哮喘小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+调节T细胞和Foxp3蛋白的变化及淫羊藿苷干预作用

目的:研究哮喘小鼠CD4+CD25+Foxp3+调节T(Treg)细胞和Foxp3蛋白的变化,探讨淫羊藿苷对哮喘干预机制。方法:将BALB/c小鼠32只随机分为正常对照组、哮喘模型组、淫羊藿苷组、地塞米松阳性对照组,每组8只。哮喘模型制备用卵白蛋白(OVA)致敏大鼠并雾化吸入刺激,治疗组采用相应药物灌胃给药,对照组用等量生理盐水代替。最后一次激发24小时后,采用Buxco肺功能仪有创法检测小鼠气道反应性;HE染色评价观察小鼠肺组织病理形态学改变;流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及Foxp3蛋白表达量;免疫印迹法测定肺组织Foxp3蛋白表达量;ELISA法测定血清及肺泡灌洗液(BALF)IL-10水平。结果:与正常对照组比较:模型组气道阻力及气道炎症指数显著增加(P<0.05);脾Treg细胞比例无明显变化(P>0.05);脾Foxp3蛋白表达显著下降(P<0.05),肺组织Foxp3蛋白表达显著升高(P<0.05),外周血IL-10水平显著下降(P<0.05),BALF中IL-10无显著差异(P>0.05);与模型组比较:淫羊藿苷组气道阻力和气道炎症明显减轻(P<0.05);脾Treg细胞比例和脾Foxp3蛋白表达水平无显著变化(P>0.05),但淫羊藿苷可进一步上调哮喘小鼠肺组织Foxp3蛋白表达量(P<0.05),并增加外周血IL-10水平(P<0.05)。结论:哮喘小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞Foxp3蛋白表达水平下降,淫羊藿苷可显著改善哮喘小鼠气道炎症和气道高反应,可能与其上调肺组织Foxp3蛋白表达和增加外周血IL-10水平相关。     

雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠模型气道炎症的作用

目的探讨雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠气道炎症的作用与机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为5组：正常对照组、哮喘缓解组、哮喘模型组、地塞米松组和雷帕霉素组,每组10只。采用卵蛋白致敏与激发制备哮喘模型,休息3周后,采用卵蛋白再次激发1周,在小鼠休息期间治疗组采用雷帕霉素或地塞米松干预。采用Buxco无创肺功能仪检测气道高反应性;Luminex测定肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13、IL-17及INF-γ水平;肺组织HE染色评价观察小鼠肺组织气道炎症;Westernblot检测肺组织p-S6、S6、AKT、p-AKT（S473）蛋白含量;流式分析测定肺泡灌洗液CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率。结果与正常组及哮喘缓解组比较：哮喘模型组气道反应性升高（P＜0.01）,灌洗液IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平增加（均P＜0.01）,肺组织气道炎症评分增高（P＜0.01）,肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白增加（P＜0.01）,灌洗液Treg细胞比例上升（P＜0.01）;与模型组比较：雷帕霉素在乙酰甲胆碱浓度为6.25mg/ml时,可降低Penh值（P＜0.01）,同时降低肺泡灌洗液IL-4水平（P＜0.01）,并抑制肺组织炎症细胞浸润（P＜0.01）,而肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白下降（P＜0.01）,但雷帕霉素可降低肺泡灌洗液Treg细胞比例（P＜0.01）。结论在哮喘缓解期应用雷帕霉素,其可通过mTORC1信号通路显著抑制哮喘急性发作时气道炎症;在哮喘缓解期应用雷帕霉素,对控制哮喘再次发作具有积极作用。     

