七氟醚麻醉对新生大鼠杏仁核DNA甲基转移酶mRNA表达的影响

目的 探讨七氟醚麻醉对新生大鼠杏仁核DNA甲基转移酶(DNMT)mRNA表达的影响.方法 新生(出生8 d)SD大鼠42只,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=21),对照组:不给予任何处理;实验组:吸入5%七氟醚1 min后,吸入浓度调整为3%维持4 h.实验组分别于停止吸入即刻及停止吸入后24 h时,处死大鼠,取杏仁核,测定DNMT1 mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA的表达;停止吸入即刻取动脉血样,进行血气分析.对照组于相应时间点进行处理.结果 与对照组比较,实验组DNMT1 mRNA、DNMT3a mRNA表达均下调(P＜0.05),DNMT3b mRNA表达和血气分析指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚麻醉可下调新生大鼠杏仁核DNMT1 raRNA和DNMT3a mRNA的表达,该作用可能会导致发育期中枢神经功能损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sevoflurane anesthesia on DNA methyltransferase (DNMT) mRNA expression in neonatal rat amygdala. Methods Forty-two 8-day-old SD rats were randomly divided into 2 groups ( n = 21 each): control group and experimental group. 5% sevoflurane was inhaled for 1 min, and then the inhaled concentration of sevoflurane was decreased to 3 % and maintained for 4 h. The rats were sacrificed at the end of sevoflurane inhalation and 24 h after the end of sevoflurane inhalation, and amygdala was removed for determination of DNMT, mRNA, DNMT3, mRNA and DNMT3b mRNA expression by RT-PCR. Blood samples were taken at the end of sevoflurane inhalation for blood gas analysis. Results Compared with control group, the DNMT, mRNA and DNMT3, mRNA expression was down-regulated (P ＜ 0.05). There were no significant differences in DNMT3b mRNA expression and parameters of blood gas analysis between the two groups (P ＞ 0.05). Conclusion Sevoflurane anesthesia can down-regulate DNMT, mRNA and DNMT,, mRNA expression in neonatal rat amygdala, which may result in functional deficits during the development of central nervous system.     

长链非编码RNA β分泌酶1反义转录物在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)β分泌酶1反义转录物(BACE1-AS)在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用。方法 SPF级健康雄性SD老年大鼠64只,18月龄,体重480～580 g。采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+阴性对照质粒组(SN组)和七氟醚+BACE1-AS抑制剂(siRNA-BACE1-AS)组(ST组),每组16只。SN组和ST组分别侧脑室注射阴性对照质粒和siRNA-BACE1-AS,C组和S组注射等体积PBS溶液,注射后1 d C组吸入30%氧气6 h, S组、SN组和ST组吸入3.6%七氟醚与30%氧气的混合气体6 h。气体吸入后1 d,采用水迷宫实验测实验第1～5天逃避潜伏期和实验第6天穿越平台次数。水迷宫实验结束后1 h内处死大鼠,取海马组织,采用ELISA法检测海马组织TNF-α、IL-1β、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)浓度,可见分光光度计法检测海马组织caspase-3活性,Western blot法检测海马组织Bax、Bcl-2和BACE1蛋白含量,RT-qPCR法检测海马组织lncRNA BACE1-AS、miR-124和BACE1 mRNA表达量,TUNEL法测定海马组织神经细胞凋亡百分比,苏木素伊红染色法观察海马组织病理结构。结果与C组比较,S组、SN组和ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显延长(P0.05),实验第6天穿越平台次数明显减少(P0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显升高(P0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显降低(P0.05),caspase-3活性明显增强(P0.05)。与S组比较,ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显缩短(P0.05),实验第6天穿越平台次数明显增多(P0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显降低(P0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显升高(P0.05),caspase-3活性明显减弱(P0.05)。S组和SN组上述指标差异均无统计学意义。结论长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物参与七氟醚诱导老年大鼠认知功能下降,其机制与神经细胞炎症、氧化应激损伤、调控miR-124和BACE1表达和促进细胞凋亡有关。     

