人胎冠状动脉原位杂交c-myc和jun原癌基因表达

目的研究原癌基因c-myc和jun在人胎冠状动脉发育过程中的表达与平滑肌细胞增殖的关系.方法用原位杂交方法检测,胎龄分别为16周、22周(因治疗需要引产)的胎儿和意外死亡的足月胎儿冠状动脉前降支c-myc mRNA和jun mRNA的表达水平.杂交反应产物用图像分析仪(MIAS300)作定量分析.结果C-myc mRNA原位杂交反应产物与被测血管区域面积的百分比在16周、22周和足月胎儿分别是70、56和10;Jun mRNA的杂交信反应产物与被测血管区域面积的百分比在这三个时期分别是68、53和8.两个原癌基因在不同阶段的表达均具有显著性差异.结论本实验首次报道c-myc和jun在人胎冠状动脉发育过程中平滑肌的表达图型,c-myc和jun在胎儿冠状动脉平滑肌细胞增殖和内膜的形成过程中可能具有重要的调控作用.     

细胞外基质成分及其构筑对平滑肌细胞黏着斑激酶表达的影响

目的:探讨细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)及三维基膜Matrigel胶对平滑肌细胞黏着斑激酶(FAK)表达的影响。方法:免疫荧光组织化学技术对生长在FN、LN和Matrigel胶里的平滑肌细胞FAK的表达进行检测。结果:生长存FN、LN和Matrigel胶里的平滑肌细胞FAK的表达依次为最高、次之和最低,各组之间有统计学意义;平滑肌细胞FAK磷酸化水平和FAK的表达呈正相关,生长在FN上的平滑肌细胞FAK(py397)的表达水平最高,生长在Matrigel胶里的平滑肌表达最低。结论:细胞外基质成分及其构筑对平滑肌细胞FAK的表达具有重要调节作用。     

NMDAR1和GABA_A受体的α_1及α_3亚单位在成年猫小脑的定位分布

用免疫组织化学反应及 Nissl染色探讨了 NMDAR1及 GABAA受体α1 和α3亚单位在成年猫小脑皮质及小脑核的定位分布。结果表明 ,NMDAR1免疫反应产物主要分布在 Purkinje细胞胞质和分子层的树突 ,分子层的星形细胞和篮细胞以及颗粒细胞层的颗粒细胞和胶质细胞呈中等强度的阳性反应 ,小脑核的神经元胞质和部分突起着色明显。 GABAA受体的α1 亚单位免疫反应产物主要分布在 Purkinje细胞胞质和树突 ,分子层的星形细胞和胶质细胞呈弱阳性 ,小脑核的神经元阳性反应明显。GABAA 受体的α3亚单位免疫反应产物主要分布在 Purkinje细胞胞质和树突 ,分子层的星形细胞和篮细胞着色明显 ,胶质细胞呈免疫反应弱阳性 ,小脑核神经元及纤维着色明显。在 Purkinje细胞层 NMDAR1、GABAA受体α1 及α3亚单位免疫阳性神经元分别占 Purkinje细胞总数的 80 % ,61% ,88%。结论 :NMDAR1、GABAA受体的α1 及α3亚单位在成年猫小脑具有广泛的分布。这些受体在介导小脑的复杂功能中可能发挥重要的作用。     

