miRNA-497与miRNA-195基因簇在宫颈癌组织中的表达及预测靶基因的生物信息学分析

目的探讨miRNA-497-195基因簇在宫颈癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miRNA-497-195基因簇在宫颈癌发生中的作用机制研究提供理论基础。方法收集2010年3月～2012年3月在广西壮族自治区人民医院就诊患者的宫颈标本,利用miRNA芯片技术检测宫颈病变组织中miRNA表达谱,用real-time RT-PCR进行验证;采用real-time RT-PCR检测miRNA-497和miRNA-195在宫颈病变组织中的表达情况,并用Spearman法进行miRNA-497与miRNA-195相关性分析。通过生物信息学预测miRNA-497和miRNA-195的靶基因,并对其靶基因进行GO（gene ontology）功能富集分析及信号转导通路富集分析。结果芯片结果显示,宫颈癌及高度鳞状上皮内瘤变中miRNA-195和miRNA-497表现为下调（均P〈0.05）。real-time RT-PCR结果显示,miRNA-497和miRNA-195在宫颈癌组织中表现为下调,且表达存在显著性相关（r=0.983,P〈0.05）。miRNA-497和miRNA-195预测靶基因大量重合,且集合功能也大量重合,并富集于细胞周期调控、生物学过程调控、转录调控、基因表达及核苷酸代谢过程等生物学过程,以及蛋白结合、核酸结合、蛋白激酶活性、连接酶活性等分子功能（P〈0.01）;KEGG通路分析涉及癌症通路、p53信号通路、GnRH信号通路、细胞外因子信号通路等信号传导通路及直肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、慢性粒细胞性白血病、非小细胞肺癌等疾病通路（P〈0.05）。结论 miRNA-195和miRNA-497在宫颈癌组织中呈现低表达,二者表达呈显著正相关,miRNA-497-195基因簇可能是宫颈癌的抑制因子。miRNA-497和miRNA-195预测靶基因功能大量重合,并显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中。     

宫颈癌及癌前病变组织中microRNAs的差异表达

目的 寻找与宫颈癌及宫颈癌前病变相关的microRNA。 方法 利用miRNA芯片,筛查宫颈 癌组织、宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织中差异表达的miRNA,并用实时定量RT-PCR在60份宫颈组 织标本中对4个miRNA进行验证。利用生物信息学对部分差异表达的miRNA的靶基因进行功能分析。 结果 与正常宫颈组织比较,宫颈癌及高级别宫颈病变（HSIL）中存差异表达的miRNAs,其中在宫 颈癌中下调最明显的是miR-218（下调倍数为0.175）,上调最明显的是miR-21（上调倍数为5.68）。 实时定量RT-PCR验证结果与miRNA芯片结果基本一致。功能分析显示预测的miR-218及miR-21的靶基 因与肿瘤的生长、侵袭转移有关。结论 宫颈癌及癌前病变中存在异常表达的miRNA,它们在宫颈癌 发生过程中可能起癌基因或抑癌基因的作用。     

MiR-9对宫颈癌细胞增殖、迁移及其下游基因表达的影响

目的探讨miR-9对宫颈癌细胞生物学功能及其下游基因表达的影响。方法将miRNA mimic转染至宫颈癌Hela细胞中,通过MTT法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移能力的改变,利用基因芯片检测转染后mRNA的表达,并采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）对芯片检测下调最明显的两个基因进行验证。结果转染miR-9组的细胞增殖倍数明显高于转染NC（Negative Control）组和空白对照组（P〈0.05）;转染miR-9的迁移细胞数明显高于转染NC组和空白对照组（P〈0.05）;基因芯片结果显示转染miR-9mimc后共173个基因表达降低,其中降低最明显的两个基因是FSTL1和CDH1。经RT-PCR验证,转染miR-9mimic组FSTL1和CDH1相对表达量明显低于转染NC组（P〈0.05）。结论 miRNA-9促进宫颈癌细胞的增殖和迁移,并调节其下游基因的表达。     

miR-218在子宫颈癌组织中的表达及预测的靶基因的生物信息学分析

目的 探讨miR-218在子宫颈癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miR-218在子宫颈癌发生中的作用机制研究提供理论基础.方法 利用miRNA芯片技术检测3份子宫颈癌组织及3份正常子宫颈组织中miRNA表达谱,用实时定量聚合酶链反应（PCR）法在55例子宫颈组织中进行验证.通过生物信息学预测miR-218的靶基因,并对其靶基因进行基因本体（G0）功能富集分析及KEGG信号转导通路富集分析.结果 芯片结果显示子宫颈癌组织中有15个miRNA表达上调（＞2倍）,10个miRNA表达下调（＜0.5倍）,其中miR-218下调最明显.miR-218预测靶基因集合功能富集于生物学调控、蛋白代谢、细胞迁移和黏附、细胞分化等生物学过程,以及蛋白结合、连接酶活性等分子功能上;KEGG通路分析涉及癌通道、黏附连接、胰岛素信号通路、凋亡等信号转导通路及前列腺癌、急性和慢性髓系白血病等疾病通路.结论 miR-218在子宫颈癌组织中呈低表达,miR-218预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.     

