抗肝癌细胞噬菌体单链抗体库的构建及筛选

构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选 ,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性 ,并对阳性克隆进行表达。成功构建了库容为 1 1× 10 6抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库 ,经筛选得到了与HepG2细胞具有较强结合能力的单链抗体 ,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达。序列测定结果表明 ,VH 和VL 基因符合小鼠抗体可变区特征 ,scFv基因拼接正确     

两孔法腹腔镜下精索静脉曲张高位结扎术的应用

目的总结两孔法腹腔镜下精索静脉曲张高位结扎术的临床经验。方法回顾性分析28例两孔法腹腔镜下精索静脉曲张高位结扎术的疗效及恢复情况。结果28例手术均获成功,无并发症,平均手术时间32 min,术后住院2~3 d,术后随访7~40个月,无一例复发。结论两孔法腹腔镜精索静脉曲张高位结扎术创伤小,疗效好,恢复快,安全可靠,值得临床推广。     

胆囊嵌顿性结石并急性胆囊炎的腹腔镜手术160例

胆囊嵌顿性结石因胆囊颈管部的急慢性炎症使Calot三角解剖结构发生改变,从而成为腹腔镜胆囊切除术（LC）中最困难、最复杂的一种病变,即使开腹行胆囊切除术有时亦不得不采用胆囊部分切除的方法处理。现将2004年10月至2009年12月我科所行胆囊嵌顿性结石并急性胆囊炎LC的体会报道如下。     

胆囊嵌顿性结石并急性胆囊炎的腹腔镜手术160例分析

胆囊嵌顿性结石因胆囊颈管部的急慢性炎症使Calot三角解剖结构发生改变,从而成为腹腔镜胆囊切除术(LC)中最困难、最复杂的一种病变,即使开腹行胆囊切除术有时亦不得不采用胆囊部分切除的方法处理.现将2004年10月至2009年12月我科所行胆囊嵌顿性结石并急性胆囊炎LC的体会报道如下.     

股浅静脉戴戒术治疗原发性下肢深静脉瓣膜功能不全96例

原发性下肢深静脉瓣膜功能不全是下肢静脉倒流性疾病和浅静脉曲张最主要的原因,常影响下肢深静脉、浅静脉和交通静脉三个系统或其中二个系统。其治疗需根据病变范围、严重程度采取个体化的综合性治疗^[1]。近几年来,我们对患轻中度的原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者在综合性治疗基础上、采用股浅静脉戴戒术（也称环缩术）修复瓣膜功能,控制深静脉血液倒流,取得了较好的临床疗效,现报道如下。     

O^6—甲基鸟嘌呤DNA—甲基转移酶活性的测定方法

O~6-甲基鸟嘌呤 DNA-甲基转移酶在哺乳动物细胞 DNA 烷化损伤的修复中起着重要作用。本文报道了以~3H-MNU(~3H-甲基亚硝脲)标记的小牛胸腺 DNA 为底物来检测 O~6-甲基鸟嘌呤 DNA-甲基转移酶的方法。该方法可用于哺乳动物细胞 DNA 损伤与修复的研究,并为有预见性地进行肿瘤选择性化疗提供了技术手段。     

不同周期的S-180V细胞DNA辐射损伤修复的比较

根据小鼠腹水瘤S-180 Ⅴ细胞的生长特点,设计了获取G_1、S、M期同步化细胞的方法,并用碱洗脱法对同步化细胞DNA单链断裂程度与重接修复速度进行了比较。观察到0～50Gyγ线照射范围内,不同周期细胞DNA单链断裂损伤无明显差别。30Gy照射后,不同周期细胞的断裂的DNA的修复速度不同,其中以S期重接修复速度最慢。     

几种辐射致敏剂对γ线引起的哺乳物细胞DNA单链断裂及其重接修复的影响

用微孔滤膜过滤法从分子水平上比较了6种不同类型的辐射致敏剂对γ线引起的CHO细胞DNA单链断裂与重接修复的影响。观察到:5-溴尿嘧啶脱氧核苷能增加DNA单链断裂的产量;N-乙基马来酰亚胺和碘化钾能抑制DNA单链断裂的重接修复;阿的平这两种作用兼而有之;misonidazole仅在缺氧条件下才增加DNA单链断裂的产量并抑制重接修复,而在有氧时无效,随着misonidazole浓度的增加,致敏作用增强;放线菌素D在照射过程中对细胞DNA的单链断裂与重接修复无影响。     

重组人肝细胞生成素的理化性质研究

目的 :研究重组人肝细胞生成素 (hepatopoietin ,HPO)的理化性质。方法 :在大肠杆菌中表达的人HPO ,经凝胶过滤和离子交换柱层析进行纯化 ;通过还原型SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、非还原型SDS PAGE及基质辅助激光解析飞行时间质谱 (MAIDI TOF MS)等方法分别测定了人HPO的相对分子质量 ;采用等电聚焦电泳测定了人HPO的等电点 ;采用内源荧光光谱和圆二色光谱法研究了人HPO的稳定性。结果与结论 :复性后的重组人HPO主要以双体形式存在 ,其相对分子质量为 30 0 0 0 ,等电点在 5.2～ 6 .0之间。在 70℃以下、pH 2 .6以上 ,人HPO分子内部构象基本不变