微小RNA-21和转化生长因子β1在急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化组织中的表达变化

目的检测微小RNA-21（miR-21）和转化生长因子β1（TGF-β1）在脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠肺纤维化组织中的表达变化。 方法将72只大鼠分为对照组和实验组,每组36只。对照组大鼠仅开腹后关腹处理;实验组大鼠采用盲肠结扎-穿孔法建立ARDS模型。每组大鼠分别于术后12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d时间点各处死6只大鼠。取大鼠左肺组织用于苏木精-伊红（HE）染色,镜下观察肺组织结构变化,免疫组织化学法检测TGF-β1表达。取右肺组织,应用PCR法检测大鼠肺组织miR-21表达情况。 结果各实验组大鼠术后较相应对照组出现活动明显减少,反应迟钝,呼吸急促。显微镜下,对照组大鼠肺组织未见明显炎症细胞浸润和肺实质胶原沉积。实验组大鼠肺组织可见大量炎症细胞及红细胞渗出,成纤维细胞明显增多并可见纤维组织增生。实验组大鼠肺组织miR-21表达水平术后2~5 d与同时间对照组相比均显著增高（t=7.121、5.330、6.513、19.371,P均< 0.05）。对照组各时间点阳性细胞数均为0,实验组大鼠术后1~5 d肺组织TGF-β1表达阳性率分别为22.64%、32.69%、36.20%、38.32%、45.64%。 结论miR-21和TGF-β1在ARDS所致的肺纤维化组织中表达升高,提示miR-21和TGF-β1在ARDS大鼠的肺纤维化形成中起着重要作用。     

EV71病毒反向遗传学系统的建立及拯救病毒的鉴定

目的：建立高效的EV71病毒反向遗传学系统,快速获得拯救病毒并鉴定其活性。方法：首先构建含有人RNA聚合酶Ⅰ启动子（Ppol Ⅰ）、ccdB自杀基因和鼠终止子（mTer）的接收质粒pHM-ccdB,并在ccdB两侧引入AarⅠ酶切位点;为了回避EV71病毒基因组中自身的AarⅠ酶切位点,分两段PCR扩增基因组,在引物中引入必需的AarⅠ酶切位点,通过Golden Gate Clone技术连接到目的载体中获得病毒拯救质粒pHT-EV71,转染至RD细胞后,获得拯救的EV71病毒,并以RT-PCR、病毒滴度、Western blot以及电镜检测等方法鉴定拯救子代病毒。结果：通过引入ccdB致死基因和Golden Gate Clone成功构建了EV71病毒的拯救质粒（pHT-EV71）,并将其转染至RD细胞后,观察到明显的致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,将得到的拯救子代病毒,经EV71 VP1的特异性引物进行RT-PCR扩增,观察到长约1 900 bp的特异性条带;Western blot结果显示,该病毒可与EV71 VP1特异抗体结合;透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）检测可见20～30 nm球形病毒颗粒;在RD细胞中将子代病毒连续增殖8代后,检测其毒力高于母本株（6.35 lgTCID50/mL）。结论：通过引入ccdB和Golden Gate Clone技术,建立了快速、高效构建EV71病毒的拯救质粒的方法,效率达到100%,为正链RNA病毒反向遗传学系统的构建提供了一种新的策略,为进一步研究EV71病毒的致病机制及疫苗制备等提供了技术平台。     

EV-D68 VP1 蛋白的生物信息学分析和候选疫苗表位肽段预测及筛选

目的:通过对人肠道病毒D68型(EV-D68)衣壳蛋白VP1理化性质、结构功能和B细胞表位分析,获取候选疫苗肽段用于后期疫苗研制。方法:应用Bioedit软件、Netphos和ExPASy等在线工具分析EV-D68 VP1蛋白氨基酸序列。结果:EV-D68 VP1蛋白是等电点为8.73、相对分子量34.0 kD的亲水性蛋白质,具有35个可能的磷酸化位点,无信号肽和跨膜区,二级结构中不规则卷区有最高比例,α-螺旋和β-折叠散落在蛋白中;预测VP1蛋白具有多个可能的B细胞表位。结论:本研究分析了EV-D68 VP1的基本理化性质,结构功能和可能的B细胞表位,筛选了B细胞表位肽段,为EV-D68的进一步研究和疫苗的制备奠定基础。     

RseA基因影响耻垢分枝杆菌药物敏感性的生物信息学分析与初步验证

目的 筛选RseA在耻垢分枝杆菌中可能调控药物敏感性的基因或通路,并进行初步验证。方法 利用分子克隆技术构建RseA基因过表达耻垢分枝杆菌组和空质粒对照组;利用转录组测序技术和生物信息学方法筛选2组细菌间的差异表达基因(DEGs),分析其基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集情况;并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。利用结核分枝杆菌复苏促进因子E(RpfE)促使非复制持留菌复苏,测定复苏指数(RI)对筛选出的关键靶向基因或通路进行初步验证。结果 RseA基因过表达后,筛选出2 403个DEGs,其中2 335个表达上调,68个表达下调。GO分析结果表明,DEGs主要参与氮化合物代谢过程的调控、RNA代谢过程的调控、转录因子活性和序列特异性DNA结合过程调控等。KEGG分析结果显示,DEGs主要参与萜类骨架的生物合成、果糖和甘露糖代谢和同源重组等通路。从PPI网络MCODE模块中筛选出前8个hub基因rpsG、rplM、rpsO、rpsT、rpmH、rplS、rpsJ、rplT,并从这些基因的分析结果得知,其主要参与了核糖体通路。使用RpfE促进复苏后,RseA组复苏指数明显低于对照组。 RseA调控了多个靶向基因,参与核糖体的结构组成和核糖体通路,增强耻垢分枝杆菌对抗结核药物的敏感性,为进一步的机制研究奠定了基础。     

