Glypican-3、TNF-α在原发性肝细胞癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白-3(GPC-3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在原发性肝细胞癌(HCC)患者血清中的水平及其对预后的影响。方法选择2010年1月至2013年12月期间60例原发性肝癌患者为研究对象。60例原发性肝癌中原发性HCC 40例,原发性肝内胆管细胞癌20例。40例患者按HCC临床分期:早期HCC 18例,中晚期HCC 22例;按HCC预后好坏:死亡(预后不良组)8例,存活(预后较好组)32例。选择30例肝硬化患者为疾病对照组,选择健康者60例为对照组。统计受试者血清GPC-3、TNF-α水平,并对血清GPC-3、TNF-α与年龄、预后、HCC临床分期、肝癌病理类型、BMI进行相关性分析。结果 HCC组血清GPC-3、TNF-α水平高于肝硬化组和对照组,差异有统计学意义(P<0.01),肝硬化组和对照组血清GPC-3、TNF-α水平无明显差异(P>0.05);不同病理类型肝癌之间血清GPC-3、TNF-α水平存在明显差异,HCC组血清GPC-3、TNF-α水平高于肝内胆管细胞癌组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01),肝内胆管细胞癌组和对照组血清GPC-3、TNF-α水平无明显差异(P>0.05);中晚期、早期HCC患者血清GPC-3、TNF-α水平存在明显差异。随着HCC的进展,血清GPC-3、TNF-α水平呈上升趋势,且中晚期、早期、对照组三组间两两比较均有统计学差异(P<0.01);不同预后HCC患者血清GPC-3、TNF-α水平存在明显差异,预后不良组患者血清GPC-3、TNF-α水平高于预后较好组,且预后不良组、预后较好组、对照组三组间两两比较均有统计学差异(P<0.01);血清GPC-3、TNF-α水平与HCC临床分期、肝癌病理类型均呈正相关(P<0.05);血清GPC-3、TNF-α水平与HCC预后均呈负相关(P<0.05);血清GPC-3、TNF-α与年龄、BMI等因素无明显相关性(P>0.05)。结论 GPC-3、TNF-α在HCC患者血清中呈现高表达,GPC-3、TNF-α的表达与HCC发病、进展及预后密切相关。     

肝癌组织中基质金属蛋白酶表达与侵袭转移的关系研究

目的检测肝癌患者血液及组织中MMP-2、MMP-9的表达,分析二者与肝癌侵袭转移的关系。方法选取2013年1月至2014年10月在我院住院行手术切除的肝细胞癌(HCC)患者40例作为试验组,经病理确诊为HCC,且未经放、化疗等抗肿瘤治疗;对照组患者40例,包括局灶性增生性结节16例,肝血管瘤13例,肝外伤11例。采用酶联免疫吸附法和免疫组织化学法检测入组患者血液及组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达。结果采用酶联免疫吸附法对两组患者MMP-2、MMP-9的水平进行检测,结果发现,试验组患者血液中MMP-2水平(0.384±0.026)、MMP-9水平(0.337±0.012)明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);采用免疫组织化学法对试验组肝癌组织、癌旁组织、对照组进行MMP-2、MMP-9的检测,结果发现,肝癌组织中MMP-2强阳性(+++)表达30例,MMP-9强阳性(+++)表达31例,阳性率为87.5%、85.0%;癌旁组织无MMP-2、MMP-9强阳性表达,阳性率分别为10.0%、12.5%;对照MMP-2、MMP-9阳性率分别为7.5%、10.0%。试验组肝癌组织MMP-2、MMP-9的表达阳性率较癌旁组织及对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2、MMP-9的表达与静脉浸润、肝内外转移、包膜有关(P<0.05),与性别、年龄、病灶大小、肝硬化、甲胎蛋白(AFP)、HBs Ag无关(P>0.05)。结论 MMP-2、MMP-9在肝癌中表达升高,与有无静脉浸润、有无肝内外转移及有无包膜有关,并且出现静脉浸润、有肝内外转移、无包膜的肝癌中,MMP-2、MMP-9表达明显升高,与肝癌的生长、侵袭和转移有密切的关系。     

