新型活性修饰聚乳酸组织工程骨的体外成骨研究

[目的]探讨氨等离子体改性、酰胺键接枝甘氨酸-精氰酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(GRGDS)短肽的活性修饰方法对消旋聚乳酸(PDLLA)组织工程骨体外成骨能力的影响.[方法]制备圆片状直径8 mm、厚1 mm的PDLLA三维多孔支架,分为三组:表面氨基化PDLLA(aminated PDLLA,A/PDLLA,A组),接枝肽A/PDLLA(peptides conjugated A/PDLLA,PA/PDLLA,PA组),以未经处理的PDLLA(P组)作为对照组.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测符组材料上骨髓间允质干细胞(BMSCs)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、骨形态发生蛋白-2(Bmp-2)和骨桥蚩白(OPN)mRNA的表达变化并进行ALP活性测定和钙黄绿素矿化荧光染色.[结果]qPCR结果示:第3 d,PA组各基因表达倍数均较P组高;除OCN外的各基因表达也均较A组高.第7 d,A组OCN(13.13±1.28)、Col-Ⅰ(23.71±6.51)和OPN(27.4±7.17)mRNA表达倍数为最高,PA组次之.第14 d,多数基因表达上调,A组和PA组表达倍数较对照组明显增高.PA组OCN(49.21±7.03)、ALP(24.26±3.41)和BMP-2(11.82±2.38)mRNA的表达较A组高,差异有统计学意义(P＜0.05).ALP活性检测结果示:A组和PA组ALP活性持续升高,P组活性第21 d较第14 d时略有下降.第7 d,A组和PA组之间ALP活性比较无统计学意义(P＞0.05),但均高于P组(P＜0.01);第14 d和第21 d,三组间ALP活性两两比较均有统计学意义,ALP活性PA组＞A组＞P组.钙黄绿素矿化荧光染色观察示,骨支架上钙盐沉积与ALP的活性变化趋势相平行.[结论]氨等离子体改性能够促进聚乳酸组织工程骨支架上BMSCs早期向成骨细胞分化,改性后接枝GRGDS肽的新型活性修饰PDLLA具有更好的促BMSCs体外成骨能力.     

影响移植后的脂肪颗粒活性因素

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、表皮细胞生长因子（EGF）、胰岛素及自体真皮颗粒对培养及移植的脂肪颗粒活性的影响因素。方法通过对培养中的幼鼠脂肪细胞,分别添加bFGF、VEGF、EGF、胰岛素及自体真皮颗粒,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定各组脂肪细胞活性,分析其作用效果;通过对移植体的大体观察、质量测定、HE染色、微血管数量及免疫组织化学染色等,比较各组添加物对脂肪组织活性的影响。结果除真皮颗粒组及对照组外,各实验组在不同时间点的最佳脂肪细胞活性浓度基本一致,且其细胞活性均高于对照组（P〈0．05）。动物实验中对照组可见较大区域坏死灶、囊样脂肪池。实验组脂肪细胞大小不一,存在大量的小体积脂肪细胞;除胰岛素组外,各实验组移植物残余质量及各组微血管密度均明显高于对照组,但随移植时间的延长差异逐渐缩小。结论bFGF、VEGF、EGF及胰岛素均能不同程度提高脂肪细胞活性,bFGF、VEGF、EGF及自体真皮颗粒均能不同程度地提高脂肪颗粒移植后的移植物质量,改善脂肪组织的血运重建。     

胰腺癌内皮分化基因受体表达

目的 观察胰腺癌组织溶血磷脂酸(LPA)内皮分化基因受体(Edg/LPA)的表达,探讨其临床意义.方法 收集50例胰腺癌及对应癌旁正常胰腺组织标本,采用实时定量PCR、免疫组化和蛋白质印迹法检测3种Edg/LPA受体亚型Edg-2/LPA1、Edg-4/LPA2和Edg-7/LPA3受体mRNA及蛋白的表达,分析其与胰腺癌临床病理参数的关系.结果 胰腺癌组织Edg-2/LPA1、Edg-4/LPA2、Edg-7/LPA3受体mRNA表达量分别为(0.142 ±0.042)％、(0.471 ±0.064)％、(0.231±0.043)％,对应癌旁正常胰腺组织分别为(0.132 ±0.029)％、(0.027±0.015)％、(0.163±0.046)％,其中胰腺癌组织的Edg-4/LPA2受体mRNA表达较对应癌旁组织显著增加(P＜0.05).同样,胰腺癌组织Edg-4/LPA2蛋白表达也显著高于癌旁正常胰腺组织.胰腺癌组织的3种Edg/LPA受体mRNA表达水平与血清CA19-9浓度呈平行关系,差异无统计学意义.胰腺癌组织EDG-4/LPA2受体mRNA表达与肿瘤大小、导管腺癌的分化程度及侵袭转移有关,而Edg-2/LPA1、Edg-7/LPA3受体mRNA表达仅与肿瘤的侵袭转移有关.结论 胰腺癌组织高表达Edg-4/LPA2受体,其高表达反映出肿瘤的恶性生物学行为.     