卵巢切除和衰老对大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

目的探讨卵巢切除和衰老对大鼠基底前脑的Meynert基底核和斜角带水平肢胆碱能神经元的影响。方法利用乙酰胆碱转移酶免疫组织化学方法观察正常大鼠、卵巢切除大鼠和老年大鼠的胆碱能神经元数量、胞体大小和突起的变化。结果卵巢切除组动物Meynert基底核和斜角带水平肢的ChAT免疫阳性神经元的细胞数(37±5,126±24),胞体平均面积(107.33±21.45μm2,101.50±25.88μm2),突起数目(1.7±0.5,1.5±1.0)均低于正常成年组ChAT免疫阳性神经元的细胞数(56±8,164±20),胞体平均面积(167.17±40.12μm2,193.33±44.59μm2)和突起数目(3.0±0.6,3.0±0.9),差异有显著性(P<0.05)。老年组的ChAT免疫反应神经元细胞数(39±6,126±15),胞体平均面积(108.00±22.10μm2,95.17±29.64μm2),突起数目(2.0±0.9,1.8±0.8)与正常组比较同样具有明显的差异性(P<0.05)。结论卵巢切除和衰老引起大鼠基底前脑的胆碱能神经元胞体变小、数量减少、突起数目明显减少,提示雌激素缺乏能导致基底前脑的胆碱能神经元溃变、丢失,可能与AD病人出现的学习记忆和认知功能障碍有关。     

阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1和eNOS表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1 和eNOS表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为4组,即股动脉结扎组（L组）、高胆固醇血症+股动脉结扎组（HL组）、高胆固醇血症+阿托伐他汀+股动脉结扎组（AL组）、高胆固醇血症+生理盐水+股动脉结扎组（NL组）。HL组、AL组和NL组大鼠均喂食可致动脉粥样硬化饲料8周。AL组股动脉结扎后10 mg/kg 阿托伐他汀腹腔注射2 周。采用免疫荧光法观察后肢侧支血管LOX-1 和eNOS的表达。体外实验中,转染LOX-1-siRNA的内皮细胞经oxLDL和阿托伐他汀单独或共同处理后,RT-PCR和Western blotting检测LOX-1和eNOS的表达,Griess法检测NO的产生。结果LOX-1表达于大鼠正常侧支血管中,在高胆固醇血症大鼠中其表达则明显升高,在阿托伐他汀治疗后明显降低。eNOS在正常生长的侧支血管中呈强阳性表达,在高胆固醇血症血管中表达下调,经阿托伐他汀治疗后其表达上调。体外实验中,oxLDL处理使内皮细胞LOX-1 表达升高,eNOS表达降低,而阿托伐他汀处理后细胞中LOX-1 表达下调,eNOS表达上调。此外,在细胞中使用LOX-1 siRNA 干预可消除oxLDL刺激对eNOS表达的影响。结论高胆固醇血症或oxLDL可能通过LOX-1/eNOS通路诱导内皮功能障碍,阿托伐他汀可以改善这一状态,表明阿托伐他汀可作为缺血性疾病诱导侧支血管损害的潜在治疗药物。     

阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管生长的影响

目的　探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管生长的影响。 方法　28只成年SD大鼠,给予高脂饮食8周,建立结扎股动脉诱导的高胆固醇血症大鼠侧支血管生长模型。随机将动物分为单纯股动脉结扎组（L组）、高胆固醇血症+股动脉结扎组（HL组）和阿托伐他汀（0.3 mg·kg-1·14 d-1,腹腔注射）+高胆固醇血症+股动脉结扎组（AL组）。存活7 d后,采用血管造影,HE染色和共聚焦免疫荧光术,观察高胆固醇血症情况下,阿托伐他汀应用对侧支血管生长的作用以及重要的促侧支血管生长分子在侧支血管表达模式的变化。 结果　与L组比较,HL组的侧支血管数目减少,侧支血管生长受到损害,表现为血管内膜过度增生,中膜明显增厚,导致血管腔狭窄,且血管壁细胞增殖和外膜炎症细胞减少;AL组应用了阿托伐他汀,侧支血管的生长较HL组明显改善,发育为管腔较大的侧支血管,血管壁细胞的增殖和外膜炎症细胞增多,侧支血管数目增加。其侧支血管数目,血管横截面积和免疫荧光强度差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论　高胆固醇血症损害大鼠后肢侧支血管的生长;阿托伐他汀可促进血管壁细胞的增殖和外膜巨噬细胞的增多,从而改善和恢复侧支血管的生长。     