异氟醚对大鼠海马高级糖基化终末产物受体表达的影响

目的 探讨异氟醚对大鼠海马高级糖基化终末产物受体(RAGE)表达的影响.方法 雄性老龄SD大鼠45只,月龄24月;雄性成年SD大鼠45只,月龄4月,分为老龄组和成年组(n=45),每组再分为3个亚组(n=15):老龄对照组(OC组)和成年对照组(AC组)吸入含30%氧气的空氧混合气体;老龄单次吸入异氟醚组(OS组)和成年单次吸入异氟醚组(AS组)吸入1.5%异氟醚2 h;老龄多次吸入异氟醚组(OR组)和成年多次吸入异氟醚组(AR组)吸入1.5%异氟醚3次,2 h/次,每天1次.吸入异氟醚后1 d各组随机取8只大鼠行Morris水迷宫实验测定认知功能,余大鼠处死取海马,采用RT-PCR法检测RAGE mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测RAGE蛋白的表达水平.结果 与OC组比较,OS组和OR组认知功能减退,海马RAGE mRNA及其蛋白的表达上调(P＜0.05);与AC组比较,AS组和AR组认知功能减退,AR组海马RAGE mRNA及其蛋白的表达上调(P＜0.05);与OS组比较,OR组认知功能减退,海马RAGE mRNA表达上调(P＜0.05);与AS组比较,AR组认知功能减退,海马RAGE mRNA及其蛋白的表达上调(P＜0.05).结论 异氟醚可导致老龄和成年大鼠认知功能降低,尤其对老龄大鼠影响明显,可能与其上调海马RAGE表达有关.     

脊髓源性少突胶质前体细胞在衰老过程中基因组甲基化总体调控模式的变化

目的 观察大鼠脊髓来源的少突胶质前体细胞(OPCs)在衰老过程中基因组DNA甲基化总体调控模式的变化.方法 原代培养新生大鼠、4周大鼠和32周大鼠脊髓组织来源的OPCs细胞,并用免疫荧光染色鉴定其表面标志物A2B5及NG2;采用酶联免疫吸附法检测各组细胞基因组甲基化水平及总体DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测各组细胞DNMTs的3种主要亚型DNMTl、DNMT3a及DNMT3b的mRNA及蛋白表达水平.结果 免疫荧光染色结果显示,本研究培养的OPCs纯度达95％以上.新生组、4周组和32组细胞基因组DNA甲基化水平分别为0.87±0.12、0.79 ±0.14和0.37±0.07,其中32周组与新生组比较差异有统计学意义(P＜0.05);各组细胞总体DNMTs活性呈下降趋势,差异有统计学意义(P ＜0.05);DNMTs的3种亚型DNMT1、DNMT3a及DNMT3b的变化趋势为:与新生组比较,4周组DNMT1的表达下降43％,DNMT3a和DNMT3b的表达分别增高56％和36％;32周组DNMT1的mRNA表达下降69％,DNMT3b表达增高104％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠脊髓源性OPCs在衰老过程中,其基因组甲基化水平及总体DNMTs活性呈下降趋势,而在此过程中DNMT1活性的下降发挥了主要作用.     

促红细胞生成素在七氟醚麻醉诱发老龄大鼠海马神经细胞凋亡中的作用

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)减轻七氟醚麻醉诱发老龄大鼠海马神经细胞凋亡的作用以及与Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)的关系。方法雄性SD大鼠,20月龄,体重550~750g,根据随机数字表法将大鼠分为三组(n=9):对照组(C组),七氟醚处理组(S组)和EPO+七氟醚处理组(ES组)。S及ES组大鼠吸入4%七氟醚6h;C组仅吸入空气-氧气混合气体;ES组大鼠在七氟醚处理后24、48和72h行尾缘静脉注射EPO(5 000U/kg),C组和S组仅注射等量生理盐水。采用Morris水迷宫实验评价大鼠的认知能力,采用TUNEL法评价大鼠海马神经细胞凋亡率,采用RT-PCR法测定海马组织中TLR4mRNA表达,采用JC-1免疫荧光染色法检测海马神经细胞线粒体膜电位水平;采用免疫蛋白印迹法测定海马组织中淀粉样前体蛋白(APP)和β-淀粉样肽(Aβ)蛋白表达。结果与C组比较,S组逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数差异无统计学意义,神经细胞凋亡率明显增加,TLR4mRNA表达明显下降,海马神经细胞线粒体膜电位水平明显下降,APP和Aβ表达明显增加(P0.05);与S组比较,ES组逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数差异无统计学意义,神经细胞凋亡率明显下降,TLR4 mRNA表达明显升高,海马神经细胞线粒体膜电位水平上升,APP和Aβ表达明显减少(P0.05)。结论促红细胞生成素能够减轻七氟醚诱发老龄大鼠海马区神经细胞的凋亡,其机制可能与抑制TLR4 mRNA表达,改善线粒体膜电位水平和抑制APP和Aβ蛋白活化相关。     

