c-myc基因和p450IA2基因转染的基础上，转化体外原代大鼠脉上皮细胞的可能性及其部分分子机理。首先构建Xm-6／c-myc真核表达载体，并将其转染Alexander细胞，免疫组化实验证明重组的c-mvc基因可在肝细胞中表达。随后分别将c-myc和人p450IA2表达载体转染无血清原代培养的新生Wistar大鼠肝细胞，结果发现p450IA2基因可代谢活化5ng／ml的AFB1，并且在外源c-myc基因辅助下，诱导大鼠肝上皮细胞获得生长优势。其中随机挑选的1例在渡过长达4个月的“危机”期后，获得永生化生长能力。从CK-18和大鼠白蛋白的表达情况和细胞超微结构特征，明确了转化细胞来源于肝上皮细胞。核型分析、免疫组化和Northern杂交分析提示，大鼠肝上皮细胞转化与其基因组稳定性改变和TGFα高表达相关。     

2.5μg乙型肝炎疫苗的免疫效果分析

1983年11月1日至30日,我们对启东大兴等乡出生的188名婴儿,随机分3组进行乙型肝炎疫苗免疫效果考核,其中甲组64名,每次上臂三角肌皮下注射Pasteur 疫苗2.5μg(其中37名注射3次,27名注射2次);乙组62名,每次上臂三角肌注射 Merck 疫苗2.5μg;丙组62名未注射疫苗,作为对照。免疫程序为分娩后立即、1、6个月各注射1次。3组孕妇均于产     

鸭肝癌细胞中病毒样颗粒的电镜观察

在江苏启东5例肝癌鸭的癌细胞中,发现大量病毒样颗粒,圆形,直径35～60nm,中央有电子致密的核心,核周有一层外膜;核内常见特殊致密颗粒,直径20～25nm,无外膜;病毒样颗粒与HBV的形态及大小相似;文中描述了病毒样颗粒的分布特点及其在胞质中发育的可能形式,讨论了这些颗粒的存在可能与肝癌及肝炎的发生有关。     

北方汉族群HLA—A2亚型分布及p53的合成肽体外诱导C …

目的 研究北方汉族人群中ＨＬＡ－Ａ２亚型的分布及树突状细胞提呈基于ｐ５３基因合成肽体外诱导特异性Ｔ杀伤细胞（ＣＴＬ）反应的影响。方法 利用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术分析北方汉族人群中ＨＬ－Ａ２基因型及其亚型的分布,并在适当Ａ２亚型背景下,选择与ＨＬＡ－Ａ２０１分子具有高亲和性的２个来自ｐ５３蛋白及１个来自ＨＢＶ核心抗原的蛋白合成多肽,将其分别负载到经体外ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４刺激增殖的人脐带血树突状细胞（     

高危新生儿接种酶母重组乙肝疫苗12年效果

[目的]评价接种酶母重组乙肝疫苗（基因疫苗）的免疫效果与免疫持久性，为基因疫苗的推广应用及高危新生儿乙型肝炎的预防提供依据。[方法]1985年－1986年HBsAg( ）产妇93例及所生的新生儿94例，按0，1，6免疫程序接种美国Merck基因疫苗（5μg/剂），分别于免疫接种后6个月，12个月及12周岁后采血放射免疫法（RIA）作HBsAg及抗－HBs检测。[结果]新生儿接种基因疫苗12年后，母亲HGsAg阳性但HBeAg阴性者（单阳性）的HBsAg阳性率为4．17％，显著低于母亲HBsAg及HBeAg均阳性者（双阳性）的23．40％（P＜0．05）。两组对象12周岁时的免疫保护率分别为91．66％与74．00％，联合使用乙肝免疫球蛋白（HBIG）并未显示出能提高基因疫苗接种者的HBsAg阻断率及抗－HBs血清阳转率（P＞0．05）。[结论]Merck基因疫苗的短期和远期免疫效果可以肯定，其对于乙肝高危产妇所生儿童的有效保护率至少可以持续１２年，联合使用ＢＨＩＧ并不增加基因疫苗的长期免疫效果，基因疫苗可以取代乙肝血源疫苗，并将在乙肝免疫预防中发挥重要的作用。     

高危新生儿接种酵母重组乙肝疫苗12年效果

[目的]评价接种酵母重组乙肝疫苗(基因疫苗)的免疫效果与免疫持久性，为基因疫苗的推广应用及高危新生儿乙 型肝炎的预防提供依据。[方法]1985年～1986年HBsAg(+)产妇93例及所生的新生儿94例，按0、1、6免疫程序接种美国 Merck基因疫苗(5μg/剂)；分别于免疫接种后6个月、12个月及12周岁后采血用放射免疫法(RIA)作HBsAg及抗-HBs检测。[结 果]新生儿接种基因疫苗12年后，母亲HBsAg阳性但HBeAg阴性者(单阳性)的HBsAg阳性率为4.17％，显著低于母亲HBsAg及 HBeAg均阳性者(双阳性)的23.40％(P<0.05)。两组对象12周岁时的免疫保护率分别为91.66％与74.00％。联合使用乙肝免 疫球蛋白(HBIG)并未显示出能提高基因疫苗接种者的HBsAg阻断率及抗-HBs血清阳转率(P>0.05)。[结论]Merck基因疫苗的 短期和远期免疫效果可以肯定，其对于乙肝高危产妇所生儿童的有效保护率至少可以持续12年。联合使用HBIG并不增加基因 疫苗的长期免疫效果。基因疫苗可以取代乙肝血源疫苗，并将在乙肝免疫预防中发挥重要的作用。