淫羊藿对哮喘大鼠气道高反应性的影响

目的: 探讨淫羊藿对哮喘大鼠模型气道高反应性的影响. 方法: 将SD大鼠60只随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、及淫羊藿低、中、高剂量组,每组10只.实验开始第0天,大鼠ip含卵蛋白100μg和氢氧化铝100 mg的生理盐水溶液,第14天起予1%卵蛋白激发3周,第35天起2%卵蛋白激发1周.治疗组第14天起给予低、中、高剂量淫羊藿0.25,0.5,1 g·kg^-1,或地塞米松1 mg·kg^-1,每天1次,连续4周.正常组与模型组用等量生理盐水代替.采用Buxco肺功能仪有创法检测气道反应性;ELISA法检测肺泡灌洗液细胞因子干扰素(INF)-γ,白介素(IL)-4,IL-5,IL-13,IL-10,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α及转化生长因子-β(TGF-β);肺组织HE,PAS及Masson三色染色评价观察小鼠肺组织炎症、气道黏液分泌水平及气道壁周围胶原沉积水平. 结果: 与正常组相比,模型组气道阻力(R_L)明显升高,肺顺应性(C_dyn)明显降低(P<0.01);肺泡灌洗液IL-4,IL-5,IL-13,TGF-β₁和TNF-α水平显著升高(P<0.05, P<0.01),而INF-γ水平显著下降(P<0.05);气道炎症指数、气道黏液评分、及气道周围胶原评分显著升高(P<0.01).与模型组相比,淫羊藿低、中、高剂量组可不同程度降低气道阻力,改善肺顺应性(P<0.05, P<0.01);淫羊藿高剂量组可显著降低哮喘模型组肺泡灌洗液中IL-4(P<0.05),IL-5和IL-13水平(P<0.01);中剂量组可显著降IL-5和IL-13水平(P<0.05,P<0.01),且能显著升高IL-10水平(P<0.05);低剂量组可显著降低IL-5水平(P<0.05);淫羊藿中、高剂量治疗组气道炎症指数、气道黏液评分,以及气道周围胶原面积显著降低(P<0.05,P<0.05). 结论: 淫羊藿可改善哮喘模型气道高反应性,这与其抑制气道炎症,及改善气道重塑相关.     

异常黑胆质证哮喘病证结合模型的建立及评价

目的:建立并评价异常黑胆质证哮喘病证结合模型。方法:采用多因素复合作用建立异常黑胆质证模型,结合卵蛋白致敏激发,进一步建立异常黑胆质证哮喘病证结合模型,观察其一般状态、行为学、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPAA)功能、交感/副交感神经功能、气道反应性、炎症、胶原沉积等相关指标的变化。结果:异常黑胆质证组、异常黑胆质证哮喘组出现体质量下降(P0.05),饮食水量增加(P0.05),在旷场试验中自主活动减少(P0.05),对糖水偏爱程度下降(P0.05)等表现,血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平升高(P0.05),环磷酸腺苷(cAMP)、cAMP/环磷酸鸟苷(cGMP)下降(P0.05);哮喘组、异常黑胆质证哮喘组出现气道阻力升高(P0.05),血清、肺泡灌洗液中Th1/Th2细胞因子失衡,呈Th2优势型(P0.05),HE染色显示炎细胞浸润明显(P0.05),PAS染色提示黏液分泌增多(P0.05),MASSON染色提示胶原沉积增多(P0.05),其中,以异常黑胆质证哮喘组改变更为突出。结论:采用多因素复合和卵蛋白致敏激发建立的异常黑胆质证哮喘模型一方面具有类似维吾尔医异常黑胆质证的临床表现及相关生理学指标的改变,另一方面具有气道高反应性、气道炎症、气道重塑等哮喘疾病特征,表明该模型的建立具有一定的可行性。     

胰岛素、瘦素、雄激素与多囊卵巢综合征发病机制研究进展

 多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是一种发病呈多因性、临床表现呈多态性的内分泌紊乱综合征。其发病机制至今尚未阐明,既往研究认为高胰岛素血症与高雄激素血症在PCOS发病机制中发挥着重要作用。近年来,又有报道高瘦素血症是PCOS发生不可忽略的因素。为此,本文综合分析了三者间的相互作用,并在此角度上探讨其与PCOS发病机制的相关性。     

胆囊切除术致再次手术4例体会

回顾我院自1997—2007年共进行的496例胆囊切除术，其中312例行腹腔镜胆囊摘除术（LC），传统开腹胆囊摘除术（OC）184例，其中4例进行再次手术。资料及原因分析如下。     

