VEGF与血液学恶性疾病

VEGF作为一种血管新生的主要病理生理性调节因子，触发了白血病细胞及多发性骨髓瘤细胞的生长、存活及移动，在造血过程中起重要作用。VEGF的表达及其信号转导，对血液学恶性疾病，尤其是对多发性骨髓瘤的发病机制及临床特性都有重要作用。针对VEGF及其受体直接或间接的治疗，有可能为临床提供一种新的有效的治疗方法。     

脐血来源AC133+细胞在不同诱导条件下神经分化标志物的表达

背景：近年来，在啮齿类动物中发现，造血干细胞具有向神经分化的塑型性，而在人类，这种造血的塑型性仍然具有争议。 目的:检测人脐血来源的AC133+造血干细胞是否具有向神经分化的潜能。 设计、时间及地点：本实验为成组对照设计实验，于2005-08/2007-12在天津血液学研究所和清华大学玉泉医院神经中心实验室完成。 材料：人脐带取自健康足月新生儿。胎脑滋养层细胞来源于22周流产胎儿脑组织。 方法：应用免疫磁珠分选人脐血AC133+细胞，流式细胞仪检测其纯度为99%以上。同时以机械分离及酶消化法制备胎脑滋养层细胞。选用4种培养条件对脐血来源AC133+造血干细胞进行诱导分化：①生长培养液DMEM/F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子。②DMEM/F12 加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子并联合使用脑源性生长因子，其间用全反式维甲酸处理3 d。③非细胞接触的共培养体系，先将制备的胎脑滋养层细胞生长在培养板内插件的半透膜上，与培养板内的脐血来源的AC133+细胞进行共培养。④细胞直接接触共培养，将预先用BrdU标记的脐血来源的AC133+细胞直接种在胎脑滋养层细胞上进行共培养。 主要观察指标： 1，2，4周收集诱导分化的脐血细胞，以RT-PCT检测是否有巢蛋白、骨形态生成蛋白2及神经细胞黏附分子的表达，免疫细胞化学方法检测细胞分型特异性抗原。 结果：部分脐血来源的AC133+细胞，在体外存在生长必需的因子上皮生长因子和碱性成纤维生长因子时，能表达一些与神经细胞分化有关的基因，如巢蛋白、骨形态生成蛋白，条件不同时，这些基因出现下调和关闭。在DMEM/F12 加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子联合使用脑源性生长因子诱导培养液中，上述基因表达在2周时可检测到，同时可检测到神经发育过程中出现的另一分子神经细胞黏附分子，这一分子在造血过程中并不出现，在使用内插件的胎脑滋养层细胞共培养的脐血细胞中也检测到相同结果。在优化的非细胞接触条件中主要表达胶质酸性蛋白，在细胞直接接触的共培养体系中出现神经元分化的标志物Ⅲ β-tubulin蛋白的表达。这种基因表达变化提示，在特定的培养环境下，脐血来源的AC133+细胞内可能出现了基因重排，使造血潜能的干细胞表达神经细胞发育分子。 结论：脐血来源的AC133+细胞包含部分具有向神经分化潜能的多能干细胞，在适合条件下，表达神经分化相关抗原。     