异氟醚通过上调NMDA受体导致发育期大鼠海马神经元凋亡

目的探讨异氟醚麻醉对新生大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基及凋亡的影响。方法新生1d的SD大鼠36只,雌雄不拘,取海马组织进行原代培养。采用随机数字表法将培养海马神经元5d的培养皿随机分为三组:对照组(C组)、异氟醚组(I组)和AP5+异氟醚组(A组),每组12只。I组和A组培养的海马神经元放置在密闭箱中,吸入1.5%异氟醚和纯氧,吸入时间6h,C组不做任何处理。于异氟醚麻醉结束后2、4、6、24h(C组于相应时点),提取海马神经元总mRNA和总蛋白,采用RT-PCR法测定NR2A mRNA、NR2BmRNA和caspase-3mRNA的表达量,采用Westen blot法测定caspase-3蛋白含量。结果与C组比较,异氟醚麻醉结束后2、4和6hI组海马神经元NR2AmRNA和NR2BmRNA的表达量明显上调(P0.05)。与C组和A组比较,I组异氟醚麻醉结束后2、4和6h海马神经元caspase-3mRNA的表达量、异氟醚麻醉后4和6h海马caspase-3蛋白含量明显升高(P0.05)。结论吸入1.5%异氟醚可能通过上调新生大鼠海马神经元NMDA受体导致发育神经元凋亡,阻断NMDA受体可以预防异氟醚导致的发育期海马神经元凋亡。     

七氟醚对不同性别大鼠海马神经元p-CREB1表达的影响

目的 评价七氟醚对不同性别大鼠海马神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(p-CREB1)表达的影响.方法 健康成年雌性SD大鼠30只,3月龄,体重180～220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n＝15):对照组(Fc组)和七氟醚组(Fs组);健康成年雄性SD大鼠28只,3月龄,体重380-440 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n＝14):对照组(Mc组)和七氟醚组(Ms组).Fc组和Mc组吸入95％氧气(流量4 L/min)2 h,Fs组和Ms组吸入3％七氟醚2h.于停止吸入七氟醚后2d时行避暗实验;于停止吸入七氟醚后3～7d时行Morris水迷宫实验,第7天认知功能测定结束后处死大鼠,取脑组织,剥离海马,采用Western blot法检测海马组织p-CREB1及Bcl-2、caspase-8的表达水平.结果 与Fc组比较,Fs组停止吸入七氟醚后3d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调,caspase-8表达上调(P<0.05);与Mc组比较,Ms组停止吸入七氟醚后3～6d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调,caspase-8表达上调(P<0.05);与Fs组比较,Ms组停止吸入七氟醚后4～6d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调(P<0.05).结论 七氟醚可通过抑制海马神经元CREB1蛋白磷酸化,上调caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,促进神经元凋亡,导致大鼠认知功能减退,且对雄性大鼠的效应更明显.     

孕晚期七氟醚麻醉对子代大鼠认知功能和海马神经元树突棘发育的影响

目的 探讨孕晚期不同浓度七氟醚麻醉对子代大鼠认知功能及树突棘发育的影响.方法 取SD孕鼠16只,用随机数字表法将其分为4组(每组4只):对照组(C组)、1.5％七氟醚麻醉组(S1组)、2.8％七氟醚麻醉组(S2组)和3.3％七氟醚麻醉组(S3组).七氟醚麻醉组母鼠于孕18～20 d进行每天1次的七氟醚麻醉,S1组、S2组和S3组孕鼠分别使用1.5％、2.8％和3.3％的七氟醚吸入4h并保持0.5、1.0、1.5 MAC;C组仅置于麻醉箱内,通入相同流量氧气暴露4h.于出生后21 d对各组子代大鼠水迷宫测定其认知功能,出生后28 d完成水迷宫测试后处死子代大鼠,采用高尔基染色法进行海马树突棘密度测定,采用RT-PCR法测定caspase-3 mRNA表达.结果 各组子代大鼠游泳路程、逃避潜伏期、穿越平台次数及平台所在象限停留时间比较差异无统计学意义(P＞0.05).与C组[(12±3)/10 μm]比较,S3组大鼠海马神经细胞树突棘密度降低[(9±3)/10μm](P＜0.05).各组子代大鼠海马内caspase-3 mRNA表达变化差异无统计意义(P＞0.05).结论 1.5 MAC七氟醚麻醉4h可降低子代大鼠海马内神经细胞树突棘密度,但未对子代大鼠认知功能及caspase-3 mRNA表达产生影响.     

