金属蛋白酶抑制剂TIMP-2基因转染对胃癌细胞体内外生长侵袭与细胞外基质的相关性

目的探讨金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ２）基因转染后胃癌细胞的体内外侵袭能力的改变及胶原与胶原酶的变化规律．方法将人全长ＴＩＭＰ２ｃＤＮＡ基因构建于改构的逆转录病毒载体ｐＬＭＴ，经基因转染法导入人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，Ｇ４１８筛选获阳性细胞．利用裸鼠肾包膜下移植模型，采用免疫组化和原位杂交方法，观察肿瘤发展过程中的不同时期ＴＩＭＰｓ／ＭＭＰｓ（基质金属蛋白酶）ｍＲＮＡ，Ⅳ型胶原表达的情况．结果随着肿瘤移植后时间的延长，瘤细胞侵袭基底膜处Ⅳ型胶原缺失，瘤巢周围ＭＭＰｓ含量丰富．通过体外实验，观察到ＳＧＣ７９０１Ｔ２细胞ＴＩＭＰ２ｍＲＮＡ及蛋白活性均高于母系ＳＧＣ７９０１细胞，ＴＩＭＰ２可抑制基质金属蛋白酶的活性，减弱肿瘤细胞的侵袭体内外移动速度．结论ＭＭＰｓ的高表达是肿瘤细胞侵袭的关键因素，而ＴＩＭＰ２基因是恶性肿瘤侵袭和转移的负调控因子．     

艰难梭菌毒素AC端结构域在大肠杆菌中的可溶性表达与卵黄抗体的制备

目的重组表达艰难梭菌毒素A的C端结构域,制备针对艰难梭菌毒素A C端结构域的卵黄抗体。方法将优化合成的艰难梭菌毒素A的C端结构域DNA片段克隆到表达载体pET32b（＋）上,重组质粒转入大肠杆菌中诱导表达,经高亲和镍离子树脂纯化得到融合蛋白,凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白。检测目的蛋白的生物学活性,用目的蛋白免疫产蛋鸡制备针对艰难梭菌毒素A受体结合区的鸡卵黄抗体,分离纯化鸡卵黄抗体并用ELISA测定卵黄抗体的效价。结果获得了优化的艰难梭菌毒素A受体结合区的基因片段,继而制备了具有生物学活性的毒素A C端结构域重组蛋白。免疫产蛋鸡后获得了效价1∶50 000的抗艰难梭菌毒素A的卵黄抗体。结论获得了具有生物学活性的艰难梭菌毒素A C端结构域重组蛋白,为建立艰难梭菌基因工程疫苗打下了基础,并制备了针对艰难梭菌毒素蛋白A的卵黄抗体,可用于艰难梭菌相关性腹泻的诊断和治疗。     

心血管疾病基因治疗

本文综述了基因治疗方法在冠心病，高血压和血栓性疾病等眩血管疾病治疗中应用，包括目的基因的选择，基因载体的选择及其因转移的方法，并提出了目前基因治疗在心血管疾病治疗中所存在的问题和今后的发展前景。     

人α-珠蛋白基因表达调控研究进展

人α-类珠蛋白基因簇位于16号染色体的短臂近端粒区,由4个功能基因和3个假基因组成,其中,ζ-珠蛋白基因在胚胎期表达,α2、α1和θ珠蛋白基因在胎儿和成人期表达。α-类珠蛋白基因的主要调控序列位于ζ-珠蛋白基因上游40kb的位置,称为HS-40,另外还存在其它的HS位点。在HS-40和各种珠蛋白基因启动子上有多种红系和通用反式作用因子的结合位点,它们间的协同作用保证了α-类珠蛋白基因表达的组织和时序特异性。对于α-类珠蛋白基因表达调控的研究主要采用转基因动物和细胞转染的方法。     

逆转录病毒介导IFN-γ基因对胆管癌细胞株的影响

目的：研究人ＩＦＮ－γ基因对胆管癌细胞株免疫原性的影响。方法：构建携带人ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＩＦＮ－γ,导入人胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９,运用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法分析ＭＨＣ Ｉ类分子的表达,体外混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养（ＭＬＴＲ）和淋巴细胞杀伤试验研究导入ＩＦＮ－γ基因的ＱＢＣ９３９细胞免疫原性的变化。结果：Ｇ４１８阳性ＱＢＣ９３９－ＩＦＮ－γ细胞分泌ＩＦＮ－γ活性     

肝癌、胆管癌IL-2、IFN-γ基因肿瘤疫苗的实验研究

目的 研究人IL－2、IFN-γ基因修饰对肝癌、胆管癌细胞株免疫原性的影响。方法 构建携带人IL－2、IFN-γ cDNA的逆转录病毒表达载体,导入人肝癌HepG2或胆管癌QBC939细胞系,运用Western Blot和ELISA法分析导入IFN－γ基因的靶细胞MHC Ⅰ类分子的表达,淋巴细胞杀伤试验和肿瘤细胞在裸鼠体内的成瘤性改变,研究导入目的基因的肿瘤细胞免疫原性的变化。结果 Western Blot和ELISA分析,证明导入IFN－γ基因后瘤细胞MHC Ⅰ类分子表达水平增加,并能增强HLA A2位点相匹配肝癌、胆管癌病人外周血淋巴细胞杀伤亲本瘤细胞的活性;导入IL－2基因瘤细胞在裸鼠体内成瘤性降低。结论 IL－2和IFN－γ基因修饰能增强肝癌HepG2、胆管癌QBC939细胞系的免疫原性。     

人IFN-γ cDNA逆转录病毒载体的构建及其在人膀肤癌细胞中的表达

用逆转录病毒载体介导转移人干扰素γ(hIFN-γ)基因在人膀胱癌细胞EJ中稳定表达。应用基因重组技术构建含hIFN-γ基因的逆转录病毒载体pZip-hIFN-γ,采用脂质体介导法转染包装细胞Ψ-2和PA 317,然后用高病毒滴度的PA 317细胞培养上清感染EJ细胞。经G 418筛选培养得到一株能稳定分泌hIFN-γ(210IU/ml)的EJ克隆,Southern印迹证实hIFN-γ基因已插入EJ基因组中。逆转录病毒载体pZip-hIFN-γ能有效地介导基因转移,并能使目的基因在靶细胞稳定表达,这为人膀胱癌转hIFN-γ基因瘤苗的应用研究打下了基础。     

肿瘤药物敏感基因的研究进展

用肿瘤药物敏感基因转染肿瘤细胞，可提高肿瘤细胞对药的敏感性，使药物选择性地杀死肿瘤细胞而对正常细胞不产生毒性。本文综述药物敏感基因的研究进展。     

组织金属蛋白酶抑制剂TIMP-2基因转染对胃癌细胞体内外侵袭能力的影响

目的了解ＴＩＭＰ２基因转染对胃癌细胞侵袭行为的影响，进行阻断肿瘤细胞侵袭转移的筛选尝试。方法采取脂质体将外源基因ＴＩＭＰ２导入人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，经体外Ｂｏｙｄｅｎ小室测定肿瘤细胞侵袭能力与体内肾包膜下瘤组织种植侵袭模型对比分析，观察Ⅳ型胶原酶前体（ＭＴＭＭＰ）与基底膜Ⅳ型胶原免疫组化改变。结果发现转染ＴＩＭＰ２基因的胃癌细胞其表达ＭＴＭＭＰ的能力降低，成瘤时间延长，成瘤率降低，体外与体内的侵袭能力受到抑制。结论ＴＩＭＰ２基因转染可使胃癌细胞的侵袭表型得到下调。