外源性肿瘤坏死因子-α诱发兔椎间盘退变中β-catenin蛋白的表达及意义

目的 通过外源性肿瘤坏死因子(TNF)-α注射构建兔椎间盘退变动物模型,探讨该模型中β-catenin蛋白的表达及意义和炎性细胞因子在促进腰椎间盘退变过程中Wnt/β-catenin信号通路的作用.方法 选取12只健康成年日本白兔,雌雄随机,体质量2.5～3.0kg.手术暴露L2～5 3个间隙共36个椎间盘.随机分为4组,分别注入生理盐水、TNF-α 5 ng、TNF-α 10ng、TNF-α 20 ng,于术后第8周统一处死,取椎间盘髓核组织作苏木素-伊红(HE)-番红O染色病理切片进行形态学观察;各组分别随机选取4个椎间盘髓核组织标本,采用蛋白印迹法(Western blot)测定β-catenin蛋白含量并比较各组间差异.结果 HE-番红O染色病理切片显示,在5、10、20 ng组椎间盘组织中髓核细胞数量减少,正常网状结构破坏,细胞形态发生改变,出现肥大空泡样软骨细胞,组织基质蛋白聚糖含量明显降低,番红O淡染,生理盐水对照组椎间盘形态基本正常,无退变发生.蛋白印迹结果显示β-catenin蛋白含量在注射TNF-α组明显增加,各组吸光度比值分别为:0.142±0.036、0.351±0.041、0.472±0.052和0.710±0.063,组间差异有统计学意义(P＜0.05)且与TNF-α浓度相关.结论 通过外源性TNF-α盘内注射能够成功构建兔椎间盘退变动物模型,且退变程度与TNF-α呈浓度依赖性;在退变模型髓核组织中β-catenin蛋白含量增高且与TNF-α浓度正相关,提示炎症细胞因子触发了Wnt/β-catenin信号通路,在椎间盘退变过程中可能发挥了重要作用.     

骨肉瘤肺转移与血管内皮生长因子和微血管密度的关系

目的 探讨骨肉瘤盱市转移与血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的关系.方法 用免疫组织化学法检测30例骨肉瘤组织中VEGF的表达和MVD.结果 VEGF在骨肉瘤中的阳性率表达分别为70.00%(21/30),其中有肺转移的病例阳性率为92.31%(12/13).无肺转移病例的阳性率为52.94%(9/17),差异有统计学意义(P<0:05).骨肉瘤组织中VEGF阳性表达与骨肉瘤的组织学分型无明显相关(P>0.05).骨肉瘤中VEGF表达强度与MVD呈正相关(r=0.799,P<0.01);有肺转移的骨肉瘤患者其瘤组织中MVD与无肺转移的骨肉瘤患者其瘤组织中MVD差异有统计学意义(P<0.05),有肺转移的明显高于无肺转移的病例.结论 VEGF是促进微血管生成的主要细胞因子,检测VEGF表达与MVD值可作为判断肿瘤预后的重要指标.     

纳米羟基磷灰石/胶原材料复合硫酸庆大霉素缓释系统体内释放实验

目的 制备纳米羟基磷灰石/胶原材料复合硫酸庆大霉素缓释系统(nano-HA/C-GM-DDS),观察其体内释药效力,以寻求更好的抗生素缓释系统.方法 ①制备纳米羟基磷灰石/胶原材料复合硫酸庆大霉素缓释系统;②体内释放实验:将nano-HA/C-GM-DDS 聚合物植入大鼠股四头肌,术后第1、3、5、7、9、12、18、24天各选6只大鼠,取股四头肌肌肉组织,用标准曲线计算出各标本药物浓度,用SPSS 12.0统计软件包绘制nano-HA/C-GM-DDS的释药浓度与时间关系图,光镜下观察肌肉组织的炎性反应.结果 术后第1天肌肉中nano-HA/C-GM-DDS庆大霉素质量浓度为(130.35±9.25)mg/L,其后逐渐下降,至术后第24天时肌肉中庆大霉素质量浓度仍可达(5.25±1.01)mg/L,局部组织中庆大霉素质量浓度仍在金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(2 mg/L)以上.结论 nano-HA/C-GM-DDS在体内有较好的缓慢释放效应,是一种较好的治疗骨组织感染的生物材料.     

