线粒体自噬在器官纤维化疾病中作用的研究进展

线粒体自噬是一种选择性降解细胞中损伤或多余线粒体的特异性自噬现象,使细胞在应激损伤时能够维持线粒体数量和质量的稳定,从而维持细胞的正常表型和功能。其分子机制途径较为复杂,主要涉及PINK1/Parkin途径、NIX和BNIP3、FUNDC1等。线粒体自噬的异常与多种疾病密切相关,而调节不同阶段线粒体自噬分子机制在疾病发展中的作用已被重视。现就近年线粒体自噬在多种器官纤维化病变中的研究进展综述如下。     

槲皮素诱导肝星状细胞凋亡:基于调控miR-146影响PI3K/Akt信号通路

目的 探讨槲皮素(Que)通过调控肝星状细胞内miR-146水平影响PI3K/Akt信号通路诱导细胞凋亡的作用机制。方法 以大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)为研究对象,设计实验分组：空白对照组、TGF-β组、TGF-β+Que-L(40μmol/L)、TGF-β+Que-M(60μmol/L)和TGF-β+Que-H(80μmol/L)为药物治疗部分;各组阴性对照组、miR-146模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)为细胞转染部分。CCK-8法检测不同浓度的Que对细胞抑制情况,选出低、中、高3个剂量浓度用于后续细胞实验;细胞凋亡流式细胞术检测Que对HSCs细胞凋亡的影响;RT-qPCR法检测HSC-T6细胞药物治疗以及细胞转染后miR-146、α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K和Akt mRNA表达情况;Western blot法检测以上各组中α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达情况;免疫荧光实验检测HSC-T6细胞药物治疗中α-SMA、CollagenⅠ蛋白表达强弱。结果 CCK-8实验结果显示,相同时间...     

额力根-7抗肝纤维化作用机制研究及网络药理学分析

目的采用实验及网络药理学方法研究额力根-7抗肝纤维化的作用机制。方法将50只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组及额力根-7低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠灌胃50%四氯化碳-花生油溶液制备肝纤维化模型。额力根-7低、中、高剂量组分别灌胃135、270、405 mg/kg额力根-7散剂0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na),1次/d,连续10周。采用赖氏法检测大鼠血清GPT、GOT含量,可见光比色法检测ALP含量,采用HE染色及Masson染色观察肝组织结构。提取肝星状细胞(HSCs)RNA及蛋白,采用q-PCR技术及Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)mRNA、蛋白表达水平,流式细胞术检测HSC凋亡情况。通过TCMID、TCMSP数据库及文献检索获得药物有效成分及靶点,通过OMIM和PubMed:Geen数据库获得肝纤维化靶点,运用Cytoscape 3.7.2构建“药物-有效成分-靶点-疾病”网络,运用STRING构建蛋白质相互作用网络(PPI)筛选中心靶标,运用R语言在线检索Bioconductor平台对靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果与模型组比较,额力根-7高、中、低剂量组GPT、GOT、ALP水平降低(P<0.01)。与对照组比较,含药血清低、中、高剂量组α-SMA[(0.24±0.12)、(0.25±0.12)、(0.41±0.15)比(1.00±0.00)]、collagenⅠ[(0.64±0.24)、(0.33±0.13)、(0.28±0.11)比(1.00±0.00)]mRNA水平降低(P<0.05或P<0.01),含药血清低、中、高剂量组α-SMA[(0.03±0.01)、(0.01±0.00)、(0.01±0.00)比(0.04±0.00)]、collagenⅠ[(0.08±0.01)、(0.10±0.01)、(0.13±0.01)比(0.18±0.01)]蛋白水平降低(P<0.01)。PPI结果显示,共筛选出额力根-7中35个有效成分,196个药物靶点,3740个疾病靶点,药物疾病共同靶点170个。GO富集分析获得159个条目,其中主要的分子功能包括DNA结合转录激活活性、RNA聚合酶Ⅱ特异性、细胞因子受体结合等;KEGG富集分析获得43条信号通路,其中排在前3位的通路为PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、细胞凋亡。结论额力根-7可通过多成分、多靶点、多通路发挥抗肝纤维化作用。     