猪后肢动脉生成过程中血管内皮细胞eNOS的表达

目的:研究猪后肢动脉生成过程中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达及其活性.方法:猪股动脉行单侧结扎术,另一侧行假手术,两周后处死动物.应用免疫荧光组织化学技术检测侧支血管中eNOS表达,用抗磷酸化的eNOS抗体(P-eNOS)检测eNOS的活性.用Leica激光共聚焦显微镜观察并拍照,图片用Silicon Graphics Octane进行处理.结果:在正常小动脉血管中eNOS的表达非常低,呈弱阳性;在生长的侧支血管中eNOS的表达显著上调,呈强阳性.在正常血管和生长的侧支血管中eNOS的表达都定位于内皮细胞.在生长的侧支血管中,P-eNOS表达水平非常高,免疫双重染色证实eNOS和P-eNOS的表达共同定位于内皮细胞.结论:侧支血管发育过程中,eNOS的表达被上调,并具有生物活性,高水平和具有活性的eNOS可能通过调节内皮细胞的增殖、移动及对炎症的控制,从而对侧支血管的生长发挥重要作用.     

大鼠血管性痴呆模型海马 CAI区神经元MAP-2和NF表达的研究

目的观察血管性痴呆大鼠海马CAI区神经元MAP-2、NF表达变化,探讨缺血再灌注损伤后神经元骨架蛋白表达变化与学习记忆的相互关系.方法采用Morris水迷宫筛选空间学习记忆能力正常的雄性Wistar大鼠60只;正常组(Norma1);椎动脉焊扎组(VO);双侧颈总动脉结扎20 nin再灌组(BCCO/R);全脑缺血20min再灌组(GI/R);后三组又分为存活7,14和30天组,处死前作水迷宫检测.用免疫组织化学方法检测MAP-2和NF表达,常规尼氏染色法镜下计数海马CAI区存活神经元.结果水迷宫检测GI/R组大鼠潜伏期增加,尼氏染色证实GI/R组锥体神经元减少(P＜0.01).与Normal组比较,BCCO/R7 d组海马CAI区辐射层MAP-2表达减弱,神经元突起中NF表达减少(P＜0.05);而BCCO/R14 d和3O d组胞浆MAP--2和NF表达均无变化(P＞0.05).GI/R组海马CAI区MAP-2、NF的表达在突起中几乎消失,而在锥体神经元核周有强表达,与各对照组比较判别有统计学意义(P＜0.05).结论MAP-2、NF在神经元突起中减少,而在胞体中聚集,是神经元可塑性的体现,在血管性痴呆动物模型中,可能对神经元有保护作用.     