Yes相关蛋白在人肝细胞肝癌中表达及意义

目的探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在肝细胞肝癌组织中的表达,以及其与临床病理特征、甲胎蛋白(alpha-fetal protein,AFP)的关系,评价其在肝细胞肝癌早期诊断中的意义。方法应用免疫组织化学方法检测52例肝细胞肝癌患者手术切除肝癌组织(观察组),43份癌旁正常肝组织(对照组)YAP表达情况;应用Western blot法检测25例肝癌患者(肝癌组)和26例正常人(正常组)血清YAP蛋白;应用诊断试验评价YAP蛋白单独及其联合AFP诊断肝细胞肝癌的价值。结果 (1)观察组YAP表达阳性率为80.77%,对照组为9.30%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);(2)观察组YAP阳性表达在性别、年龄、肿瘤直径、有无静脉侵犯和肿瘤分期上差异无统计学意义(P>0.05),而在肿瘤分化程度上差异有统计学意义(P<0.05);(3)观察组YAP阳性程度与患者血清AFP水平呈正相关(r=0.536,P=0.001);(4)肝癌组血清YAP蛋白相对表达量(0.629 2±0.065 9)高于正常组(0.020 0±0.034 0)(P<0.05);(5)YAP蛋白+AFP联合检测的灵敏度(92.0%)高于单独YAP(72.0%)和单独AFP(64.0%)检测的灵敏度(P<0.05);YAP蛋白+AFP联合检测的特异度(92.3%)与单独YAP(96.2%)、AFP(88.5%)检测的特异度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 YAP在肝细胞肝癌发生、发展中起重要作用;联合检测血清YAP蛋白和AFP可提高肝细胞肝癌诊断率;YAP可作为肝细胞肝癌筛选、检测和随访的可靠血清学指标之一。     

胰腺癌细胞中Runx3基因表达及甲基化的研究

目的观察胰腺癌细胞中Runx3基因表达的情况,探讨其出现表达异常的机制。方法 (1)RT-PCR检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3mRNA表达情况(2)Western blotting检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3蛋白表达情况;(3)甲基化特异性PCR(MSP)检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、As-PC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化水平。结果 (1)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3基因mRNA表达,而正常胰腺组织可检测到Runx3基因mRNA表达;(2)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3蛋白表达;(3)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3基因启动子区CpG岛均发生甲基化,而正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛未检测到甲基化。结论胰腺癌细胞中存在Runx3基因失表达,其机制可能与Runx3基因启动子区CpG岛发生甲基化有关。     

超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响

目的:观察超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响.方法:以超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡转染体外培养人肝癌Huh7细胞株.实验分5组:对照组(A组),miR-520c-3p mimics negative control+miR-132 mimics negative control+微泡造影剂+超声辐照(B组),miR-520c-3p mimics+微泡造影剂+超声辐照(C组),miR-132 mimic+微泡造影剂+超声辐照(D组),miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照(E组).超声辐照条件:机械指数0.4,辐照参数2.0 W/cm2,连续辐照30 s,间隔60 s,共5次.采用实时荧光定量PCR检测miR-520c-3p,miR-132,磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)和转录辅助因子YAP mRNA表达,采用Western印迹检测GPC3和YAP蛋白表达,采用噻唑监比色法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡.结果:与A组、B组比较,C组、E组miR-520c-3p相对表达量升高(P＜0.05),而D组无明显改变(p＞0.05);D组、E组miR-132相对表达量升高(p＜0.05),而C组无明显改变(p＞0.05).与A组、B组比较,C组、E组GPC3蛋白相对表达量降低(P＜0.05),而其mRNA相对表达量无明显改变(P＞0.05).C组、D组、E组YAP蛋白以及其mRNA相对表达量均降低(P＜0.05).与A组、B组比较,C组、D组、E组细胞增殖率降低(P＜0.05),且E组降低最明显(p＜0.05);C组、D组、E组细胞凋亡率增加(P＜0.05),且E组凋亡最明显(p＜0.05).结论:超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡能显著抑制人肝癌Huh7细胞株增殖,并促进其凋亡,其机制可能与调节GPC3和YAP的表达有关.     