孕早期七氟醚麻醉对子代大鼠认知功能的影响

目的 评价孕早期七氟醚麻醉对子代大鼠认知功能的影响.方法 孕5～7d的SD大鼠30只,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=10):正常对照组(C组)、吸入七氟醚4h组(S1组)和吸入七氟醚8h组(S2组).S1组和S2组分别吸入95％氧气-1.8％七氟醚4h和8h,氧流量2L/min,C组吸入95％氧气8h.分别于出生后20、30 d取5只母鼠的子鼠,采用Morris水迷宫实验测定认知功能,持续7d,然后处死子代大鼠,分离海马组织,测定N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)mRNA及其蛋白和hippyragranin mRNA的表达水平.结果 3组子代大鼠水迷宫实验结果、NR2B mRNA及其蛋白和hippyragranin mRNA表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 孕早期七氟醚麻醉对子代大鼠认知功能无影响.     

丰富环境对七氟醚吸入诱发新生大鼠远期认知功能障碍的影响

目的观察丰富环境对七氟醚吸入诱发新生大鼠远期认知功能障碍的影响。方法 6日龄新生雄性SD大鼠30只随机均分为三组:O2+标准环境组(OS组)、七氟醚麻醉+标准环境组(SS组)和七氟醚麻醉+丰富环境组(SE组)。SS、SE组分别在日龄6、7、8d时,每天接受1次2h的3%七氟醚麻醉,氧浓度100%;O2组在相应日龄吸入100%氧气。出生后第8天起至行为学测试前分别进行标准环境和丰富环境饲养,连续4周。第35天行旷场实验。第36天行场景性、条件性恐惧实验训练。第37、38天行场景性、条件性恐惧实验测试。行为学测试结束后2h,每组各取4只大鼠海马组织,采用Western blot法检测Synapsin-1、PSD-95、c-fos及BDNF含量。结果旷场实验测试中,三组探索路程和中央格停留时间差异无统计学意义。场景性恐惧实验测试中,与SS组比较,OS、SE组僵直反应明显增加(P0.05)。条件性恐惧实验测试中,三组僵直反应差异无统计学意义。与SS组比较,OS、SE组海马Synapsin-1、PSD-95、c-fos和BDNF含量明显增加(P0.05)。结论七氟醚麻醉可致新生大鼠远期海马依赖性认知功能受损,丰富环境可改善此种损伤,其机制可能与增加突触可塑性相关蛋白表达有关。     

DNA甲基转移酶在肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMTs)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集2007年7月至2008年4月中山大学附属第一医院行根治性切除的50例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织、肝硬化组织和慢性肝炎组织.采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测肝癌组织及癌旁组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA与蛋白表达水平,采用配对t检验和Mann-Whitney U检验比较肝癌组织与癌旁组织,肝硬化组织与慢性肝炎组织DNMTs mRNA表达的差异,x2检验和Fisher确切概率法分析肝癌组织DNMTs蛋白表达与临床病理因素的相关性,Kaplan-Meier法分析患者无瘤生存时间,不同患者无瘤生存时间的比较采用Log-rank检验.结果 肝癌组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达水平分别为癌旁组织的2.57、2.29和4.86倍(t=3.94,2.72,4.06,P＜0.05).肝癌组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达分别是肝硬化组织和慢性肝炎组织的2.38、2.14、4.66倍和6.12、4.58、12.99倍.DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA在肝癌组织的表达显著高于其在肝硬化组织和慢性肝炎组织中的表达(U=587.5、730.0、562.5,65.5、64.5、71.0,P＜0.05).DNMT1蛋白表达与肿瘤大小、数目、有无血管侵犯、TNM分期有关(x2=5.24,4.08,4.08,14.13,P＜0.05);DNMT3a蛋白表达与肿瘤大小、数目、TNM分期有关(x2=4.08,5.95,4.08,P＜0.05).DNMT1和DNMT3a低表达者平均肿瘤复发时间分别为9.4个月和8.7个月,显著长于高表达者的5.0个月和3.2个月,两者比较,差异有统计学意义(x2=3.89,9.91,P＜0.05).结论 DNMTs在肝癌发生、发展中起重要作用;DNMT1与DNMT3a高表达与肿瘤切除术后复发密切相关,可望成为肝癌预后的重要预测因子.

