钙通道阻滞剂对尿道瘢痕成纤维细胞的作用

目的：探索钙通道阻滞剂维拉帕米对尿道瘢痕成纤维细胞的作用,为临床应用钙通道阻滞剂防治尿道瘢 痕形成提供实验依据。 方法：采用组织块培养法行人尿道瘢痕成纤维细胞原代培养,传至第4~8代用于实验研究。采 用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)比色法测定在不同给药浓度下(50,100,150,200及250 μmol/L维拉帕米) 干预不同时间(12,24 及48 h)后,尿道瘢痕成纤维细胞抑制率;采用酶联免疫吸附试验法测定实验组(100 μmol/L维拉 帕米,24 h)与对照组的细胞上清液中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的表达情况。 结果： 维拉帕米对尿道瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,呈现浓度与时间依赖性(P<0.05)。维拉帕米干预后细胞上清液MMP-2 和MMP-9的蛋白水平明显高于对照组(P=0.01)。结论：钙通道阻滞剂可以抑制尿道瘢痕成纤维细胞的增殖,提升基质 金属蛋白酶的活性,这可能对尿道瘢痕的形成具有防治作用。     

尿道狭窄瘢痕中CaMKⅡ、Smad2、CollagenⅠ表达的免疫组化研究

目的:运用免疫组化研究尿道狭窄瘢痕中钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)、Smad2、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的差异。方法:本研究样本采集自2014年12月~2015年12月期间,中南大学湘雅医院泌尿外科收治的11例初发性尿道狭窄、10例复发性尿道狭窄患者标本和10例正常尿道组织(取自前尿道狭窄患者的少量正常组织标本)。开展针对正常尿道组织、初发性尿道狭窄瘢痕和复发性尿道狭窄瘢痕的免疫组化研究。结果:(1)通过分析正常尿道组织和尿道狭窄瘢痕组织的苏木精-伊红(HE)染色、VG染色结果发现,尿道狭窄瘢痕组织的HE染色、VG染色切片中成纤维细胞数量较正常尿道组织明显增加,排列较为紊乱。(2)在对比正常尿道组织组和尿道狭窄瘢痕组之间的免疫组化结果后发现尿道狭窄瘢痕组的钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CaMKⅡ)、Smad2、CollagenⅠ的表达情况以及胶原蛋白表达量均显著高于尿道正常组(P<0.01)。(3)比较同为尿道狭窄瘢痕组别之间的免疫组化结果发现,复发性尿道狭窄瘢痕组的CaMKⅡ、Smad2的表达量显著高于首发性尿道狭窄瘢痕组(P<0.01)。复发性尿道狭窄瘢痕组的CollagenⅠ表达情况显著高于初发性尿道狭窄瘢痕组(P<0.05)。结论:尿道狭窄瘢痕的发生与CaMKⅡ、Smad2、CollagenⅠ在尿道组织中的表达密切相关。