血管内皮功能无创检测技术及进展

血管内皮细胞是一层连续覆盖在血管腔表面的扁平鳞状细胞,它不仅是人体最大的内分泌、旁分泌器官,分泌几十种血管活性物质,而且还是许多活性物质的靶器官。血管内皮细胞在调节血管舒张状态、维持凝血和纤溶系统的平衡、抑制血小板聚集、     

儿童溶血危象临床诊断探讨

目的以临床分析为基础,总结儿童急性溶血性贫血（简称急性溶贫）及溶血危象的特征,为＂溶血危象＂诊断提供临床依据。方法对83例急性溶贫患儿的病因、临床表现、实验室检查、治疗及转归等情况进行回顾性分析。结果随着贫血程度加重,有乏力、苍白、气促、呕吐、酱油色尿、心脏Ⅲ级以上收缩期吹风样杂音临床表现的患儿比例越高;实验室检查中WBC、BUN、AST和LDH升高,以Hb≤70 g/L的患儿改变较为明显,溶血越严重,WBC和LDH升高越明显;血钾、CO2CP、ALT、网织红细胞计数在不同程度急性溶贫的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论溶血危象诊断要点：（1）确诊急性溶血性贫血;（2）Hb≤70 g/L,同时出现面色苍白、呕吐、酱油色尿、气促、心脏Ⅲ级以上收缩期吹风样杂音和肾功能异常等表现;或Hb≤60 g/L同时出现上述5种以上的表现。具备上述2种者应高度疑诊为溶血危象;（3）如伴有下列表现之一如高热、腹痛、血压下降、意识障碍、惊厥、心力衰竭或急性肾衰竭者即确诊溶血危象;（4）Hb≤30 g/L的极重度溶血性贫血,无论患者的表现如何,均应诊断为溶血危象;（5）外周血WBC〉18×109个/L、血清LDH〉800 IU/L有助于溶血危象的诊断。     

活性调节细胞骨架蛋白与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系

目的 检测活性调节细胞骨架蛋白(Arc)在模型大鼠海马组织中的表达,探讨Arc与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系.方法 成年SD大鼠随机分为模型组、假手术组和空白对照组.应用避暗试验检测各组大鼠学习记忆功能.采用免疫组化、Western blot检测不同时间点Arc蛋白在海马组织中表达水平,运用RT-PGR检测其基因表达水平.结果 慢性电点燃成功后第1天(即点燃0周),点燃组、假手术组及空白对照组学习记忆能力差异无统计学意义(P＞0.05).点燃2周:潜伏期(LT)(48.87±3.42)s,穿梭次数(EN)(2.75±0.99)次.点燃3周:LT为(48.71±2.77)s,EN为(2.75±1.15)次.点燃2周、3周与0周相比学习记忆功能增强(P＜0.05).点燃4周与0周组比学习记忆功能明显下降(P＜0.05).Arc在各组内蛋白及基因的表达均在1 h开始增加,6 h达到高峰,12 h恢复到基线水平.组间对比,2-3周内峰值最高,上升幅度明显(P＜0.01),4周峰值及幅度明显下降(P＜0.05),假手术组、空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 岛叶电点燃大鼠学习记忆功能及Arc在海马中表达变化趋势一致.Arc与岛叶点燃大鼠学习记忆功能密切相关.