TGF-β1短时间干预间充质干细胞可增加其CXCR4的表达及迁移能力

目的 观察转化生长因子β1 (TGF-β1)短时间干预间充质干细胞(MSCs)后趋化因子受体4(CXCR4)的表达及对MSCs迁移能力的影响.方法 MSCs被不同浓度(0、0.01、0.1、1、10 ng/mL)和时间梯度(6、12、24、48 h)的TGF-β1干预后,采用流式细胞术鉴定MSCs细胞,通过Western blot和real-time quantitative PCR检测CXCR4的表达,并使用transwell小室实验来鉴定MSCs细胞的迁移能力.CXCR4基因的甲基化状态通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测.结果 将MSCs细胞短时间暴露在TGF-β1中会导致CXCR4的蛋白水平以浓度依赖性的方式升高,且随着干预时间的延长表达升高,于24 h时达到高峰;而此时,检测MSCs细胞暴露于TGF-β124 h这个时间点的CXCR4的mRNA水平,发现其以浓度依赖性的方式升高,而且MSCs的迁移能力增强,但MSP的结果显示CXCR4基因甲基化状态并未发生改变.结论 MSCs细胞经TGF-β1干预后,其CXCR4的表达增加,迁移能力增强.     

不同剂量激素对股骨近端的影响

目的 观察不同剂量地塞米松对大鼠股骨近端组织学、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及其受体表达、细胞凋亡的影响.方法 将96只雄性Wister大鼠随机分为对照组(C组)、地塞米松剂量5 mg/kg组(L组)、10 ms/ks组(M组)、15 ms/kg组(H组).各组分别于用药后2、4、6、8周对股骨近端1/3骨质进行组织学、BMP-2及其受体表达和细胞凋亡检测.结果 实验组骨小梁/髓腔面积比、皮质/髓腔面积比、骨形态发生蛋白Ⅰ型受体(BMP-R T)的含量均随用药时间的增加以及剂量的增加而降低,均低于C组.空骨陷窝计数和凋亡细胞计数则有随用药剂量及时间的增加而增加的趋势.L组的BMP-2平均染色面积百分比和BMP-2染色的平均吸光度在2周时明显高于对照组,而后降低,至8周时已明显低于对照组;M组和H组2周时接近正常水平,4、6、8周逐渐降低至较低水平.结论 大剂量地塞米松可以显著降低股骨近端的骨质质量;激素对股骨近端的影响具有剂量依赖性.     

枢椎后路3种螺钉固定技术生物力学测试的对比研究

目的：评价单皮质和双皮质枢椎椎弓根螺钉、枢椎侧块螺钉和枢椎椎板螺钉的固定强度,为临床选择后路螺钉的固定方式提供生物力学依据。方法：利用30具新鲜尸体枢椎标本,进行单皮质和双皮质的枢椎椎弓根螺钉、枢椎侧块螺钉、枢椎椎板螺钉固定,测试比较其螺钉拔出强度。结果：双皮质枢椎椎弓根螺钉的拔出力量最大,为（1255.8±381.9）N;单皮质枢椎椎弓根螺钉[（901.8±373.3）N]、双皮质枢椎侧块螺钉[（776.1±306.8）N]和双皮质枢椎椎板螺钉[（640.8±302.9）N]之间差异无统计学意义。结论：枢椎后路螺钉固定宜首选椎弓根螺钉,枢椎侧块螺钉和枢椎椎板螺钉可作为枢椎后路补充固定技术,且以双皮质骨固定为宜。     

