体外导入外源IL-10基因对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响

目的利用重组复制缺陷型腺病毒AdIL-10将外源IL-10基因导入肝星状细胞并观察其对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ胶原分泌的影响.方法用传至1～2代的大鼠肝星状细胞以2×105/孔接种于24孔板,按每组6复孔分为三组(1)单纯肝星状细胞培养组;(2)AdGFP对照组肝星状细胞培养24 h后取病毒AdGFP以感染复数50感染肝星状细胞;(3)AdIL-10组肝星状细胞培养24 h后取病毒AdIL-10以感染复数50感染肝星状细胞.3 d后分别收集各组肝星状细胞, .提取总RNA.结果与单纯肝星状细胞培养组相比,AdIL-10组的IL-10mRNA表达明显增强(P＜0.01),而AdGFP对照组的IL-10 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);AdIL-10组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达明显降低(P＜0.01),而AdFP对照组的Ⅰ型胶原和置型胶原mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论重组腺病毒AdIL-10感染肝星状细胞后可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ胶原分泌.     

PEX基因对肿瘤细胞生物学性状的影响

目的　探讨PEX基因在体外对鼠黑色素瘤细胞B16F10生物学性状的影响。方法　利用脂质体介导转染法,经G4 18稳定筛选后,应用MTT、流式细胞术、软琼脂克隆形成实验及Boyden小室侵袭实验,体外观察PEX基因对B16F10细胞生物学性状的影响。结果　BpcDNA sPEX、BpcDNA、B16F10三组细胞生长速度、细胞周期各时相均无明显差异(P >0 . 0 5 ) ;BpcDNA sPEX组细胞集落与BpcDNA组和B16F10组相比统计学上存在显著性差异(P <0 . 0 1) ,BpcD NA sPEX组细胞集落比BpcDNA组和B16F10组少,且单个集落中细胞数目少;BpcDNA sPEX组细胞穿透Matrigel胶能力比BpcDNA和B16F10组细胞弱,统计学上存在显著差异(P <0 . 0 1)。结论　PEX基因转染对体外单纯培养的B16F10细胞生长、增殖无影响;PEX基因可抑制B16F10细胞在软琼脂中形成集落的能力及体外侵袭能力。     

H2O2浸渍处理对水牛角胎力学特性的影响

背景：前期实验数据证明，水牛角胎的形态结构、理化参数、生物性质、力学性能等方面具有良好的骨科生物材料的特征。 目的：拟观察脱蛋白处理水牛角胎后，其抗原性和生物力学强度与经30％H2O2处理的时间关系。 设计、时间及地点：测量实验，于2000-02／03在昆明理工大学力学试验室完成。 材料：水牛来源于云南省泸西县屠宰场，取水牛角胎制成公称尺寸试件。 方法：试件经热蒸馏水反复冲洗后，用氯仿-甲醇1：1浸渍48h，再用体积分数为0.3的H2O2浸渍，实验组分别处理24，48h，另设未经任何处理试件为对照组。 主要观察指标：电测试法测定弹性模量E；直接加压法测其抗压强度。 结果：各组间弹性模量相比，差异均无显著性意义（P〉0．05）。对照组的抗压强度明显高于实验组（P〈0．01），24h实验组与48h实验组间抗压强度相比，差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：水牛角胎经H2O2浸渍48h处理，保留了较好的生物力学强度。     

基因治疗原发性高血压的新途径:内皮型一氧化氮合成酶CDNA腺病毒载体在人胎肾293细胞的表达

研究内皮型一氧化氮合成酶（endothelialnitric oxide synthase,eNOS)CDNA 腺病毒载体 PadRSVeNOSCDNA 导入在人胎肾 293细胞 ( )中的表达。方法:大量制备及纯化质粒 eNOSCDNA ,将纯化eNOSCDNA 载体通过脂质体转染 293细胞48h 后,应用化学比色法测定293细胞提取物NOS 活性。结果:被转染 293细胞 NOS活性显著提高于未转染293细胞 NOS 活性犤( 0.62±0.03),(0.093±0.01)kU /L,P <0.001犦。结论:PA dRSVeNOSCDNA 导入人胎肾 293细胞是一种能使 NOS 活性显著升高的方法,为基因治疗原发性高血压及肾脏血管性疾病研究提供一条新的途径。     