中医消法对多囊卵巢综合征伴非酒精性脂肪性肝病脂代谢的影响

目的观察中医消法治疗多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）伴非酒精性脂肪性肝病（non-acoholic fatty liver disease,NAFLD）患者脂代谢的疗效,分析PCOS与NAFLD相关性,并探讨其作用机理。方法选取35例PCOS伴有NAFLD患者为脂肪肝组,同期选择35例PCOS不伴NAFLD患者为非脂肪肝组,健康女性志愿者20名为对照组。所有受试者进行问卷调查建立个人病例档案,测量身高、体重、腰围（waist circumference,WC）、臀围（hip circumference,HC）;检测血清睾酮（testosterone,T）、泌乳素（prolactin,PRL）、卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、雌二醇（estradiol,E2）、瘦素（leptin）、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、空腹胰岛素（fasting insulin,FINS）、餐后2 h血糖（2 h postprandial blood glucose,2 h PBG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、性激素结合球蛋白（sex hormone binding globulin,SHBG）等指标,计算体重指数（body mass index,BMI）、腰臀比（waist-to-hip ratio,WHR）、稳态模型胰岛素抵抗指数（homeostatic model assessment for insulin resistance,HOMA-IR）,并对脂肪肝组采用消法方药进行3个月治疗前后观察,治疗结束后停药随访6个月。结果非脂肪肝组患者的体重、BMI、WHR、T、LH、LH/FSH、leptin、FINS、2 h PBG、HOMA-IR、LDL-C显著高于对照组（P<0.05）,FSH显著低于对照组（P<0.05）;脂肪肝组患者的体重、BMI、WC、HC、WHR、leptin、FINS、2 h PBG、HOMA-IR、TG、LDL-C、ALT、AST较非脂肪肝组显著升高（P<0.05）,HDL-C显著降低（P<0.05）。采用消法方药治疗PCOS伴NAFLD患者后,83.87%恢复月经周期（26/31）;32.26%脂肪肝程度减轻或消失（10/31）;总体有效率85.71%（24/28）;48.28%受孕（14/29）;体重、BMI、FBG、leptin、TG、ALT、AST水平均较治疗前显著降低（P<0.05）,SHBG水平显著增高（P<0.05）,HOMA-IR、FINS以及T、FSH、LH、LH/FSH治疗前后比较,差异无统计学意义。结论PCOS患者存在糖脂代谢紊乱现象,伴有NAFLD的PCOS患者表现更为严重;消法能有效恢复PCOS伴有NAFLD代谢紊乱状态,改善患者脂肪肝程度,恢复正常的月经周期,提高受孕率,其作用环节是否通过降调leptin水平,纠正脂代谢,从而缓解患者的临床症状有待进一步深入研究。     

胆囊切除术致再次手术4案例的体会

回顾我院自1997年到2007年共进行了496例胆囊切除术。其中312例行腹腔镜胆囊摘除术（LC），传统开腹胆囊摘除术（OC）184例，其中就有4例进行再次手术。     

黄芪甲苷对Th2型淋巴细胞D10.G4.1体外作用的研究

目的探讨黄芪甲苷对Th2型淋巴细胞株(D10.G4.1,D10)体外的干预作用。方法体外培养D10细胞,采用ConA作为刺激剂,分别予以2、4、8×10-5mol·L-1剂量黄芪甲苷体外干预,并用地塞米松作为对照。CCK-8法检测药物对D10细胞的增殖影响;流式细胞术检测药物对D10细胞凋亡和周期的影响;ELISA法检测药物对细胞培养上清IL-4、IL-5、IL-13及TNF-α水平的影响;Western blot法检测D10细胞gata-3表达水平。结果黄芪甲苷各剂量组对D10细胞增殖及凋亡均无明显影响(P>0.05);但黄芪甲苷高剂量组IL-13与gata-3表达水平明显下降(P<0.01),而低剂量组TNF-α明显下降(P<0.01)。结论黄芪甲苷体外具有抑制Th2反应的作用,但与药物细胞毒性或诱导凋亡无关。