脐血来源AC133+细胞在不同诱导条件下神经分化标志物的表达

背景：近年来，在啮齿类动物中发现，造血干细胞具有向神经分化的塑型性，而在人类，这种造血的塑型性仍然具有争议。目的：榆测人脐血来源的AC133^＋造血干细胞是否具有向神经分化的潜能。设计、时间及地点：本实验为成组对照设计实验，于2005—08／2007—12在天津血液学研究所和清华大学玉泉医院神经中心实验室完成。材料：人脐带取自健康足月新生儿。胎脑滋养层细胞来源于22周流产胎儿脑组织。方法：应用免疫磁珠分选人脐血AC133^＋细胞，流式细胞仪检测其纯度为99％以上。同时以机械分离及酶消化法制备胎脑滋养层细胞。选用4种培养条件对脐血来源AC133^＋造血干细胞进行诱导分化：①生长培养液DMEM／F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子。②DMEM／F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子并联合使用脑源性生长因子，其间用全反式维甲酸处理3d。③非细胞接触的共培养体系，先将制备的胎脑滋养层细胞生长在培养板内插件的半透膜上，与培养板内的脐血来源的AC133^＋细胞进行共培养。④细胞直接接触共培养，将预先用BrdU标记的脐血来源的AC133^＋细胞直接种在胎脑滋养层细胞上进行共培养。主要观察指标：1，2，4周收集诱导分化的脐血细胞，以RT-PCT检测是否有巢蛋白、骨形态生成蛋白2及神经细胞黏附分子的表达，免疫细胞化学方法检测细胞分型特异性抗原。结果：部分脐血来源的AC133^＋细胞，在体外存在生长必需的因子上皮生长因子和碱性成纤维生长因子时，能表达一些与神经细胞分化有关的基因，如巢蛋白、骨形态生成蛋白，条件不同时，这些基因出现下调和关闭。在DMEM／F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子联合使用脑源性生长因子诱导培养液中，上述基因表达在2周时可检测到，同时可榆测到神经发育过程中出现的另一分子神经细胞黏附分子，这一分子在造血过程中并不出现，在使用内插件的胎脑滋养层细胞共培养的脐血细胞中也检测到相同结果。在优化的非细胞接触条件中主要表达胶质酸性蛋白，在细胞直接接触的共培养体系中出现神经元分化的标志物Ⅲ β-tubulin蛋白的表达。这种基因表达变化提示，在特定的培养环境下，脐血来源的AC133^＋细胞内可能出现了基因重排，使造血潜能的干细胞表达神经细胞发育分子。结论：脐血来源的AC133^＋细胞包含部分具有向神经分化潜能的多能干细胞，在适合条件下，表达神经分化相关抗原。     

胚胎脊髓细胞悬液在大鼠损伤脊髓中的突触发育过程

目的　观察分析胚胎脊髓细胞悬液在损伤脊髓移植区中的突触发育过程。　方法　对 4 2只 Wistar成年大鼠以改良 Allen法 (10 g× 5 cm)打击脊髓 ,3天后将孕 14天 (E14 ) 5只胚胎脊髓细胞悬液 (FSCS) 2 0 μl植入损伤空腔 ,移植后 2、4、6、8、10和 12周 ,以组织学、免疫组织化学观察移植物成活、分化及其与宿主之间关系。　结果　移植区成神经细胞最先展示了胞质突起 ,随之出现了低电子密度的突触前后膜 ,突触前、后膜电子密度逐渐增高形成良好的致密突起。突触小泡数量和种类逐渐增多 ,突触小泡有圆形清亮小泡、椭圆形小泡、颗粒状小泡和扁平小泡 - f型。突触的连接方式由单个的胞体 -树突突触 ,出现多个的胞体 -树突和树突 -树突突触。同时 ,移植成神经细胞、成少突胶质细胞及成星形细胞的细胞器日渐完善 ,细胞功能活跃。血脑屏障也随之出现。移植区可见神经微丝 (NF)、组织胺 (5 - HT)、降钙素基因相关肽 (CGRP)、胶原纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性纤维。　结论　胚胎脊髓细胞悬液在成年大鼠损伤脊髓内可发育为成熟的突触 ,显示了 FSCS与宿主脊髓重建突触方式的信息交换的潜在可行性。     

