改良RPMI1640培养基对CIK细胞增殖的影响

目的探讨改良RPMI1640培养基对CIK细胞体外增殖的影响,为临床治疗提供质量好、数量多的CIK细胞。方法用淋巴细胞分离液提取淋巴细胞,分别采用传统RPMI1640培养基和改良RPMI1640培养基培养,于培养当天及3、6、9、12、15、18d,采用台盼蓝拒染法计数细胞,检测细胞的增殖水平;流式细胞术分析细胞表型;MTT法检测CIK细胞的体外细胞毒活性。结果培养至第12天后,改良培养基培养条件下,CIK细胞的增殖倍数明显高于传统培养基培养的CIK细胞(P<0.05);CD3+CD56+细胞比例达33%以上;培养15d,对BGC-823和SPC-A-1细胞的细胞毒活性均高于传统培养基。结论改良RP-MI1640培养基较传统RPMI1640培养基可更好地促进CIK细胞增殖,为其临床应用提供了试验数据。     

可生物降解微球甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴的免疫应答

目的 探索用一种新型的甲型肝炎减毒活疫苗及其免疫途径。方法 用可生物降解的材料聚乳 酸／乙醇酸（ＰＬＡ／ＰＬＧ）包裹甲型肝炎减毒活疫苗,制成微球型疫苗,检测微球的大小及在体外病毒释放的状况,和口 服免疫恒河猴后病毒在体内繁殖及免疫应答状况。结果 微球大小在６～１０μｍ范围,体外病毒抗原释放长达２７ｄ 左右,体外抗原释放高峰在３～７ｄ,口服免疫恒河猴后,约１ｗ左右开始排毒,以后一直呈间断排毒。抗体应答于第 ３ｗ出现,高峰期在５～６ｗ,达１２６１ＭｍＩＵ／ｍｌ,随后逐渐下降,口服加强免疫后,抗体回升,野毒株攻击后,抗体再度回升 达１２４４ｍＩＵ／ｍｌ。结论 微球型甲型肝炎减毒活疫苗口服免疫恒河猴后,能引起一定水平的免疫应答。     

甲型肝炎灭活疫苗抗原剂量的优化

目的通过体内效力实验,优化甲肝灭活疫苗抗原最适免疫剂量。方法用1.0mg/ml Al(OH)3将不同梯度剂量的实验苗及参比苗4倍递增系列稀释,经腹腔免疫小白鼠,4周后采血,检测各免疫组小鼠血清甲肝抗体阳转率,用Reed-Muench法计算半数有效稀释倍数,比较抗原免疫剂量与半数有效稀释倍数之间的剂量-效应关系。结果甲肝灭活疫苗实验苗抗原免疫剂量与半数有效稀释倍数之间存在着良好的剂量-效应关系。结论半数有效稀释倍数可用于不同品牌甲型肝炎灭活疫苗效力的评价及最适抗原免疫剂量的优化。     

甲型肝炎病毒抗原定量参比品的研制

目的制备甲型肝炎病毒抗原定量参比品。方法依据《甲型肝炎灭活疫苗制造及检定规程》制备了1批甲肝病毒抗原参比品,并进行蛋白质含量测定、HAV蛋白纯度分析和酶标抗原含量标化。结果经纯化,杂蛋白去除率达99.9%,参比品的纯度大于95%;抗原含量在20~80 EU/ml范围内,抗原含量的对数与其A值呈剂量-效应关系。结论该参比品可用于甲肝病毒ELISA定性及定量标定。     

人源性抗甲型肝炎病毒Fab噬菌体抗体分子的初步筛选

目的从自建的大容量非免疫Fab噬菌体抗体库中筛选具有抗甲型肝炎病毒(HAV)抗原活性的噬菌体抗体,并进行鉴定。方法采用纯化的甲型肝炎病毒作为包被抗原,对自建的容量为1.26×1011pfu/ml的Fab噬菌体抗体库进行筛选和富集,分别对原始库和筛选后的抗体库进行Phage-ELISA和活性检测,经酶切鉴定和DNA测序分析后进行诱导表达。结果经2轮筛选,抗-HAV抗原的噬菌体抗体得到了明显富集,ELISA检测证实其具有良好的抗甲肝病毒抗原的特异性,抑制率为38.61%。酶切鉴定表明抗体库重组较稳定。SDS-PAGE检测显示Fab抗体蛋白在E.coliDH5α中得到了表达。结论从自建的非免疫Fab噬菌体抗体库中成功获得了抗甲肝病毒噬菌体抗体,所构建的非免疫抗体库可用于人源性抗体的筛选。     

应用二倍体细胞培养脊髓灰质炎病毒适宜条件的研究

目的 为用KMB17细胞制备口服脊髓灰质炎减毒活疫苗提供适宜条件。方法 检测不同培养液、不同代次、不同细胞龄和不同病毒感染量等因素对病毒滴度及产量的影响。结果 细胞对脊髓灰质炎病毒的敏感性随细胞龄的增加而降低，培养后24、48、72和96h单个细胞中脊髓灰质炎病毒产量分别为986、745、594和237 Lo-．gTCID50；细胞感染脊髓灰质炎病毒后出现细胞病变时间跨度大于48h，早期从病变细胞释放出的病毒在培养上清中不稳定，感染性滴度每24h降低0．25 LogTCID50以上。结论 KMB17细胞培养脊髓灰质炎病毒的感染性滴度和产毒量受培养液营养成分和病毒接种时细胞龄等条件的影响。     

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)诱导小鼠体液及细胞免疫应答

目的评估甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫学效果。方法用甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)分别经腹腔免疫BALBc小鼠后,用ELISA法检测血清中抗HAVIgG、TNFα、IFNγ和IL2;用流式细胞仪对全血中T细胞亚群分类;3HTdR掺入法检测T淋巴细胞增殖。结果减毒活疫苗组在初免后诱导的体液和细胞免疫水平均低于灭活疫苗组,加强免疫后,与灭活疫苗相当。灭活疫苗组IFNγ的峰值出现时间较减毒活疫苗组晚,但水平较高。结论两种疫苗均可诱导体液和细胞免疫应答,减毒活疫苗进行加强免疫后可诱导更好的系统免疫应答。