半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与心血管疾病关系的研究进展

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CystatinC,CysC）是人类半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,是半胱氨酸蛋白酶最主要的一种抑制剂。CysC是一种相对分子质量小的蛋白质（13．4kDa）,经肾小球自由滤过,并被近端肾小管重吸收继而发生分解代谢,但无分泌,仅从尿中排泄一小部分。     

辐射诱发BEP 2 D恶性转化中Smad 7对TGF-β/SMADs信号通路的调控

目的 研究BEP2D细胞经辐射诱发恶性转化过程中，作为SMAD蛋白家族的抑制分子，Smad7对TGF-β／SMAD介导信号通路的调控。方法 用Northem blot检测TGF-β刺激之后，永生化BEP2D细胞及辐射诱发恶性转化的BERP 35T2细胞中Smad7 mRNA的表达水平。人工合成SMAD结合元件(SBE)重复序列，同报告基因碱性磷酸酶融合。构建好的载体同Smad7真核表达载体共转染，TGF-β刺激，通过报告基因的表达丰度来检测Smad7对TGF-β／SMADs介导的信号通路的调控。结果 Northern杂交结果表明，永生化细胞Smad7基因对TGF-β刺激的应答正常，恶性化细胞的应答降低。基因转染的结果表明，永生化细胞中SBE的基础活性较恶性化细胞高；TGF—β刺激之后，永生化细胞中SBE活性显著增强，恶性化细胞变化不明显；同Smad7真核表达载体共转染之后，两种细胞中SBE活性均显著降低。结论 在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中，Smad7基因对TGF-β信号通路的反馈调节作用发生紊乱，使TGF-β信号通路持续处于抑制状态，TGF-β对细胞的负性调控作用减弱，细胞进一步向恶性化发展。     

α粒子辐射诱导人肺鳞癌裸鼠转移模型的建立

目的 建立α粒子辐射诱导人肺鳞癌裸鼠转移模型。方法 α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4原代接种裸鼠皮下，后采用组织块接种的方法，在鼠间连续传代3次．计算原代成瘤率及传代成活率，并观察肿瘤的转移情况，病理切片和免疫组织化学鉴定肿瘤的性质和来源．结果 (1)α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4原代接种成瘤率为44．4％(4／9)；(2)原代肿瘤的体表转移率与肺转移率均为25％(1／4)；(3)病理切片鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌；(4)免疫组织化学显示CK3和EMA表达阳性。结论 采用组织块接种的方法，在α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4的基础上，经过裸鼠体内连续传代3次，成功地建立了人类肺癌裸鼠转移模型。     

人碳酸酐酶Ⅱ(hCAⅡ)抑制剂筛选技术及应用

目的建立人碳酸酐酶Ⅱ(hCAⅡ)抑制剂筛选技术,并用于评价新hCAⅡ抑制剂。方法以大肠杆菌表达的hCAⅡ作为酶源,按照酶反应体系构建原则,在pH7.6和25℃的条件下,以碳酸酐酶分解对硝基酚乙酸酯引起348nm处光吸收增加来计算酶活力。在确定碳酸酐酶抑制剂筛选条件后,对35个靶向碳酸酐酶的新化合物进行了hCAⅡ的抑酶活性评价。结果采用大肠杆菌表达的hCAⅡ为酶源,成功建立了hCAⅡ抑制剂筛选技术,该技术具有可靠、快速、简便的优点,发现10个新化合物对hCAⅡ的抑制率大于醋氮酰胺,9个新化合物对hCAⅡ的抑制率与醋氮酰胺相当。结论hCAⅡ抑制剂筛选技术可用于hCAⅡ抑制剂的大规模筛选,为发现高效、高亚型选择性的碳酸酐酶靶向性药物奠定基础。进一步深入研究这19个化合物有望获得高效、低副作用的急性高原病防治药物。     

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节

背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制.Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一.本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因.方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性.同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异.结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显.而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞.结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一.     

RESPONSIVENESS OF Smad7 GENE TO TGF-b1 IN THE TUMORIGENESIS

Transforming growth factor-b (TGF-b) is a potent natural antiproliferative agent that plays an important role in suppressing tumorigenicity. Disruption of TGF-b signaling is implicated in numerous cancers, such as colon-rectal cancer, pancreatic cancer, lung cancer, skin cancer, et al. TGF-b signaling occurs via ligand-initiated complex formation of a heteromeric serine-threonine kinase receptor complex, following which the TGF-b type I receptor is phosphorylated by the constitutively act…     

原癌基因c-myc内部核糖体进入序列研究进展

原癌基因c-myc被认为是具有激活和抑制双重作用的转录调节子,在细胞的增殖、分化和凋亡过程中发挥着重要的作用.人c-myc mRNA的5'-非翻译区含有一个内部核糖体进入序列(internal ribosome entry segement,IRES)元件.Chappell等发现c-myc的IRES中一个C变为U的核苷酸替换在42%的多发性骨髓瘤(multiple myeloma)患者骨髓样本中可以检出,而这种核苷酸的变化在对照样本中没有检出.带突变的c-myc的IRES比野生型的c-myc的IRES的功能要更强.表明c-myc IRES中单个的点突变足以引起内部核糖体进入从而指导的翻译起始增强,此现象代表了一种新的癌变机制[1].     

亚细胞定位及信号转导检测技术在hrnt_1基因功能研究中的应用

目的 :hrnt_1是本实验室克隆的全长基因 ,GenBankNr库中编号为AF2 2 3393。实验证实该基因与支气管上皮细胞恶性转化相关 ,但具体的生物学功能尚不清楚。本研究旨在建立一种功能研究的方法 ,为探索hrnt_1在细胞恶性转化过程中的生物学功能提供线索。方法 :构建hrnt_1与pEGFP荧光素表达载体 ,通过融合蛋白的表达 ,观察hrnt_1基因产物在细胞中的位置分布 ;利用信号通路检测技术 ,观测hrnt_1对细胞内信号转导通路的影响。结果 :hrnt_1产物主要分布在细胞核中 ,对Myc Max,GR ,NFκB ,EIK_1 STAT等核转录因子活性有上调作用。结论 :细胞定位与信号通路检测技术相结合的方法简便、快速 ,适用于新的疾病基因功能研究。     

高原红细胞增多症大鼠模型的建立

目的建立一种简便、有效、可行的高原红细胞增多症大鼠模型,用于筛选和评价高原红细胞增多症防治药物。方法 16只雄性SD大鼠随机分为常氧组和低氧组,每组8只。低氧组大鼠每天在自制常压低氧舱(向舱内充9.8%氧含量的氮气和空气的混合气,模拟海拔高度6000 m)中停留8 h。分别在低氧处理后20 d、30 d、40 d、50 d、60 d和70 d时用氰化高铁血红蛋白法检测血红蛋白,以血红蛋白含量>210 g/L为模型建立成功的标准。结果低氧组大鼠在低氧处理40 d时血红蛋白含量为(234.1±10.7)g/L,40 d后血红蛋白含量维持在约230 g/L的较高水平。结论成功建立了简便、有效、可行的高原红细胞增多症大鼠模型,可用于高原红细胞增多症防治药物的筛选和评价。