棘球蚴病免疫诊断抗原研究进展

棘球蚴病免疫诊断的发展主要反映于对特异性抗原研究的进展。特异性抗原的确定和分离纯化技术及分子生物学技术的发展。提高了免疫诊断方法的敏感性和特异性。     

PCR-RFLP鉴别微小按蚊亲缘种A和C

目的　建立微小按蚊复合体不同亲缘种A和C的分子鉴别方法—PCR产物酶切片段长度多态性分析 (PCR RFLP)。　方法　用单蚊蚊腿消化提取基因组DNA ,PCR特异扩增核糖体 2 8S第 3结构域 (D3 )基因 ,对PCR产物进行纯化、克隆和测序 ;分析微小按蚊A和CD3基因的酶切图谱 ,选择合适的限制性内切酶对两者PCR产物进行特异性切割 ,按照酶切片段长度区分两亲缘种。　结果　微小按蚊A被限制性内切酶MboII切割后在约 3 76bp、2 68bp和 10 8bp处出现 3条条带 ,而微小按蚊C因第 96bp、97bp位点突变 ,不存在限制性内切酶MboII的特异识别位点而未被消化 ,仅在 3 76bp处存在唯一条带。　 结论　本实验建立的PCR RFLP分子鉴别方法能有效地将形态难以鉴别的微小按蚊亲缘种A和C(GenBank :AF416782 ,AF415 5 94)区分开来。     

Dot—ELISA检测抗丝虫抗体的初步实验研究

本文报告以马来丝虫成虫可溶性抗原作Dot-ELISA检测丝虫病人抗丝虫抗体的初步结果。62例马来丝虫微丝蚴血症者的阳性符合率为96.8％,49例班氏丝虫微丝蚴血症者的阳性符合率为85.7％,50例和39例非流行区正常人的假阳性率分别为4.0％和5.1％,与钩虫和蛔虫混合感染者的血清有一定的交叉反应。实验结果显示,Dot—ELISA检测微丝蚴血症者抗丝虫抗体具有敏感性高,且方法简便,可望用于丝虫病监测。     

棘球蚴病免疫诊断抗原研究进展

棘球蚴病免疫诊断的发展主要反映于对特异性抗原研究的进展。特异性抗原的确定和分离纯化技术及分子生物学技术的发展 ,提高了免疫诊断方法的敏感性和特异性     

抗血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体检测循环抗原及/或免疫复合物的实验研究

本文报告用单克隆抗体检测血吸虫感染兔血清中循环抗原及/或免疫复合物的实验结果.以血吸虫成虫盐水浸液抗原ACSE免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得抗成虫表膜的单克隆抗体8SE_4。此抗体经DE_(52)柱层析提纯后制成HRP-8SE_4结合物.血清样本与HRP-8SE_4作用后加入PEG(mw·6000)沉淀免疫复合物,然后加入底物OPD显色,于492nm读数,OD值即反映血循环中抗原及/或免疫复合物的量。实验结果表明5只重感染兔(接种尾蚴15O0～2000条)于感染后6wk可见OD值明显升高,达到感染前的1.9～4.5倍。5只轻感染兔接种尾蚴10～500条亦于感染6wk后OD值明显上升,至感染后8wk达高峰,此后至11wk剖杀时仍维持在较高水平.5轻感染兔检虫数为4～326条,未见虫荷与检测结果有明显相关。本实验结果提示感染兔血清中有循环表膜抗原及/或其复合物存在。至于检测该抗原能否用于考核治疗效果,有待进一步研究。     

我国4省、自治区细粒棘球绦虫DNA限制性片段长度多态性分析

运用 DNA探针pHD5、pEG18、pSM889 结合 Southern blot 杂交技术对采自我国新疆、青海、甘肃和宁夏等地的羊源细粒棘球蚴与采自青海、甘肃的牦牛源细粒棘球蚴进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果表明我国这些省、自治区采集的羊源细粒棘球蚴彼此之间未见有明显而稳定的杂交条带差异,属于同一虫株。青海和甘肃两省牦牛源细粒棘球蚴彼此之间也未见明显而稳定杂交条带差异,据杂交图谱判断似与羊源细粒棘球蚴属同一虫株。     

