经胸腔镜猪慢性心肌缺血模型的制作

目的:探讨一种胸腔镜下慢性心肌缺血动物模型建立的方法.方法:23只中华实验小型猪,在完全胸腔镜下将Ameroid慢性缩窄环置于左冠状动脉回旋支(LCX)的主干,术前及术后6周分别进行冠状动脉造影检查.结果:23只猪中20只手术顺利完成,饲养6周后,行冠状动脉造影显示7只LCX完全闭塞,13只狭窄大于85%.左前降支血管增粗、迂回,多支分支伸向缺血区形成血管网.结论:完全胸腔镜下应用Ameroid慢性缩窄环可成功地制作良好的慢性心肌缺血动物模型.     

电磁炉在病理技术常规包埋中的应急运用

病理科的组织包埋工作一般利用包埋机进行，相对于以前的烤箱加手工操作，是病理技术操作的飞跃，保证了日常大量病理组织包埋工作的顺利完成，但是由于经费有限，病理科一般只配备1台组织包埋机，长期过度的使用，很难保证包埋机能二直正常工作，一旦老化损坏，病理科工作就有陷入瘫痪的危险，笔者在包埋机炉胆胆丝耗损烧坏后无法继续工作时应急使用了多功能电磁炉代替包埋机进行组织包埋工作，取得较好的效果，介绍如下。     

我院人体组织生物样本库的建立和应用

Objective To explore issues of the human tissue biobank, ranging from its establishment, collection and preservation of samples, quality control, management and application. Methods Development of standardized operational procedures, collection of such samples as fresh frozen tissues from the surgery, paraffin-embedded tissues, whole blood, serum, plasma, and cerebrospinal fluid. Specimens were classified and made aliquots according to different requirements, and then stored at room temperature, -80℃ refrigerator or in liquid nitrogen. Microsoft Access database system was used in the management of these specimens. Results From September 2004 to September 2008, a total of 11 872 samples from patients with benign and malignant diseases were collected and preserved. Among them, 4360 tubes of fresh frozen tissue samples from 2500 cases were provided within and beyond the province. These samples were also applied to DNA, RNA, protein extraction and tissue microarray, and immunohistochemistry-related research. Conclusion Human tissue biobank is highly useful in sharing human tissue resources effectively, as it can provide high quality specimens from benign and malignant diseases and normal control. In addition, it plays a very important role in exploring pathogenesis, developing new technologies for early detection of disease and new therapeutic strategies.     

我院人体组织生物样本库的建立和应用

Objective To explore issues of the human tissue biobank, ranging from its establishment, collection and preservation of samples, quality control, management and application. Methods Development of standardized operational procedures, collection of such samples as fresh frozen tissues from the surgery, paraffin-embedded tissues, whole blood, serum, plasma, and cerebrospinal fluid. Specimens were classified and made aliquots according to different requirements, and then stored at room temperature, -80℃ refrigerator or in liquid nitrogen. Microsoft Access database system was used in the management of these specimens. Results From September 2004 to September 2008, a total of 11 872 samples from patients with benign and malignant diseases were collected and preserved. Among them, 4360 tubes of fresh frozen tissue samples from 2500 cases were provided within and beyond the province. These samples were also applied to DNA, RNA, protein extraction and tissue microarray, and immunohistochemistry-related research. Conclusion Human tissue biobank is highly useful in sharing human tissue resources effectively, as it can provide high quality specimens from benign and malignant diseases and normal control. In addition, it plays a very important role in exploring pathogenesis, developing new technologies for early detection of disease and new therapeutic strategies.     

组织生物样本库中冷冻组织质量鉴定体系的建立

目的：建立组织生物样本库中储存的冷冻组织样本的质量鉴定体系。方法：随机选取浙江省台州医院组织库中肝癌、胃癌冷冻组织及正常对照组织各20例,HE染色评估标本取材的准确性,Agilent2100生物分析仪检测RNA纯度和完整性,Western blot和琼脂糖电泳分别测定组织样本的蛋白质和DNA质量。结果：HE染色观察到受检样本肿瘤部分均达到80%以上,RNA完整系数（RIN）为7.1～8.4,28s/18s比值为1.5～1.8,受检样本蛋白质及DNA均保存完好,无明显降解。结论：本研究介绍的冷冻组织质量鉴定体系,采用的方法可靠,可以作为组织生物样本库冷冻组织样本质量鉴定的有效且常规方法。     

CD147和Survivin在肾细胞癌中的表达及临床病理分析

目的： 检测CD147和Survivin在人肾细胞癌组织中的表达,以探讨二者在肾细胞癌中表达的相关性及其与预后的关系。 方法： 利用组织芯片技术构建85例肾细胞癌与35例癌旁正常肾组织芯片,应用免疫组织化学Envision法检测CD147 和Survivin在肾癌组织中的表达。 结果： 肾细胞癌组中CD147 和Survivin的表达率分别为65.7%（23/35）和71.4%（25/35）,显著高于癌旁对照组（ P ＜0.01）。CD147 在肾细胞癌中的表达随着肿瘤大小与病理分级的升高而升高（ P＜0.05）;Survivin在肾细胞癌中的表达随着病理分级与临床分期的升高而升高（ P＜0.05）。CD147和Survivin在肾细胞癌中的表达具有弱一致性（Kappa=0.388, P＜0.05）。Logistic回归分析显示Survivin的表达是肾细胞癌的独立危险因素（OR=16.256,95%CI：1.132~233.515,P＜0.05）。 结论： CD147和Survivin在肾细胞癌中均有过量表达,可能参与了肾癌的发生发展过程,两者联合检测可用于评估肾细胞癌的恶性程度和预后。     

