p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体的构建鉴定及在胃癌细胞中的表达

目的 构建p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体,体外转染胃癌7901细胞,观察其在胃癌细胞中的表达及相关特性.方法 提取人全血总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增p21WAF1和p27WAF1基因并将其分别克隆到真核双表达载体pIRES中构建重组质粒pIPES-p27KIP1-p21WAF1,经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体介导重组质粒plRES-p27KIP1.p21WAF1"转染胃癌7901细胞,收集并提取转染后12、24、48、72 h和5 d各细胞的总RNA,逆转录成cDNA,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中p21WAF1和p27KIP1在RNA水平的表达.带有绿色荧光蛋白的pIRES-EGFP作为对照.结果 RT-PCR扩增分别获得约500和600 bp大小的产物,重组质粒pIRES-p27KIP1.p21WAF1经酶切和测序鉴定证实为p21WAF1和p27KIP1基因.转染胃癌7901细胞48 h时转染率为68%.与空质粒对照组比较,重组质粒转染胃癌7901细胞12、24、48、72 h和5 d后FQ-PCR证实p27KIP1的Ct值(cycle threshold,Ct)分别减少8.2、10、10、7.4和6.7,p21WAF1的Ct值分别减少7.4、8.2、8.2、6.3和5.70其中24 h和48 h的Ct值减少最大.结论 真核双表达载体pIRES-p27KIP1.p21WAF1构建成功并能在胃癌7901细胞内高效表达.     

规范围产期管理 提高孕期保健质量

规范围产期保健管理,是为了实现《中国妇女发展纲要》、保护母婴的安全和健康,不断提高孕期保健管理质量的关键。我市卫生行政部门从2001年开始制订了一系列围产期保健管理办法,实行产科执业资格准入制、并纳入年终的考核指标,从而逐年提高了各项指标,降低了孕产妇、围产儿的死     

侵袭性脑膜瘤的影像学特征与手术策略

目的探讨侵袭性脑膜瘤的影像特征和手术治疗方法。方法回顾性分析56例侵袭性脑膜瘤患者的临床表现、影像学检查、病理结果及手术治疗情况等资料。结果56例侵袭性脑膜瘤在影像学上表现有颅骨的局部增生（18例），肿瘤侵蚀破坏颅骨（11例），硬脑膜“尾”征（27例），瘤-脑界面部分或完全消失（29例），肿瘤边界毛糙模糊、结节状或指状突出、伪足征（24例）。肿瘤粘附或侵入静脉窦或海绵窦（9例），包绕大血管4例，瘤周明显水肿（39饼）等。手术切除按Simpson标准分级，其中0级21例，Ⅰ级19例；Ⅱ级9例，Ⅲ级7例。术后随访0．5—8年，痊愈49例，轻度功能障碍7例。无死亡病例，复发4例。结论侵袭性脑膜瘤有较特殊的影像学特征，可为临床诊断和手术治疗提供参考。尽可能地行病灶根治性切除能有效地减少肿瘤的复发。     

肥厚性心肌病患者行阑尾切除术的麻醉体会

肥厚性心肌病是以心肌的非对称性肥厚 ,心室腔变小为特征 ,以左心室血液充盈受阻 ,舒张期顺应性下降以及左室流出道的动力性梗阻为基本病态 ;被认为是常染色体显性遗传病。其发病率有上升趋势。现报道 1例肥厚性心肌病患者行急诊阑尾切除术的麻醉处理。临床资料　 5 3岁女性患者 ,因急性阑尾炎 2天从外院转入我院。 2年前确诊患有肥厚性心肌病 ,2年来反复出现夜间阵发性呼吸困难 ,2个月前曾因急性左心衰住院治疗。此次入院检查发现心率 (HR) 1 3 0～ 1 5 0次 分 ,血压 (BP) 90 60mmHg,心尖搏动位于第六肋间左销骨中线外 0 5cm处 ,搏动范…     

lncRNA MIAT 在巨噬细胞炎症反应中的作用

目的:探索长链非编码RNA心肌梗死转录本(lncRNA MIAT)在巨噬细胞炎症反应中的作用及其可能参与的炎症通路。方法:脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞J774A.1制备炎症反应细胞模型(LPS组),以等体积PBS刺激的J774A.1细胞为PBS对照组(PBS组),实时定量PCR(RT-qPCR)及ELISA法检测两组IL-1β、TNF-α的mRNA及蛋白表达水平,RT-qPCR检测lncRNA MIAT在两组的表达量及亚细胞定位;shRNA敲低lncRNA MIAT,分为shMIAT敲低(KD)组、shNC阴性对照(NC)组,RT-qPCR检测lncRNA MIAT敲低效率及两组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量;Western blot检测KD、NC组的NF-κB、ERK5等多种转录因子磷酸化水平;在LPS刺激J774A.1细胞分别加入ERK5特异性抑制剂(ERK5-IN-2)、ERK5-IN-2溶解液二甲基亚砜(DMSO),分为抑制剂组、DMSO对照组,Western blot检测ERK5磷酸化水平,RT-qPCR检测两组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量。结果:LPS组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达水平及蛋白表达水平均高于PBS组(P0.05);lncRNA MIAT在LPS组相对表达量显著高于PBS组,且主要表达于细胞核;lncRNA MIAT在KD组显著低于NC组,其在J774A.1细胞的敲低效率为43%。KD组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量显著高于NC组;KD组ERK5磷酸化程度显著高于NC组,而NF-κB、STAT3、ERK1/2磷酸化水平差异无统计学意义;抑制剂组EKR5磷酸化显著低于DMSO对照组,且抑制剂组的IL-1β、TNF-αmRNA相对表达水平显著低于DMSO对照组。结论:lncRNA MIAT可能通过抑制ERK5磷酸化减少IL-1β、TNF-α合成,从而抑制巨噬细胞炎症反应。     