3Dmax补片在腹腔镜下全腹膜外腹股沟疝修补术中不同固定方法的临床疗效

目的探究3Dmax补片在全腹膜外疝修补术（TEP）中不同固定方法的临床疗效。方法选取武汉市第五医院2011年9月~2013年9月收治的150例腹股沟疝行TEP术患者,根据3Dmax补片固定方法不同分为钉合器固定组、Prolene缝线固定组、生物胶固定组,各50例,观察比较各组临床疗效。结果生物胶固定组与Prolene缝线固组、钉合器固定组手术时间分别为（1.52±0.11）、（2.01±0.22）、（2.92±0.42）h,术中出血量分别为（12.5±7.2）、（24.5±8.6）、（34.2±12.2）mL,患者住院总费用分别（625.8±75.2）、（7125.2±98.2）、（8253.6±125.3）元,术后第1天疼痛评分分别为（1.1±0.5）、（1.8±0.9）、（2.5±1.1）分。与钉合器固定组比较,生物胶固定组及Prolene缝线固定组手术时间更短,术中出血量更少,住院费用更低,术后第1天疼痛评分更低,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;且生物胶固定组较Prolene缝线固定组效果更好（均P〈0.05）。三组术后住院时间、拔除尿管时间、患者满意度及术后并发症比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论腹腔镜腹股沟疝修补术中3Dmax补片钉合器固定、Prolene缝线固定与生物胶固定的对比研究中,生物胶固定模式为最优选择方法。     

GPC3特异的siRNA筛选和对肝癌细胞增殖能力的影响

目的筛选特异靶向GPC3的siRNA和探讨GPC3在肝癌中的作用机制。方法设计靶向GPC3的siRNA,转染huh7细胞后荧光定量PCR检测其对GPC3表达的抑制效果;选用抑制效果明显的siRNA下调GPC3表达后,WesternBlot检测GPC3的蛋白表达水平,并用Edu检测方法对Huh7细胞的增殖能力进行检测。结果成功筛选出一条抑制效率达到74.87%的特异靶向GPC3的siRNA,其可以显著抑制GPC3的转录翻译;同时,Edu检测发现当GPC3表达下调后,Huh7细胞的增殖能力下降。结论 GPC3的表达有利于HCC的增殖,而有效靶向GPC3的siRNA可为更进一步的研究提供有利手段。     

急性坏疽性胆囊炎行腹腔镜胆囊切除术中胆管损伤的预防

目的 探讨急性坏疽性胆囊炎行腹腔镜胆囊切除术中胆管损伤的预防措施.方法 选择2007年1月～2010年2月该院急性坏疽性胆囊炎行腹腔镜胆囊切除术患者62例的临床资料,回顾性分析术中预防胆管损伤的措施.结果 该组62例患者中完全腹腔镜下完成胆囊切除术52例.其中,胆囊管置管法25例,逆行法胆囊切除术15例,胆囊部分切除术...     

沉默GPC3对肝癌Huh-7细胞增生、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨Hippo通路靶向GPC3后对肝癌Huh-7细胞增生、迁移、侵袭能力的影响。方法采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量肝癌Huh-7不同对数生长期的肝癌细胞株GPC3蛋白表达水平及GPC3 mRNA水平,并筛选出可有效沉默GPC3基因的siRNA。将肝癌Huh-7细胞株分为实验组、未转染组及对照组,实验组导入GPC3-siRNA-1633转染Huh-7,其余两组不作处理。EdU实验检查三组细胞增殖率,划痕实验测定各组细胞迁移率,Transwell实验测定各组细胞侵袭能力。结果实验组GPC3 mRNA表达量及GPC3蛋白水平显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组Hippo通路中YAP mRNA表达量显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,实验组细胞增生率、迁移率及侵袭率显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GPC3可促进肝癌Huh-7细胞增殖、侵袭及转移,从而促进肝癌细胞生长。CPG3可通过上调Hippo通路中YAP表达水平从而促进肝癌细胞增生。通过沉默GPC3 mRNA后可有效抑制肝癌Huh-7细胞生长。