海马内DNA甲基转移酶在七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤中的作用

目的观察海马内DNA甲基转移酶(DNMTs)在七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤中的作用。方法出生7d雄性SD大鼠64只,随机均分为四组(n=16):对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+生理盐水组(SN组)及七氟醚+5-杂氮胞苷组(5-AZA,DNMTs抑制剂,SA组)。C组吸入30%O22h,连续3d;S组、SN组和SA组吸入3%七氟醚+30%O22h,连续3d;SA组在七氟醚吸入前1h时侧脑室注入5-AZA 1mg/kg;SN组则注射等容量生理盐水。4周后,一部分大鼠行旷场实验和Morris水迷宫实验(n=8),另一部分取海马组织(n=8),采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA和蛋白含量。结果旷场实验中,四组大鼠探索路程和中央格停留时间差异无统计学意义。与C组比较,S组在Morris水迷宫实验中逃逸潜伏期明显延长,目标象限探索时间明显缩短,海马内DNMT3a及DNMT3b的mRNA和蛋白含量明显增加(P0.05);与SN组比较,SA组逃逸潜伏期明显缩短,目标象限探索时间明显延长,海马内DNMT3a及DNMT3b的mRNA和蛋白含量明显减少(P0.05);四组海马内DNMT1的mRNA和蛋白含量差异无统计学意义。结论七氟醚可致新生大鼠远期认知功能损伤伴海马内DNMT3a和DNMT3b表达增加;5-AZA可降低海马内DNMT3a及DNMT3b表达,减轻七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤,表明DNMTs参与了七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤的过程。     

记忆痕迹:机制与功能

正学习记忆是认知功能的核心,是神经科学研究的热点领域。学习是客观刺激下神经系统相关部位联系的建立,而记忆则是神经联系的保持与恢复[1]。这种大脑持续性生理改变建立的神经联系称为记忆痕迹或印记(memory traces or engram),该术语最早由德国科学家Semon提出[2]。目前关于记忆痕迹在学习记忆中的作用较为公认的观点为:特定的经历激活一群特定的细胞(印记细胞),形成该经历的记忆痕迹;当这群细胞再次被激活,重建与之前相同或相     

海马脑源性神经营养因子p11信号通路参与氯胺酮抗抑郁作用

目的探讨海马中脑源性神经营养因子(BDNF)-p11信号通路是否参与氯胺酮抗抑郁作用。方法 48只健康成年雄性SD大鼠随机分为四组(n=12):对照组(C组)、慢性不可预知温和应激组(CUMS组)、CUMS+氯胺酮组(K组)及CUMS+氯胺酮+ANA-12组(KA组)。CUMS组、K组和KA组通过CUMS建立抑郁模型,K组和KA组分别腹腔注射氯胺酮10mg/kg及氯胺酮10mg/kg+ANA-12 0.5mg/kg,C组和CUMS组注射等容生理盐水。给药后0.5h和3d进行旷场实验、强迫游泳实验、蔗糖偏好实验,观察大鼠行为学改变。行为学结束后,每组取6只大鼠海马组织,测定BDNF及p11表达水平。结果旷场实验中,四组大鼠运动总距离差异无统计学意义。给药后0.5h和3d,与C组和K组比较,CUMS组和KA组不动时间明显延长(P<0.05)。给药后3d,与C组和K组比较,CUMS组和KA组蔗糖消耗百分比明显减少(P<0.05)。给药后0.5h和3d,与C组比较,CUMS组海马BDNF及p11表达水平明显减少;与CUMS组比较,K组海马BDNF表达水平明显增加(P<0.05)。给药后3d,与K组比较,CUMS组和KA组海马p11表达水平明显减少(P<0.05)。结论海马中BDNF-p11信号通路可能参与维持氯胺酮的抗抑郁作用。     

单次短期七氟醚暴露联合母婴分离对新生大鼠远期认知功能的影响

目的 探讨单次短期七氟醚暴露联合母婴分离对新生大鼠发育期大脑远期认知功能的影响及可能机制。
方法 选择出生后第6天的雄性SD新生大鼠64只。采用随机数字法将新生大鼠分为五组：对照组（C组,n=13）、七氟醚组（S组,n=13）、母婴分离组（M组,n=12）、七氟醚+母婴分离组（SM组,n=13）和布美他尼组（SMB组,n=13）。C组自由饮水饮食。S组于出生后第6天暴露于2.1%七氟醚1 h。M组于出生后第10天母婴分离3 h。SM组于出生后第6天暴露于2.1%七氟醚1 h,并于出生后第10天母婴分离3 h。SMB组于出生后第6天七氟醚暴露前腹腔注射Na⁺-K⁺-2Cl^-同向转运蛋白（NKCC1）抑制剂布美他尼1.82 mg/kg,后暴露于2.1%七氟醚1 h,于出生后第10天母婴分离3 h。于大鼠出生后第44天行旷场实验,记录运动总距离和穿越中央格次数。出生后第54或55天行新物体识别实验,记录大鼠对新物体和旧物体的探索时间,计算辨别指数。出生后第84～86天行场景性条件性恐惧实验,记录场景性恐惧测试阶段和条件性恐惧测试阶段的僵直时间。行为学测试结束后取大鼠下丘脑组织测定促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）和海马组织测定盐皮质激素受体（MR）mRNA表达量。
结果 与C组比较,SM组辨别指数明显降低（P<0.05）,场景性恐惧测试阶段僵直时间明显缩短（P<0.05）,下丘脑组织CRH mRNA表达量明显升高（P<0.05）,海马组织MR mRNA表达量明显降低（P<0.05）。与SM组比较,SMB组辨别指数明显升高（P<0.05）,下丘脑CRH mRNA表达量明显降低（P<0.05）,海马组织MR mRNA表达量明显升高（P<0.05）。C组、S组和M组新物体识别实验的辨别指数、场景性恐惧测试阶段的僵直时间、下丘脑组织CRH和海马组织MR mRNA表达量差异均无统计学意义。
结论 新生大鼠单次短期七氟醚暴露联合母婴分离可通过活化NKCC1,增加边缘系统-下丘脑-垂体-肾上腺轴的活性,导致大鼠的远期认知功能损伤。     