胸腔镜下建立小型猪慢性心肌缺血模型

目的 探讨应用胸腔镜技术建立小型猪慢性心肌缺血模型的效果及可行性.方法 23只中国实验小型猪,雄性,体重20～30 kg,平均(29.3±4.3)kg,年龄8～11个月,平均(9.3±1.8)个月.在完全胸腔镜下将Ameroid环置于回旋支主干,术前及术后6周分别进行冠状动脉造影及超声心动图检查.结果 23只猪中20只顺利完成手术,手术时间25～125 min,平均(46±9)min.术中出血量30～60 ml,平均(55±12)ml.术后6周内因肺部感染、二次造影时心律失常及麻醉意外死亡3只.术后6周行冠状动脉造影显示,7只动物回旋支完全闭塞,13只狭窄大于85%.超声心动图心肌收缩及舒张功能明显下降,术前射血分数(65.0±6.3)%,短轴缩短率(36.2±4.3)%;术后6周射血分数(41.0±9.3)%,短轴缩短率(34.2±2.3)%,均低于术前水平(P<0.05).结论 应用胸腔镜技术放置Ameroid环可以有效建立小型猪慢性心肌缺血模型.     

MYBL2和p53在胃癌组织中的表达及临床意义研究

目的探讨胃癌组织中MYBL2和p53联合表达的临床意义。方法应用组织芯片技术构建88例胃癌和相应癌旁组织的芯片,采用免疫组化EnVision法检测胃癌组织和癌旁组织中MYBL2和p53的表达差异,结合患者临床病理资料进行统计学分析。结果胃癌组织中MYBL2和p53的表达均明显高于癌旁组织（P＜0.05）。胃癌组织中MYBL2和p53阳性表达率分别为62.50%（55/88）、70.45%（62/88）,癌旁组织中分别为12.50%（11/88）、10.22%（9/88）,MYBL2和p53表达均与胃癌的临床分期、浸润深度及淋巴结是否转移有关（P＜0.05）。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织中MYBL2和p53阳性表达呈正相关（P＜0.05）。结论MYBL2和p53蛋白表达上调参与胃癌的发生、进展过程,其异常表达呈一致性变化,可能是一对协同作用因素。     

HLA-G14bp缺失多态性与原因不明习惯性流产相关性研究

目的 探讨HLA—G基因14hp缺失多态性与原因不明习惯性流产（RSA）的关系。方法利用聚合酶链反应（PCR）和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对79例RSA患者和109例正常妊娠妇女HLA—G14bp缺失多态性进行比较分析。结果RSA患者组HLA—G14bp插入（＋14bp）等位基因频率明显高于正常对照组（X^2=4．92,P=0．026）。结论HLA—G14bp缺失多态性可能是RSA遗传易感性的危险因素。     

ANG-1基因重组腺相关病毒获取及转染猪骨髓干细胞的研究

目的:构建携带血管形成素-1(ANG-1)基因腺相关病毒(AAV)载体,通过病毒包装和纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并转染到乳猪骨髓干细胞中,获得有效表达,为进行血管再生的基因治疗研究奠定基础.方法:利用PCR技术,获取目的基因ANG-1,通过重组DNA技术得到ANG-1与pUC119的重组质粒,采用SalⅠ和BglⅡ双酶将pUC119中的目的基因ANG-1基因片断切出,再克隆到质粒pSNAV2.0中.用Lipofectamine将pSNAV ANG-1质粒转染293细胞后,用G418选择培养获得293/AAV2ANG-1细胞株,产生了有传染性的病毒颗粒,纯化并进行病毒DNA颗粒滴度测定.分别将绿色荧光蛋白(GFP)基因重组腺相关病毒(rAAV2GFP)及rAAV2ANG-1感染猪骨髓干细胞,并对转染效率及转染后表达情况进行初步研究.结果:测序证实ANG-1与GenBank提供的原始序列完全一致.重组载体经酶切鉴定与PCR筛选证实重组质粒和预期结果完全一致,在新的重组质粒中,ANG-1有一套CMV启动子和PolyA终止子系统.293细胞包装病毒效果良好,携带ANG-1的感染性AAV滴度为9×1011v.g/ml,用Western杂交法检测显示猪骨髓干细胞中表达ANG-1.1×106v.g/ml rAAV2GFP感染CD34阳性细胞48h后55%左右的细胞有明显的荧光.结论:ANG-1基因AAV构建成功,并能在骨髓干细胞中有效表达,为严重缺血性疾病基因治疗的研究奠定了基础.