蒙药七味清肝散抗肝纤维化的作用机制:基于UHPLC-TOF-MS和网络药理学方法

Objective To elucidate the chemical composition of the Mongolian medicine Qiwei Qinggan Powder and explore its key targets, related pathways and its therapeutic mechanism for liver fibrosis. Methods UHPLC-TOF-MS was used to analyze the composition of Qiwei Qinggan Powder. The therapeutic targets of Qiwei Qinggan Powder were screened in Swiss Target Prediction database, and liver fibrosis-related targets were screened in TTD and GeneCards databases to identify the anti-fibrosis targets of Qiwei Qinggan Powder by intersection using Venny.2.1.0. The protein interaction was analyzed using STRING database, the GO functions and KEGG pathways were analyzed on the Metascape platform, and the core targets and active components were verified by molecular docking using AutoDock software. The therapeutic mechanism of Qiwei Qinggan Powder against liver fibrosis was verified in rat models and cell experiment. Results We identified a total of 45 chemical constituents in Qiwei Qinggan Powder, including flavonoids, alkaloids, coumarins, terpenes, phenols and fatty acids. Network pharmacological analysis identified 62 targets of Qiwei Qinggan Powder, including 10 core targets. GO enrichment analysis suggested that the therapeutic effect of Qiwei Qinggan Powder was mediated by biological processes (BP), cell components (CC) and molecular functions (MF). KEGG enrichment results showed that PI3K/Akt, Rap1, MAPK, AMPK and PPAR were all pathways associated with liver fibrosis. Molecular docking showed that quercetin, luteolin and kaempferol could bind to Akt1, PIK3R1 and MAPK1, respectively. In rat models of liver fibrosis, treatment with Qiwei Qinggan Powder significantly suppressed proliferation of fibrous tissues and inflammatory cell infiltration to improve fibrosis in the liver tissue. Western blotting demonstrated that Qiwei Qinggan Powder significantly decreased the expressions of the Liver fibrosis markers including α-SMA, Collagen1, PI3K and Akt (P<0.01). In vitro cell experiment, Qiwei Qinggan Powder-containing serum obviously promoted apoptosis of HSC-T6 cells. Conclusion The therapeutic effect of Qiwei Qinggan Powder against liver fibrosis is mediated by multiple components, targets and channels, and its mechanism may involve the regulation of PI3K, Akt and other key targets and modulation of cell apoptosis and energy metabolism.     

整合素通路参与器官纤维化过程的研究进展

整合素(Integrin)是一种跨膜糖蛋白,普遍存在于细胞中,是控制各种生理细胞功能的异二聚体表面受体[1]。纤维化(fibrosis)是指各种组织的变性和硬化性,并可归因于包括胶原在内的细胞外基质成分的过度沉积,是各种慢性炎症反应的最终结果。在器官纤维化进程中,整合素主要对介导细胞与细胞外间质(extracellular matrix,ECM)的作用具有重要的影响,目前研究发现整合素在正常细胞质中表达活跃并随着纤维化的发展进程而发生改变。在本文中主要对整合素参与器官纤维化的过程做一综述。     

蓝盆花醇提物抗肝纤维化的作用及机制研究

目的 探讨蓝盆花醇提物抗肝纤维化（HF）的作用及机制。方法 采用四氯化碳灌胃法建立HF模型。通过观察肝组织病理学变化,检测HF指标[α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（CollagenⅠ）]及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平,考察低、中、高剂量（50、100、200 mg/kg）蓝盆花醇提物对HF模型大鼠的改善作用及可能机制。按1 800 mg/（kg·d）（以生药量计）灌胃大鼠蓝盆花醇提物制备含药血清,以低、中、高浓度（将含药血清稀释至10%、15%、20%）蓝盆花醇提物含药血清干预HSC-T6细胞,观察其对微小RNA-21(miRNA-21)表达的影响;将miRNA-21模拟物/抑制剂转染至HSC-T6细胞,并检测PI3K/Akt信号通路相关因子的mRNA和蛋白表达水平。结果 体内实验结果表明,低、中、高剂量蓝盆花醇提物均可显著改善HF模型大鼠肝组织病理学变化,降低其胶原百分比（P<0.01）,下调其HF指标及PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达（P<0.01）,上调其磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）...     

基于ITGB4/FAK/p38信号通路蒙药蓝盆花总黄酮提取物体内外抗肝纤维化的作用研究

目的 探讨蒙药蓝盆花总黄酮提取物(total flavonoid extract of Scabiosa comosa, TFS)对肝纤维化体内外的影响,以及通过对ITGB4/FAK/p38信号通路的调控对肝纤维化的作用。方法 体内实验：选取50只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,TFS高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)剂量组,除对照组外均给予2ml/kg CCl₄灌胃。期间对TFS各剂量组给药,而对照组和模型组不做处理,灌胃10周。检测血清丙氨酸氨基转移酶(glutamic-pyruvic transaminase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(glutamic-oxaloacetic transaminase, AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)含量及肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline, HYP)含量;苏木精-伊红(hematoxylin eosin, HE)染色、Masson染色观察肝组织病理学改变;肝组织经转录组测序筛选与肝纤维化相关的通路;实时荧光定量聚合酶链反应...