手术流产与药物流产的临床结果比较的Meta分析

目的评价米非司酮配伍米索前列醇药物流产与手术流产终止早期妊娠的临床结果,为非意愿妊娠妇女选择流产方法提供参考和为临床医师的临床决策提供证据。方法检索PubMed、EMbase、the ISI Web of Knowledge databases、CNKI、CBM、VIP、WANFANG等7个医学数据库,查找所有比较手术流产与药物流产的临床结果的随机对照试验,同时手检纳入文献的参考文献。按纳入标准由两人独立进行RCT的筛选、资料提取和质量评价后,采用RevMan5.1软件进行Meta分析,并采用GRADE系统进行证据质量评价分析。结果纳入8篇文献(1674例病例),手术流产的成功率更高(RR=0.18,95%CI:0.10,0.32;P<0.00001);药物流产的疼痛程度更高(RR=3.07,95%CI:1.85,5.07;P<0.00001);两种流产方式阴道流血时间无太大差异(SMD=3.84,95%CI:0.89,6.79;P=0.01);药物流产阴道流血量多(SMD=21.97,95%CI:4.70,39.24;P=0.01)。结论手术流产与药物流产相比,临床效果更好。     

MiRNA-218对PAG1的调控及其对卵巢癌干细胞的影响

目的:研究miR-218在卵巢癌干细胞(ovarian cancer stem cells,OCSCs)中的表达,并探讨其对PAG1的调控作用和对OCSCs的影响及作用机制。方法:收集卵巢癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代卵巢癌细胞,用流式细胞仪筛选出CD133~+表型的OCSCs。采用Western印迹法检测干性特异相关基因Nanog和Sox2蛋白的表达。qRT-PCR检测miR-218在OCSCs中的表达。miR-218 mimic转染OCSCs,分为miR-218mimic组和miR-218NC组,MTS检测各组OCSCs增殖;软琼脂克隆实验检测各组OCSCs肿瘤球形成能力的影响;miR-218过表达慢病毒质粒及对照质粒vector感染OCSCs,经1.0μg/mL嘌呤霉素筛选稳定过表达miR-218或vector的OCSCs细胞,注射到BALB/c裸鼠中,观察miR-218对OCSCs体内成瘤能力的影响。Targetscan7.2预测软件及双荧光素酶报道基因试验,分析miR-218对PAG1基因的靶向作用,qRT-PCR检测miR-218mimic组和miR-218NC组OCSCs中PAG1mRNA的表达。Western印迹法检测miR-218mimic组和miR-218NC组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达。结果:Nanog和Sox2蛋白在CD133~+表型OCSCs中的表达显著高于CD133-表型OCSCs中的表达;miR-218在CD133~+表型OCSCs中的表达显著低于CD133-表型OCSCs中的表达(P0.05)。miR-218mimic组OCSCs增殖减慢,OCSCs肿瘤球形成能力下降。OCSCs_(miR-218)裸鼠成瘤体积显著低于OCSCsvector组(P0.05)。TargetScan7.2软件预测和双荧光素酶报道基因试验证实PAG1为miR-218的靶基因,miR-218 mimic组PAG1 mRNA的表达减少。Western印迹法检测miR-218 mimic组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达显著减少。结论:MiR-218在OCSCs中低表达,可能通过靶向下调PAG1,抑制pSrc和pAKT蛋白的表达影响OCSCs的干性。     

不同剂量紫杉醇联合顺铂新辅助化疗对局部ⅠB2～Ⅱ B期宫颈癌疗效分析

目的 探讨不同剂量紫杉醇联合顺铂新辅助化疗对ⅠB2～ⅡB期宫颈癌患者的近期疗效、不良反应及远期疗效.方法 选择2002年1月至2005年12月在本院就诊并经组织病理学活检确诊为ⅠB2～ⅡB期宫颈癌,并符合本研究纳入标准的60例患者为研究对象.将其随机分为TP1组(n=30,135mg/m2紫杉醇联合60mg/m2顺铂)与TP2组(n=30,60mg/m2紫杉醇联合60 mg/m2顺铂),化疗1～3个疗程；TP1组与TP2组化疗间隔为21d与10 d；化疗结束后行宫颈癌根治手术.采用统计学方法分析两组近期疗效、不良反应及远期疗效(1,3,5年生存率)(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).两组患者年龄、宫颈癌临床分期、宫颈癌病理学类型等比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结果 TP1组的化疗有效率(RR)为83.3％(25/30),TP2组为80.0％(24/30),两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).TP1组白细胞减少发生率(36.7％,11/30)高于TP2组(13.3％,4/30),且差异有统计学意义(P＜0.05).两组化疗导致的胃肠道反应、神经毒性及脱发等不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).两组患者的1年、3年生存率比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；而TP2组患者的5年生存率高于TP1组,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 紫杉醇60 mg/m2联合顺铂60 mg/m2的新辅助化疗方案,对治疗局部ⅠB2～ⅡB期宫颈癌效果较好,但是否值得临床广泛推荐,尚需后续多中心、大样本与随访时间更长的随机对照研究进一步研究证实.