Abstract：

Objective To investigate the expression of DNA methyltransferases (DNMTs) in liver cancer and its clinical significance. Methods The specimens of liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were collected from 50 patients who received radical resection at the First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University from July 2007 to April 2008. The mRNA and protein expressions of DNMT1,DNMT3a and DNMT3b in liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were detected by real-time quantitative PCR and immunohistochemical staining. The mRNA expression of DNMTs in the liver cancer tissues was compared with those in the adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues by using t test and Mann-Whitney U test. The correlation between the protein expression of DNMTs in the liver cancer tissue and the clinicopathological features was analyzed by chi-square test or Fisher exact test, and the tumor-free survival time was analyzed by using Kaplan-Meier method and the difference in tumor-free survival rate between different patients was analyzed by Log-rank test. Results The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were 2.57, 2.29 and 4.86 times higher than those in the adjacent tissues (t = 3.94, 2. 72, 4. 06, P ＜ 0.05 ). The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b were 2.38,2.14 and 4.66 times higher than those in the cirrhotic tissues, and 6.12, 4.58 and 12.99 times higher than those in the chronic hepatitis tissues. The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were significantly higher than those in the cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues ( U = 587.5,730. 0,562.5; 65.5, 64.5, 71.0, P ＜ 0.05). The protein expression of DNMT1 was correlated with the size, number,TNM stages and vascular invasion of tumors ( x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ). The protein expression of DNMT3a was correlated with the size, number and TNM stages of tumors (x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ).The mean tumor recurrence time of patients with low expressions of DNMT1 and DNMT3a were 9.4 and 8.7 months, which were significantly longer than 5.0 and 3.2 months of those with high expressions of DNMT1 and DNMT3a (x2 =3.89, 9.91, P＜0.05). Conclusions DNMTs play an important role in hepatocarcinogenesis.High expressions of DNMT1 and DNMT3a are correlated with the postoperative recurrence of liver cancer, which are valuable prognostic factors for liver cancer.     

七氟烷后处理对大鼠海马缺血性损伤及胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的 观察不同浓度七氟烷后处理对大鼠海马缺血性损伤的保护作用及其对胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)表达的影响.方法 选取雄性SD大鼠,随机分为6组:假手术组(S)、缺血但无后处理组(C)、吸氧后处理组(O_2)、不同浓度七氟烷后处理组(Sevo1组、Sevo2组、Sevo3组);不同浓度七氟烷后处理组于脑缺血/再灌注即刻给予吸入1.5%(Sevo1组)、2.4%(Sevo2组)、3.0%(Sevo3组)的七氟烷30 min.采用大脑中动脉闭塞(MCAO)改良模型,于再灌注后的24、48、72h对海马进行组织病理学观察及IGF-1 mRNA检测.结果 与S组相比,C组各时间点大鼠海马IGF-1 mRNA的表达增加(P＜0.05)且海马组织出现病理学损伤;与C组相比,Scvo2组、Scvo3组各时间点的海马IGF-1 mRNA表达进一步增加(P＜0.05),且海马组织病理学损伤较轻;Sevo1组与C组相比,海马IGF-1mRNA的表达及病理学损伤无明显差异.结论 较高浓度的七氟烷后处理可以通过上调海马IGF-1及其受体系统而发挥中枢神经保护作用.     

七氟烷不同吸入浓度与时间对新生大鼠认知功能及海马脑源性神经营养因子表达的远期影响

目的 评价七氟烷不同吸入浓度与时间对新生大鼠认知功能和海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的远期影响.方法 7d龄SD大鼠采用随机数字表法随机分为4组(每组20只):空白对照组(C组)、5.1％七氟烷1.3 h组(S组)、3.4％七氟烷2h组(M组)...     