携带可调控人胰岛素基因的腺病毒载体的构建和鉴定

目的:构建携带葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)启动子控制下的人胰岛素基因的腺病毒载体。方法:将GIP- hIns基因自pCDNA3-GIP-hIns质粒中酶切下来,克隆至切除CMV启动子的pCA13-△CMV质粒中,形成转移质粒 pCA13-GIP-hIns,然后与质粒pBHGE3共转染至293细胞株,在其中同源重组形成腺病毒颗粒。采用PCR方法对重组体进行鉴定,同时测定病毒滴度。体外转染STC-1细胞,并采用RT-PCR检测感染腺病毒的细胞内有无hIns mRNA 的转录。结果:由pCA13-GIP-hIns和pBHGD共转染至293细胞后,可得到阳性重组体Ad.GIP-hIns,经PCR检测表明已含有GIP-hIns基因。纯化所得腺病毒滴度约为1×1011 pfu／ml。RT—PCR证实在感染重组体腺病毒Ad．GIP— hIns的细胞中有相应mRNA的转录。结论:成功构建了携带GIP启动子控制下的人胰岛素基因的腺病毒载体,为进一步胰岛素基因治疗糖尿病的实验研究奠定了基础。     

熊果酸磷脂复合物纳米结构脂质载体的制备及其体内药动学研究

目的制备熊果酸磷脂复合物纳米结构脂质载体,并考察其体内药动学。方法乳化?超声分散法制备熊果酸磷脂复合物纳米结构脂质载体,测定粒径、Zeta电位、包封率、载药量、体外释药。大鼠灌胃给药(12.5 mg/mL)后,于0.25、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12 h采血,HPLC法测定熊果酸血药浓度,计算主要药动学参数。结果所得制剂呈类球形或球形,平均粒径、Zeta电位、包封率、载药量分别为(209.32±4.47)nm、-(10.82±0.42)mV、80.54%、3.57%;36 h内累积释放度低于70%,释药符合Weibull模型(R2=0.9906)。与原料药、磷脂复合物比较,纳米结构脂质载体tmax延长(P<0.05,P<0.01),Cmax、AUC0~t、AUC0~∞升高(P<0.01);与原料药比较,磷脂复合物、纳米结构脂质载体相对生物利用度分别增加至2.73、3.95倍。结论磷脂复合物纳米结构脂质载体可促进熊果酸体内吸收,提高其口服生物利用度。     

皮质类固醇载体蛋白的提纯及放射免疫测定的建立

本文以Sepharose-4B为基本原料,自制了皮质醇Sepharose这一亲和层析柱,并对此柱的质量进行了鉴定。用此亲和层析柱和羟磷灰石柱从正常人血浆中提取人皮质类固醇载体蛋白(CBG)。对所提取的CBG进行了活性、纯度等方面的鉴定。以此提纯的CBG为抗原制备了兔抗人特异性抗血清,建立了CBG的放免测定法,然后对CBG RIA进行方法学的考核。     

腺病毒介导的CDglyTK基因影响胃癌细胞形态学及生长特性的效应

目的：观察已转染双自杀基因的胃癌细胞和未转染双自杀基因的胃癌细胞在形态学及生长特性方面的差异性。 方法：实验于2005—03／2006—03在南方医科大学肿瘤研究所完成。质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK为南方医科大学珠江医院普外科保存。用感染复数为100时，将启动子融合基因腺病毒（Ad-KDR—CDglyTK）体外感染SCG7901细胞株。通过倒置荧光相差显微镜、光镜、透射电镜等技术观察转染基因的胃癌细胞的形态学变化。通过流式细胞仪检测细胞周期的变化．同时用四甲基偶氮唑盐方法进行生长曲线的测定。 结果：①腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因对胃癌细胞体外培养的形态无明显影响。②已转基因的SCG7901细胞和未转基因的SCG7901细胞处于G1期，比率分别为（49．00&;#177;0．58）％，（51．02&;#177;0．91）％（t=1．862，P=1．12），处于S期比率分别为（16．20&;#177;0．36）％，（14．00&;#177;0．99）％（t=2．07，P=0．84），处于G2期比率分别为（34．60&;#177;0．96）％，（34．31&;#177;0.86）％（t=0．223，P=0．831）。（3）已转基因SCG7901细胞和未转基因SCG7901细胞具有类似的生长状态（F=0．042,P=0．838〉0．05）。 结论：已转染KDR启动子融合基因的胃癌细胞和未转染的胃癌细胞在形态及生长特性方面无显著性差异。     

电子文献及其载体的类型、标识与著录格式

为了进一步提高本刊参考文献著录的规范化程度，以期达到共享文献信息资源的目的，本刊曾连续多次刊载了电子文献及其载体的类型、标识与著录格式。但均未引起各位作者的重视。现再次摘录如下，望广大作者严格按此规范执行，认真核对。确保无误。