Survivin、TGFβ3和TIMP1基因重组慢病毒多表达载体构建及其表达活性检测

目的应用Gateway技术构建生存素(Survivin)、人转化生长因子β3(TGFβ3)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)慢病毒多表达质粒,并检测其表达活性。方法应用Gateway技术,以自剪切多肽2A串联Survivin、TGFβ3、TIMP1的3段外源基因,并克隆到慢病毒多表达质粒上,通过RT-PCR和Western-blot技术分别检测质粒转染293T细胞后目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR和Western-blot检测结果显示,慢病毒多表达质粒成功表达了3种目的基因,且其mRNA和蛋白质表达水平较空载体对照组、PBS对照组明显升高,差异有显著性(F=17.87~69.11,q=6.94~15.47,P<0.05)。结论成功构建了慢病毒多表达质粒pLenti6.3-Survivin-P2A-TGFβ3-T2A-TIMP1,为下一步病毒的制备以及体内实验提供了基础。     

腹腔镜子宫(阴道)骶骨固定术与改良全盆底重建术治疗盆腔脏器脱垂的临床疗效观察

目的探讨经腹腔镜子宫(阴道)骶骨固定术及改良全盆底重建术用于治疗中盆腔缺陷为主的盆腔脏器脱垂(POP)患者的临床疗效。方法纳入2012年3月-2015年3月住院的中盆腔脏器脱垂达到POP-Q分期Ⅱ~Ⅲ期的患者169例,根据手术方式分为改良全盆底重建组81例和腹腔镜下骶骨固定术组88例。按照规范化标准为患者实施手术,手术中对合并盆底功能障碍进行对应处理。围手术期记录患者相应情况,检测手术主客观满意度。所有患者纳入随访,填写盆底功能障碍及性生活质量评估量表。结果骶骨固定术组平均年龄比较[(43.78±7.63)岁vs.(53.01±10.50)岁],两组绝经概率比较(33.0%vs.60.5%),术前压力性尿失禁(SUI)概率比较(46.1%vs.65.4%)显著低于改良全盆底重建组,差异有统计学意义(P<0.05)。与改良全盆底重建组相比,骶骨固定组手术出血量[(60.32±30.27)mlvs.(98.35±40.28)ml]、尿管留置时间[(1.90±0.90)dvs.(2.50±1.10)d]及子宫切除比例(30.7%vs.60.5%)更低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者手术后12个月时PFIQ-7及PFQI-20评分均较手术前显著下降(P<0.05)。术后12个月时,骶骨固定组的PISQ-12评分显著高于手术前(P<0.05)。结论骶骨固定术及改良全盆底重建术治疗POP患者均具有较好的疗效及安全性,远期预后良好。骶骨固定术改善POP患者性生活质量更为显著。     

彩色多普勒超声诊断胎儿先天性心脏异常的价值探讨

目的探讨彩色多普勒超声诊断胎儿先天性心脏异常的价值。方法对2011年1月—2013年6月在我院进行产前检查的孕妇中出现胎儿心脏异常66例,均采取彩色多普勒超声诊断。随访终止妊娠的引产者,尸检产后的死婴。存活婴儿在产后需定期实行心脏彩超复查。结果经彩色多普勒超声诊断出来的胎儿先天性心脏病的66例中,引产34例,病理解剖22例,均与诊断符合;产后心脏彩超复查32例,与诊断符合的20例,漏诊2例,误诊4例。胎儿先天性心脏病的类型中,以室间隔缺损为主,占46.67%,其次以卵圆孔直径增大最多,占20%;在22例病理解剖的胎儿中,尸解结果与胎儿先天性心脏病的超声表现比照,只有2例左心发育不良被超声诊断为完全性心内膜垫缺损,其余皆符合。结论彩色多普勒超声在胎儿先天性心脏异常的诊断中,可防止或降低胎儿出生缺陷的发生率和死亡率,提高胎儿的生存质量。     

PCNL联合URL与RLU治疗复杂性上尿路结石的疗效分析

目的 探讨输尿管软镜碎石术联合经皮肾镜取石术(简称双镜联合手术)与后腹腔镜输尿管切开取石术(RLU)治疗复杂性上尿路结石的疗效.方法 选取2016年1月至2019年12月在该院就诊的80例复杂性上尿路结石患者为研究对象,分为对照组和观察组,每组40例.对照组采用RLU治疗,观察组采用双镜联合手术.观察并记录两组患者术中出血量、手术时间、住院时间,术后结石清除率及术后并发症情况;ELISA检测两组患者术前及术后的C反应蛋白(CPR)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)和前列腺素F2α(PGF2α)水平.结果 观察组患者术中出血量、手术时间和住院时间均明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者术后第1、3天的CRP、TNF-α、IL-6、PGE2和PGF2α水平均明显高于术前,观察组术后第1、3天的CRP、TNF-α、IL-6、PGE2和PGF2α水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者结石清除率、术后并发症发生率和术后第5天的炎性因子表达水平比较无明显差异(P>0.05).结论 双镜联合手术不仅可以有效清除结石,还能缩短治疗和康复时间.