棘球蚴特异性抗原的蛋白质印迹分析

目的　寻找细粒棘球蚴 (Eg)和多房棘球蚴 (Em)特异性抗原组分用于免疫诊断。　方法　对Eg、Em的囊液、原头节、囊壁角质层、囊壁生发层及犬泡状带绦虫、犬豆状带绦虫、羊细颈囊尾蚴、猪囊尾蚴等 4种异源性绦虫 ,共14种粗抗原进行免疫学分析。采用蛋白质印迹试验 (Western blotting)、Genesnap和Genetool分析软件比较分析不同抗原蛋白条带分别与囊型棘球蚴病 (CE)及泡型棘球蚴病 (AE)患者血清反应的差异。　结果　 14种粗抗原中与CE、AE患者血清发生交叉反应的 11条蛋白条带相对分子质量 (Mr)为 130000、100000、94000、80000、75000、66000、62000、52000、38000、32000及 24000 ;与CE患者血清有特异性反应的 5条蛋白条带Mr为 41000、40000、22000、160 00和12000 ;与AE患者血清具有特异性反应的 8条蛋白条带Mr为 120000、109000、86000、59000、43000、28000、20000及 18000。　结论　确定了Eg和Em共有的交叉反应性抗原和具有进一步研究价值的特异性抗原组分 ,为进一步分离和鉴定具有诊断价值的特异性抗原提供了基础资料     

日本血吸虫卵尿素溶解性抗原的提取、分离及其化学和免疫学特性

日本血吸虫卵在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制成匀浆。离心后上清液为水溶性抗原(JSEA)。沉淀用8M尿素提取,得尿素溶解性抗原(JEU)。用动力学酶标固相免疫方法(K-ELISA)进行测定,JEU的抗原总活力得量为JSEA的2.83倍。将JEU通过Bio-Gel A 50 m柱分得的JEG_3为稳定的不含尿素的高抗原活力成分。作为诊断用抗原,应用K-ELISA对血吸虫病人血清进行测定,JEG_3较JSEA为敏感。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶区带电泳转移酶标免疫印斑技术,薄膜聚焦电泳和高压液相色谱分析的结果均表明,JSEA和JEG_3含有不同的蛋白质抗原成分,前者各组分的分子量在20万道尔顿以下,后者则主要为大分子蛋白质,分子量在40万道尔顿以上。     

日本血吸虫皮层的扫描电镜观察

本文报告用CO_2临界点干燥制样的扫描电镜术观察大陆品系日本血吸虫所发现的一些新形态结构。血吸虫口吸盘深部有丝状绒毛;口、腹吸盘内壁的棘至少有3种形态。雄虫抱雌沟内壁的棘呈尖刀状,底壁的棘呈钝圆形。两性血吸虫颈部的背、腹面均查见有棘。其体表皮层有乳突状、盘状、丘状和球状4种隆起物,且以前2种为较多。乳实状隆起主要分布在口、腹吸盘的内、外缘以及颈部、体部皮层等处;盘状隆起则分布在背、腹面、颈部和雄虫的抱雌沟内壁。此外,血吸虫的皮层还见有许多皮孔。     

细粒棘球蚴实验感染鼠体液免疫动态的初步结果

采用胶乳凝集试验(LA)、酶联免疫电转移印斑试验(EITB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点-ELISA试验(Dot-ELISA)以及免疫荧光试验(IFA)5种免疫血清学方法,对细粒棘球蚴实验感染鼠的抗体进行了动态观察,结果表明这5种检测方法均能检出抗体,其中以Dot-ELISA及IFA最敏感,于感染后2周即有部分鼠测到抗体。ELISA、EITB和LA出现阳性反应的时间依次为4周、2月和3月。感染8月及1年的病鼠全部阳性,而对照鼠则全部阴性。