右美托咪定预处理对创伤后应激障碍小鼠恐惧记忆形成及消退的影响

目的 观察右美托咪定预处理对创伤后应激障碍（PTSD）小鼠恐惧记忆形成和消退的影响,并探讨其可能的机制。
方法 选择雄性C57/BL6小鼠30只,7～8周龄,体重20～26 g。采用随机数字表法将小鼠分为三组：对照组（C组）、PTSD组（P组）和右美托咪定（D组）,每组10只。C组正常饲养,P组和D组通过给予5个成对刺激（声音刺激：30 s,6 000 Hz,85 dB;足底电刺激：声音刺激中最后2 s,1.0 mA）建立PTSD小鼠模型,每个成对刺激间隔20～60 s。C组以及P组在PTSD模型建立前15 min腹腔注射生理盐水1 ml/kg,D组于相同时点腹腔注射右美托咪定20 μg/kg。记录建模前、建模时每个成对刺激时、恐惧记忆获得、消除和再现的僵直时间百分比。采用旷场实验记录运动距离。旷场实验后处死小鼠,采用qPCR法检测海马组织促肾上腺皮质激素受体1（CRHR1）和连接蛋白3（Nectin3）mRNA表达量,采用Western blot法检测CRHR1和Nectin3蛋白含量。
结果 与恐惧记忆消除第1天比较,恐惧记忆消除第2天P组和D组僵直时间百分比明显降低（P<0.05）。与C组比较,P组海马组织CRHR1 mRNA表达量和蛋白含量明显升高,Nectin3 mRNA表达量和蛋白含量明显降低（P<0.05）。与P组比较,D组建模时第4—5个成对刺激时和恐惧记忆再现实验僵直时间百分比明显降低（P＜0.05）,海马组织CRHR1 mRNA表达量和蛋白含量明显降低（P<0.05）,Nectin3 mRNA表达量和蛋白含量明显升高（P<0.05）。
结论 右美托咪定预处理可以明显减少PTSD小鼠恐惧记忆的形成,并促进恐惧记忆的消退,这可能与CRHR1/Nectin3的表达改变相关。     

组蛋白甲基转移酶G9a在七氟醚致乳鼠远期认知功能损伤中的作用

目的探讨组蛋白甲基转移酶G9a在七氟醚诱发的乳鼠海马相关性远期认知功能损伤中的作用。方法 36只5日龄的雄性SD大鼠随机均分为三组:对照组、七氟醚组和Bix01294(组蛋白甲基转移酶G9a抑制剂)组,每组12只。七氟醚组和Bix01294组分别在出生后5~7d(P5~P7),每日3%七氟醚麻醉2h。Bix01294组在每次麻醉前15min皮下注射Bix01294(10mg/kg),对照组和七氟醚组在等时间点给予生理盐水0.1ml。分别于P35和P39~P41进行旷场实验和条件性恐惧实验。行为学测试结束后1d(P42)取海马组织检测G9a、二甲基化的组蛋白H3赖氨酸9(histone H3lysine 9dimethylation,H3K9me 2)和突触蛋白1(Synapsin 1)的含量。结果与对照组比较,七氟醚组在场景性条件恐惧实验测试中僵直时间百分比明显降低,G9a和H3K9me 2的表达水平明显增加,Synapsin 1的表达水平明显降低(P0.01);与七氟醚组比较,Bix01294组在场景性恐惧实验测试中僵直时间百分比明显增加,G9a和H3K9me 2的表达水平明显降低,Synapsin 1的表达水平明显增加(P0.05)。各组在旷场实验中的探索路程和中央格停留时间、声音相关条件性恐惧实验测试中的僵直时间百分比差异无统计学意义。结论组蛋白甲基转移酶G9a参与七氟醚诱发的乳鼠远期海马相关性远期认知功能损伤,Bix01294可改善这种损伤,其机制可能与增加海马H3K9me 2表达,从而降低海马Synapsin 1表达有关。