与人染色体结构维持基因6高度同源应力可诱导基因克隆及其表达☆

背景：已往研究显示，心肌对短暂缺血再灌的应答与多种基因表达改变有关，但它们的特性尚未明确。 目的：克隆和分析应力可诱导基因特性以探讨心肌短暂缺血再灌损伤的分子机制。 设计：对比观察的动物实验。 单位：中南大学湘雅医院血液科。 材料：选用16只健康德国Landrace家猪，体质量21~39 kg，由德国巴特瑙海姆马普所生理与临床研究所实验心脏病学研究室提供。对家猪的处置遵循美国生理学会的规章。按随机数字表法将16只家猪分为缺血再灌注手术组（n =14）和假手术组（n =2）。缺血再灌注组动物在第二次缺血再灌注后0，30，90 min 3个时间点进行观察。每组又分为缺血组织和对照组织两部分。 方法：实验于1998-07/2007-05分别在德国巴特瑙海姆马普生理与临床研究所实验心脏病学研究室和中南大学湘雅医院血液科完成。将动物麻醉后，开胸，稳定30 min后，缺血再灌注组动物阻塞左冠状动脉前降支10 min，灌注30 min，再次阻塞10 min，时间点为(10’-30’ -10’)，再灌注30 min(时间点为10’-30’-10’-30’)；再灌注90 min(时间点为10’-30’-10’-90’)后取心肌组织。假手术组不进行缺血再灌注。按预定观察时间点将动物分别麻醉后处死，取左冠状动脉前降支区域的组织作为缺血组织，左冠状动脉弦支区域的组织作为对照组织。首先，以cDNA片段RKD7.1作为探针筛选猪心脏cDNA文库并通过DNA序列测定分析所克隆基因的DNA序列。同时，通过短暂阻断和再灌注猪左冠状动脉前降支形成缺血再灌心肌。然后，从该缺血再灌猪心肌组织提取总RNA后用于Northern杂交分析，以基因杂交后灰度值与其18S rRNA灰度值的比值作为基因表达的相对水平。 主要观察指标：克隆基因DNA和氨基酸序列分析及克隆基因表达分析。 结果：16只健康德国Landrace家猪均进入结果分析。通过筛选文库，克隆到一个含有3461个碱基对的cDNA。DNA序列测定和检索分析显示该cDNA与可能编码DNA修复蛋白的人类染色体结构维持基因6具有86%的相同性，并与鼠染色体结构维持基因6具有84%的相同性。进一步分析发现，由此cDNA推导出的最长多肽链含有1 007个氨基酸残基，它与人类染色体结构维持基因6蛋白具有92%相同性, 与鼠染色体结构维持基因6蛋白具有89%相同性。为此，该cDNA取名为人类染色体结构维持基因6猪同源基因。Northern杂交结果显示，猪染色体结构维持基因6 mRNA在缺血再灌心肌的表达为增加并且其mRNA在所检测的各种器官中均存在达。 结论：从猪心肌克隆到一个应力可诱导猪染色体结构维持基因6，它与人类染色体结构维持基因6具有高度的同源性，猪染色体结构维持基因6或者与其他分子可能共同参与缺血再灌所致猪心肌DNA损伤的早期修复。     

细胞外基质对血管平滑肌细胞桩蛋白和纽蛋白表达的影响

【目的】探讨细胞外基质（extracellular matrix,ECM）对体外培养的血管平滑肌细胞（smooth muscle cells,SMCs）黏着斑（focal adhesions,FAs）分子桩蛋白（paxillin）和纽蛋白（vinculin）表达的影响。【方法】将第4～6代大鼠主动脉SMCs分别种植在涂有纤维连接蛋白（fibronectin,FN）或层黏连蛋白（laminin,LN）的盖玻片上或种植在基质胶内进行培养。采用共聚焦免疫荧光技术检测paxillin和vinculin的表达,并通过FAs分子paxillin／F-aetin和vineulin／F-actin的双重荧光染色显示。【结果】种植在FN上的vinculin表达最低,LN次之,而在Matrigel胶中表达最高;在FN上vinculin在胞质分布较多,在FA＇s较少;而生长在LN基质上和基质胶中vincu1in较多定位在FAs,在胞质分布较少。Vinculin的荧光强度在FN、LN及基质胶中分别为（64．72±7．18）AU／μm2,（89．82±5．11）AU／μm2,（117．19土16．99）AU／μm2,依次增高,且组间比较有统计学意义（P〈0．05）。种植在FN上的paxillin最高,LN上次之,而Matrigel胶中表达最低;基质胶中paxillin主要分布于FAs,而FN上的除分布于FAs外,在胞浆的表达水平也较高。Paxillin的荧光强度在FN、LN及基质胶中分别为（129．87±10．22）AU／μm2、（86．59±9．90）AU／μm2、（56．32±7.54）AU／μm2,依次降低,且组间比较有统计学意义（P〈0．05）。【结论】不同的ECM成分对FAs分子的表达有影响：FN上调paxillin的表达,下调vinculin的表达;而LN和基质胶上调vinculin的表达,下调paxillin的表达。