新生大鼠七氟醚麻醉对发育期认知功能和海马乙酰胆碱酯酶活性的影响

目的 探讨新生大鼠七氟醚麻醉对发育期认知功能和海马乙酰胆碱酯酶( AChE)活性的影响.方法 出生7d的SD大鼠80只,体重12 ～ 16 g,雌雄各半,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n＝16):A组和B组分别吸入3％七氟醚6h和2h;C组和D组分别吸入1.5％七氟醚6h和2h;E组只吸人氧气.待大鼠生长至断乳期(出生后16～21 d)和性成熟期(出生后55～60 d)时,采用Morris水迷宫实验测试认知功能.分别于出生后21和60d水迷宫实验结束后30 min处死大鼠,取海马组织,采用比色法测定AChE活性.结果 与E组比较,A组出生后17～20 d、B组和C组出生后18、19 d、D组出生后18d时逃避潜伏期延长,A组出生后21 d时AChE活性升高(P<0.05或0.01);与A组比较,B组和C组出生后19、20d时逃避潜伏期缩短,出生后21 d时海马AChE活性降低(P<0.05或0.01);与B组和C组比较,D组出生后19、20d时逃避潜伏期缩短(P<0.05);五组大鼠原平台象限活动时间和穿越原平台次数、出生后60d时AChE活性比较差异无统计学意义(P＞0.05);性成熟期各组逃避潜伏期差异无统计学意义(P＞0.05).结论 新生大鼠接受七氟醚麻醉后,可短暂降低发育期认知功能,且与吸入浓度和时间有关,其机制可能与增强海马AChE活性有关.     

围术期全麻药七氟烷对新生大鼠远期记忆损害和神经细胞焦亡的影响

目的 研究围术期吸入性全麻药七氟烷对新生大鼠海马神经细胞焦亡和认知功能的影响。方法 出生后7 d的SD大鼠随机分为对照组和实验组,同一环境下实验组暴露于2.8%七氟烷4 h,对照组暴露于空气中4 h,6 h后提取海马组织,western blot检测焦亡相关蛋白NLPR3、GSDMD、GSDMD-N、IL-18、IL-1β的表达变化（n=6）。另一批动物七氟烷或空气暴露处理后,与母鼠同窝继续饲养,30 d行旷场实验,33～34 d行条件恐惧性实验（n=10）。结果 与对照组相比,七氟烷组幼鼠海马组织焦亡相关蛋白NLPR3、GSDMD、GSDMD-N、IL-18、IL-1β表达显著上调（P<0.001）。七氟烷组动物在条件恐惧性实验中僵直时间比对照组明显缩短（P<0.001）,旷场实验中总运动距离和中心区域时间七氟烷组与对照组差别无统计学意义（P>0.05）。结论 七氟烷暴露可以导致新生大鼠记忆能力障碍,其机制可能与诱导神经细胞焦亡有关。     

组蛋白甲基转移酶G9a在七氟醚致乳鼠远期认知功能损伤中的作用

目的探讨组蛋白甲基转移酶G9a在七氟醚诱发的乳鼠海马相关性远期认知功能损伤中的作用。方法 36只5日龄的雄性SD大鼠随机均分为三组:对照组、七氟醚组和Bix01294(组蛋白甲基转移酶G9a抑制剂)组,每组12只。七氟醚组和Bix01294组分别在出生后5~7d(P5~P7),每日3%七氟醚麻醉2h。Bix01294组在每次麻醉前15min皮下注射Bix01294(10mg/kg),对照组和七氟醚组在等时间点给予生理盐水0.1ml。分别于P35和P39~P41进行旷场实验和条件性恐惧实验。行为学测试结束后1d(P42)取海马组织检测G9a、二甲基化的组蛋白H3赖氨酸9(histone H3lysine 9dimethylation,H3K9me 2)和突触蛋白1(Synapsin 1)的含量。结果与对照组比较,七氟醚组在场景性条件恐惧实验测试中僵直时间百分比明显降低,G9a和H3K9me 2的表达水平明显增加,Synapsin 1的表达水平明显降低(P0.01);与七氟醚组比较,Bix01294组在场景性恐惧实验测试中僵直时间百分比明显增加,G9a和H3K9me 2的表达水平明显降低,Synapsin 1的表达水平明显增加(P0.05)。各组在旷场实验中的探索路程和中央格停留时间、声音相关条件性恐惧实验测试中的僵直时间百分比差异无统计学意义。结论组蛋白甲基转移酶G9a参与七氟醚诱发的乳鼠远期海马相关性远期认知功能损伤,Bix01294可改善这种损伤,其机制可能与增加海马H3K9me 2表达,从而降低海马Synapsin 1表达有关。     