脐血CD133+移植改善转基因痴呆小鼠认知和存活能力水

背景:脐血中富含早期干细胞的一个亚群CD133 细胞,该亚群是具有广泛的增生和分化潜能的原始细胞,被认为具有向神经细胞分化的潜能.目的:假设脐血CD133 细胞对改善痴呆小鼠的认知功能和存活有使用价值,检测脐血CD133 细胞移植后痴呆鼠的认知和存活功能的变化,拟予验证.设计、时间和单位:完全随机区组设计的动物实验,于2005-09/2007-01在天津血液学研究所完成.材料:选用48只雄性APP695转基因小鼠,随机分为3组:对照组(n=8)、CD133 细胞移植组(n=20)和CD133细胞移植组(n=20).方法:对照组小鼠经脑室注射10μ L磷酸缓冲液(PBS),CD133 细胞移植组和CD133细胞移植组分别经脑室注射10 μ LCD133 (5×104/μ L)和CD133(5×104/μL)脐血细胞移植.主要观察指标:以水迷宫实验评价转基因小鼠在细胞移植后的认知功能,并记录移植后小鼠的存活时间.以Dil荧光标记法和免疫组化检测移植细胞的分化类型.结果:在移植后30 d,CD133 细胞移植组小鼠的认知功能明显好于CD133细胞移植组和对照组,差异有显著性意义(P＜0.05),这种改善效果在移植后180 d仍然存在(P＜0.05).CD133 细胞移植组小鼠平均存活时间比CD133细胞移植组和对照组明显延长,差异有显著性意义(P＜0.05).标记有Dil的脐血细胞在移植后30 d已经迁移到多个脑区,其中主要在双侧顶叶皮质和海马区,并且能够表达神经细胞标志Ⅲ型β微管蛋白、神经微丝、神经烯醇化酶和胶质酸性蛋白.CD133细胞移植组脑切片内,Dil标记的脐血源细胞主要分布在侧脑室及其周围,很少能检测到阳性胶质酸性蛋白,Ⅲ型β微管蛋白,或神经烯醇化酶的脐血细胞.移植后30 d,CD133 细胞移植组Dil标记的脐血细胞表达Ⅲ型β微管蛋白的百分率明显高于180 d,表达神经烯醇化酶的脐血细胞百分率明显低于180 d,差异均有显著性意义(P＜0.01).结论:实验结果提示,移植CD133 细胞后出现的对认知功能改善和对存活时间延长的作用,可能主要归功于移植细胞对功能不良细胞的替代或者对神经环路的改善.     

脐血来源AC133^＋细胞在不同诱导条件下神经分化标志物的表达

背景：近年来，在啮齿类动物中发现，造血干细胞具有向神经分化的塑型性，而在人类，这种造血的塑型性仍然具有争议。目的：榆测人脐血来源的AC133^＋造血干细胞是否具有向神经分化的潜能。设计、时间及地点：本实验为成组对照设计实验，于2005—08／2007—12在天津血液学研究所和清华大学玉泉医院神经中心实验室完成。材料：人脐带取自健康足月新生儿。胎脑滋养层细胞来源于22周流产胎儿脑组织。方法：应用免疫磁珠分选人脐血AC133^＋细胞，流式细胞仪检测其纯度为99％以上。同时以机械分离及酶消化法制备胎脑滋养层细胞。选用4种培养条件对脐血来源AC133^＋造血干细胞进行诱导分化：①生长培养液DMEM／F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子。②DMEM／F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子并联合使用脑源性生长因子，其间用全反式维甲酸处理3d。③非细胞接触的共培养体系，先将制备的胎脑滋养层细胞生长在培养板内插件的半透膜上，与培养板内的脐血来源的AC133^＋细胞进行共培养。④细胞直接接触共培养，将预先用BrdU标记的脐血来源的AC133^＋细胞直接种在胎脑滋养层细胞上进行共培养。主要观察指标：1，2，4周收集诱导分化的脐血细胞，以RT-PCT检测是否有巢蛋白、骨形态生成蛋白2及神经细胞黏附分子的表达，免疫细胞化学方法检测细胞分型特异性抗原。结果：部分脐血来源的AC133^＋细胞，在体外存在生长必需的因子上皮生长因子和碱性成纤维生长因子时，能表达一些与神经细胞分化有关的基因，如巢蛋白、骨形态生成蛋白，条件不同时，这些基因出现下调和关闭。在DMEM／F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子联合使用脑源性生长因子诱导培养液中，上述基因表达在2周时可检测到，同时可榆测到神经发育?