人血小板生成素在大肠杆菌中的表达

血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是血液学界寻找已久的,但只是在1994年才被克隆成功的造血调控因子。由于它具有特异刺激巨核细胞-血小板生成的作用,人们普遍预期它对于治疗各种原因引起的血小板减少症会具有显著效果,可能是继G-CSF、EPO之后的又一重要药物。     

人胎肝细胞的低温保存和临床应用

本文介绍了我们1985～1989年间深低温(-196℃)保存102例人胎肝细胞研究和临床应用的结果。选用因母体情况而不宜继续妊娠的水囊引产中龄胎儿,在无菌条件下取出肝脏,制备成单细胞悬液。用10％二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂。以1℃/min的速率降温到-30℃,然后5℃/min冷冻到-80℃,冰好的细胞悬液置入液氮(-196℃)中贮存,需要时在38～40℃恒温水浴以快速解冻的程序进行解冻。     

人粒系集落刺激因子(hG-CSF)cDNA于P_RP_L启动子作用下在大肠杆菌中的表达

hG—CSF cDNA在天然状态下很难在大肠杆菌中表达。本文以作者克隆的高活性形式hG—CSF cDNA为模板,经PCR扩增出含hG—CSF信号肽中丙氨酸(Ala)及成熟型全部氨基酸编码序列的cDNA片段,于NcoⅠ、BamHⅠ位点克隆于原核表达载体PJLA602中,用高活性hG—CSF特异探针菌落原位杂交筛选出阳性克隆。此克隆hG—CSF cDNA在λ噬菌体 P_RP_L串联启动子和大肠杆菌atpE翻译起始区(TIR)共同作用下,阳性菌株热诱导表达后经小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。     

冻存胎肝移植治疗小儿白血病1例报告

新鲜胎肝移植治疗白血病我国自83年以来已有10余例,冻存胎肝移植国内尚未见报导。为了探讨其效果,本文报告1例小儿白血病用冻存胎肝移植治疗的结果,并讨论有关问题。病例报告赵××,女,6岁,因发热面色苍白1月于85年11月入院。骨髓检查原粒4%,早幼粒66.2%,诊断急性多颗粒早幼粒细胞白血病。用 HOP 方案诱导缓解及维持治疗共9疗程,MTX 预防脑白共5次。86年4月30日复发,骨髓原+早幼粒34%,用 HOCDP 方案2疗程,5月23日完全缓解继续用原方案维持,6月26日又有复发趋势,原+早幼粒7.8%,移植前     

白细胞介素18在肺癌细胞的表达及其在肿瘤转移中功能的初步探讨

目的 检测白细胞介素18(IL-18)在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达，探讨IL-18在肺巨细胞癌转移中介导的作用。方法 采用半定量RT-PCR或Western blot技术，检测IL-18在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达；构建IL-18 cDNA的重组质粒，测序分析其序列同源性；同时把IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株，观察IL-18对肿瘤细胞体外转移能力和转移表型的影响。结果 同肺巨细胞癌低转移株相比，IL-18 mRNA和蛋白均只能在肺巨细胞癌高转移株检测到；从肺巨细胞癌高转移株扩增出的IL-18 cDNA序列与文献报道^[1]完全一致；此外，将IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株后，稳定转染株细胞可正确表达IL-18融合蛋白，且转染细胞的体外迁移能力显著上调，为空对照组的3倍左右，而上皮细胞间黏附分子E-cadherin蛋白表达显著下调，为空对照组的50％左右。结论 肺巨细胞癌高转移株可组成性表达IL-18，且IL-18可能通过下调E-cadherin表达促进肺巨细胞癌细胞的转移。     

人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量     

人分化相关基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位研究

目的 :研究人源分化相关新基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位。方法 :采用电子拼接和PCR扩增技术 ,从人 2 2周孕龄胎肝cDNA文库中获得与人Ndr1基因同源的一段表达性序列标签 ,继而从成人脑cDNA文库分离出Ndr3的全长cDNA ;采用点杂交分析和多组织Northern杂交分析方法 ,确定其组织表达谱 ;将其亚克隆入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP_N1,用脂质体介导法转染COS_7细胞 ,确定其亚细胞定位。结果与结论 :Ndr3的全长cDNA为 2 879bp ,其开放阅读框 (ORF)编码 375个氨基酸 ,染色体定位为 2 0q12_11.2 3。Northern杂交和点杂交分析显示 ,NDR3在脑组织和睾丸中高表达 ,在肾、心肌和前列腺中有一定量的表达 ,在胚胎组织的表达较低 ,在 8种人肿瘤细胞中的表达极低。与绿色荧光蛋白融合表达的实验结果显示 ,该蛋白定位于核外胞浆内