原发性肝癌组织RASSF1A异常甲基化与DNMTs及HBV的关系

目的探讨原发性肝癌ras相关结构域家族1A（ras association domain family 1A,RASSF1A）异常甲基化与肿瘤组织中DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）转录水平变化及HBV感染的关系.方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）技术检测61例原发性肝癌组织RASSF1A基因异常甲基化情况,RT-PCR法检测其中三种主要DNA甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B）水平的变化.结果61例肝癌标本中RASSF1A基因启动子区异常甲基化45例（73.8%）;HBV感染者47例（77.1%）,其中MSP阳性32例;无HBV感染者14例,其中MSP阳性13例,RASSF1A基因异常甲基化与HBV感染之间的关系无统计学意义（x2=2.260,P=0.133）.肝癌组、肝癌细胞系组及HBV感染组DNMTs表达水平与正常对照组相比均显著升高;组内比较显示肝癌组中DNMT3A、DNMT3B在MSP阳性患者中较阴性患者升高（分别为t=3.494,P＜0.01;t=4.258,P＜0.01）,而DNMT1下降（t=3.221,P＜0.05）;HBV感染组中,MSP阳性组织其DNMT3B较阴性者升高（t=12.171,P＜0.01）.结论肝癌组织DNMTs水平变化与RASSF1A异常甲基化有密切关系;HBV感染与DNMT3B转录水平变化相关.     

七氟醚暴露致新生大鼠未成熟脑损伤的研究

目的探讨七氟醚早期暴露对新生大鼠脑发育的影响。方法选取新生6日龄SD大鼠80只,随机分为四组,每组20只,分别为空白对照组(C组),1%七氟醚暴露2 h组(Sev1组),2%七氟醚暴露2 h组(Sev2组),4%七氟醚暴露2 h组(Sev3组);七氟醚暴露组分别置于1%、2%、4%七氟醚中每天暴露2 h,连续3 d;出生后第9天采用0.5%戊巴比妥钠麻醉后处死新生大鼠取出脑组织;采用电子天平秤检测各组大鼠在出生后6、9、15、28 d体重和脑重的变化;采用荧光定量PCR法(RT-PCR)检测Cx30、IL-6及BDNF基因mRNA表达量;采用免疫荧光法检测GFP蛋白含量;出生后28 d Morris水迷宫评价新生大鼠学习记忆能力。结果与C组比较,Sev1、Sev2和Sev3组新生大鼠体质量和脑质量均有所减轻,且随着日期延长这种减轻更为明显,Cx30 mRNA和BDNF mRNA表达量明显降低,IL-6mRNA表达量明显升高(P0.05),GFP细胞数量明显减少(P0.05);与Sev1组比较,Sev2和Sev3组新生大鼠体质量和脑质量均明显减轻,GFP数量明显减少(P0.05);与C组比较,Sev1、Sev2和Sev3组逃避潜伏期和游动距离均明显延长(P0.05),目标象限停留时间明显缩短(P0.05),穿越虚拟平台次数明显减少(P0.05)。结论新生大鼠接受七氟醚暴露可致未成熟脑损伤及远期学习记忆能力下降,且这种脑损伤程度与七氟醚浓度呈正相关;其机制可能与其脑内Cx30、BDNF基因表达水平改变有关。     

不同浓度七氟烷对老年大鼠认知功能的影响

目的 探讨不同浓度七氟烷对老年大鼠认知功能的影响.方法 18月龄雄性SD大鼠40只,体重500～650 g,随机分为3组,对照组(C组,n=8)吸入空气,1.5%七氟烷组(S1组,n=16)吸入1.5%七氟烷2 h,3.0%七氟烷组(S2组,n=16)吸入3.0%七氟烷2 h.于吸入七氟烷后1、7 d(T1.2)S1组和S2组随机取8只大鼠,采用Y型迷宫实验行认知功能测试,认知功能测试后12 h时处死大鼠,断头取脑,采用RT-PCR方法测定左侧海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)mRNA表达,采用免疫组化法检测右侧海马NR2B蛋白表达.结果 与C组比较,S2组吸入七氟烷后1 d大鼠认知功能减退,右侧海马NR2B蛋白、左侧海马NR2B mRNA表达上调(P<0.05),S1.组上述指标差异无统计学意义(P0.05).结论 吸入1.5%七氟烷后老年大鼠认知功能无明显变化;吸入3%七氟烷后1 d老年大鼠认知功能减退,可能与其上调海马含2B亚基的NMDA受体表达有关.