Abstract：

Objective To research the expression of activity- regulated cytoskeletal protein in Insula Chronic Electricity igniting epilepsy rat's hippocampus,and to study the relation between Arc and electricity igniting epilepsy rat's learning and memory.Methods Adult SD rats were divided into model groups,sham operation groups,blank control groups.The model of rat insula chronic electricity igniting was built,and rats learning and memory ability were examined by way of passive avoidance test.The expression level of Arc in hippocampus was test by both immunohistochemistry and western blot,and the expression of Arc gene was test by RT- PCR.ResultThere was no significant difference of learning- remembering ability of rats between igniting group,control group and sham groups (P ＞ 0.05) in the first week after insular chronic ignition when passive avoidance test was examined.The increased learning- remembering ability appeared in the 2nd week (LT:48.87 ± 3.42 s; EN:2.75 ± 0.99) ,3rd week(LT:48.71 ± 2.77 s;EN:2.75 ± 1.15) after the ignition(P ＜0.05).After 4 weeks,there was obvious decline of learn and memory (P<0.05 ).When testing the molecular biology of Arc,there was an enhancement in expression of protein and gene for Arc in subgroup time point from 1 h,to the submit when 6 h,and to primary level when 12 h.The general tendency was to rise when one week(w),to rise fast when 2w-3w,to rise obviously slowly when 4w(P ＜0.05).There was no sense for false operation sets and blank comparison sets.Conclusion The general tendency of the expression of Arc in rat hippocampus after the chronic insular electricity ignition is consistent with the learning- remembering ability of epilepsy rats.Arc is closely associated with the learning- remember ability for epilepsy rats.     

喷墨打印技术同步打印细胞和生物支架材料及在组织工程中的应用

背景：喷墨打印技术是将墨滴喷射到接受体形成图像或文字的非接触性打印技术。 目的：总结并讨论喷墨打印技术的研究进展及其在组织工程中的运用。 方法：由第一作者用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI：1995/2010)和PubMed数据库(1995/2010),检索词分别为“喷墨打印技术,细胞打印,生物材料,细胞因子”和“inkjet printing,cell printing,biomaterial,cytokine,organ printing”。共检索到352篇文章,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入35篇文章。从喷墨打印技术研究进展及其在组织工程中的运用2个方面进行总结,对喷墨打印技术在细胞打印、生物支架材料打印、细胞活性因子打印及细胞-生物支架材料同步打印的应用等方面进行介绍。 结果和结论：喷墨打印技术作为一种新型组织工程技术,在组织与器官打印研究中有广泛的运用前景。该技术可以打印多种细胞,打印后的细胞能够存活和保持原有生物学活性,而且喷墨打印技术通过打印水凝胶支架材料,构建具有良好的三维结构的3D水凝胶支架。此外,运用喷墨打印技术可以打印细胞活性因子,并保持其生物学活性。通过同步打印细胞和生物支架材料,喷墨打印技术有望构建3D细胞-生物支架材料复合的仿生组织和器官。     

不同保存方式下嗅鞘细胞的活性

背景：获取和寻找适合的保存方式对嗅鞘细胞实验和临床应用有重要的意义。 目的：探索合适的嗅鞘细胞低温保存方式。 方法：取对数期生长的嗅鞘细胞,冻存1,3,6个月进行复苏。 结果与结论：MTT比色法及锥虫蓝染色显示5%二甲基亚砜-6%羟乙基淀粉处理的细胞活性最高,其次是10%二甲基亚砜处理的细胞,5%二甲基亚砜的保护作用最差。冰箱降温或程控降温仪降温方式及不同的冻存时间对嗅鞘细胞活性影响不明显。因此,推荐用5%二甲基亚砜-6%羟乙基淀粉作为嗅鞘细胞冻存低温保护剂。     

冷冻预处理温度对胎兔许旺细胞活性的影响*

背景：许旺细胞作为周围神经损伤修复的重要桥接材料,其活性对临床修复周围神经损伤成功与否具有重要影响。 目的：观察不同维持温度冷冻预处理超深低温保存对胎兔许旺细胞活性的影响。 方法：设计胎兔许旺细胞冷冻维持温度为-30~-70 ℃,每间隔-5 ℃为一组,以10%二甲基亚砜为低温保护剂,对胎兔许旺细胞进行上述温度冷冻预处理,液氮中保存48 h,快速复温后继续培养48 h,透射电镜观察细胞超微结构改变,MTT法和3H-TdR掺入法检测细胞活性。 结果与结论：透射电镜下见-45 ℃处理的细胞超微结构良好,其余各温度组细胞均出现细胞器肿胀、坏死等轻重不同的冷冻损伤表现。MTT法和3H-TdR检测结果均显示-45 ℃冷冻预处理对许旺细胞的生长抑制率最低,分别为(3.83±0.56)%、(4.41±0.71)%,和其余各温度组之间相比,差异有显著性意义(P < 0.05)。提示-45 ℃是胎兔许旺细胞冷冻预处理的最佳维持温度值,对细胞活性影响最小,可较好保持其生物学活性。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。 目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。 结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72 h表达最强,感染率达80%,96 h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。