携带Lipocalin 2基因重组减毒沙门菌的构建及其对分枝杆菌生长影响的研究

目的：探讨携带脂质运载蛋白2（lipocalin 2,Lcn2）的减毒沙门菌对分枝杆菌生长的影响。方法：以巨噬细胞RAW264.7提取RNA逆转录为cDNA为模版,采用PCR法扩增Lcn2基因,定向克隆到质粒pBudCE4.1-orim的多克隆位点中,构建重组质粒 pBudCE4.1-orim-Lcn2;将重组质粒转染RAW264.7细胞,用RT-qPCR法检测Lcn2的mRNA 相对表达量,并以空白载体为对照组;将重组质粒转入减毒沙门菌SL7207得到重组菌株 SL7207-pBudCE4.1-orim-Lcn2;重组菌感染RAW264.7细胞,Western blot检测Lcn2的蛋白表达,RT-qPCR法检测Lcn2的mRNA的相对表达量,并以空载菌组为对照;7H10平板上通过菌落计数观察重组菌对感染 RAW264.7 细胞的卡介苗（Bacille calmette-guerin,BCG）生存的影响,以空载菌组为对照。用重组菌灌胃小鼠,检测脾组织Lcn2和血清IFN-γ水平,以空载菌和生理盐水为对照组。结果：PCR扩增出Lcn2基因;重组质粒经双酶切及基因测序鉴定正确。重组菌感染 RAW264.7细胞Lcn2的蛋白表达量较对照组增加（P=0.000）。RT-qPCR 法检测重组菌、重组质粒Lcn2 mRNA表达较对照组明显升高（P=0.000,F=5.281;P=0.000,F=22570）。7H10平板上重组菌组BCG数量与空载菌组相比明显减少（P=0.000,F=11.41）。重组菌组与空载对照菌组相比小鼠脾组织 Lcn2表达升高（P=0.000,F=4.449）,重组菌组与生理盐水组血清IFN-γ升高（P=0.004,F=15.27）。结论：成功构建了携带Lcn2基因的重组减毒沙门菌。重组菌感染RAW264.7细胞后Lcn2的表达增加,对感染RAW264.7的BCG存活起到一定的抑制作用。重组菌灌胃后小鼠脾组织Lcn2表达增加,血清IFN-γ含量增加,小鼠免疫状态有利于结核病转归。该研究为进一步研究脂质运载蛋白和结核分枝杆菌感染的关系及分子机制打下基础。     

应用中医护理加理疗干预面神经炎48例临床研究

目的:探讨应用中医护理技术加理疗干预周围性面神经炎的疗效和机理.方法:将96例患者随机分为治疗组和对照组各48例,治疗组采用电脑中频、TDP加红光照射翳风穴,从发病的第7天开始加电针,1次/d,连续10 d为一疗程,同时配合枕头牵引,1个疗程后观察临床疗效.对照组采用常规药物治疗.结果:治疗组痊愈率为93.75%,对照组痊愈率为41.67%,两组痊愈率差异有非常显著性意义(P＜0.01);治疗组有效率100%,优于对照组的85.42%(P＜0.01),并缩短了治疗周期.结论:应用中医护理技术加理疗干预面神经炎,疗效显著,值得推广.     

慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者无创机械通气治疗失败的影响因素及应对策略

目的 分析无创机械通气(NIMV)治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并呼吸衰竭患者失败的相关因素,并分析其应对策略,为提高治疗效果提供依据。方法 回顾性分析2020年1月至2023年8月期间在湖南省脑科医院(湖南省第二人民医院)进行NIMV治疗的120例COPD伴呼吸衰竭患者的临床资料,根据NIMV治疗是否成功分为成功组(89例,治疗成功),失败组患者为(31例,治疗失败)。对两组患者临床基本资料并进行单因素分析,同时采用多因素Logistic回归分析筛选出治疗失败的影响因素。结果 失败组中年龄>60岁的患者占比高于成功组,失败组机械通气时间长于成功组,动脉血氧分压(PaO₂)低于成功组,二氧化碳分压(PaCO₂)水平、C-反应蛋白(CRP)水平、入院时急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分均高于成功组;多因素Logistic回归分析结果显示,年龄>60岁、机械通气时间长、治疗前PaO₂水平低、治疗前PaCO₂水平高、治疗前CRP水平高、入院时APACHEⅡ评分高均为N...     

高三学生心理状态及音乐减压的探讨

目的探讨高三学生心理状态及音乐减压的疗效和机制。方法对某县级重点中学进行调查并对调查结果进行统计学处理,得出高三学生学习压力大的主要表现及压力人群在不同班级的分布情况,进行音乐放松治疗,同时进行日常生活活动的指导。结果能够缓和学生紧张的情绪,获得学生的好评。结论高三学生的压力具有暂时性,可以通过音乐治疗配合日常生活活动的自我调整,得到缓解和治愈。     

激光穴位照射联合音乐胎教在胎位不正孕妇中的应用

目的:探讨激光穴位照射联合音乐胎教在胎位不正孕妇中的应用及临床效果.方法:将486例胎位不正孕妇随机分为干预组和对照组各243例.对照组采用膝胸卧式矫正胎位,干预组给予激光穴位照射联合音乐胎教.比较两组胎位矫正有效率.结果:干预组胎位矫正有效率高于对照组(P<0.01).结论:激光穴位照射联合音乐胎教矫正胎位效果确切,且简便易行,值得临床推广应用.