后路减压植骨椎弓根内固定治疗伴有脊髓损伤胸腰椎骨折

目的 评估后路减压植骨短节段椎弓根内固定治疗伴有脊髓损伤胸腰椎骨折的临床疗效.方法 分析应用后路减压植骨短节段椎弓根内固定治疗伴有脊髓损伤胸腰椎骨折并获得完全随访的患者32例.通过影像学及神经功能恢复情况来评估疗效.结果 32例患者平均随访18个月(8～32个月),伤椎后突角、Cobb′s角及脊柱矢状面指数分别由术前(22.1±6.3)、(20.2±5.3)、(22.3±6.8),术后恢复到(4.3±2.1)、(3.8±2.8)、(3.1±3.4),末次随访分别为(6.1±2.7)、(5.4±2.3)、(5.1±2.4).术后伤椎后突角、Cobb′s角及脊柱矢状面指数与术前相比均有明显改善(P<0.05),而末次随访与术后相比,各角度丢失不明显(P>0.05).患者术后神经功能获得明显改善.结论 后路减压植骨椎弓根内固定可重建脊柱稳定性,有利神经功能恢复,临床效果确切.     

人股骨头大孔径髓芯减压后支撑架植入生物力学分析

[目的] 观察钛合金支撑架植入对经转子大孔径髓芯减压后人股骨头力学强度的影响.[方法] 取新鲜人股骨头9对,随机分成3组,每组3对.其中2组随机选取每对中的一侧,分别模拟经股骨颈大孔径(D=16 mm)单纯髓芯减压、大孔径髓芯减压+钛合金支撑架植入治疗股骨头坏死的方法做成治疗后的状态,另一侧做正常对照,第3组随机选取其中一侧模拟经股骨颈大孔径单纯髓芯减压,另一侧模拟经股骨颈大孔径髓芯减压+钛合金支撑架植入,在AGS-10 KND万能生物材料实验机上进行力学性能测试,观察3组标本股骨头的力学刚度及强度,对每对标本的实验结果标准化后进行统计学分析.[结果] 单纯大孔径髓芯减压组和正常对照组力学曲线成单峰状,大孔径髓芯减压+钛合金支撑架植入组力学曲线呈双峰状.单纯大孔径髓芯减压组刚度及最大负载明显低于正常对照组(P<0.05),钛合金支撑架植入组初峰刚度及最大负载与正常对照组无明显统计学差异(P>0.05),次峰最大负载明显高于正常对照组(P<0.05).[结论] 经转子大孔径髓芯减压会明显降低股骨头负重区的力学强度.钛合金支撑架植入能给股骨头负重区软骨下骨提供足够的机械支撑力,起到防止股骨头塌陷,维持股骨头外形的作用,有利于坏死股骨头的再生和修复.     

椎体终板损伤对兔椎问盘髓核Ⅰ、Ⅱ型胶原的影响

目的 观察椎体终板损伤对兔椎间盘髓核Ⅰ、Ⅱ型胶原的影响并探讨其机制.方法 4个月龄清洁级日本大白兔12只,完整取出40个包含终板的完整椎间盘(L2-L5),随机分为实验组和对照组,每组20个.实验组参考Daniel Haschtmann的方法建立终板损伤模型.椎间盘整体培养2周后,免疫组织化学方法观察椎间盘髓核中Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达情况,并用HMIAS-2000图像分析系统进行半定量分析.结果 免疫组织化学染色显示:实验组椎间盘髓核Ⅰ型胶原的表达比对照组高;而Ⅱ型胶原的表达则比对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 外伤致椎体终板损伤后会导致椎间盘髓核Ⅰ、Ⅱ型胶原的变化,继而加速椎间盘退行性变.     

后路选择性内固定矫形治疗青少年特发性脊柱侧凸

目的 评价经后路选择性关键椎体内固定矫形治疗青少年特发性脊柱侧凸（AIS）的临床疗效,探讨其手术适应证。方法经后路选择性关键椎体内固定矫形治疗的131例青少年AIS患者,术前均进行详细的临床和影像学检查评估,按影像学资料确定主侧凸顶椎、端椎、中立椎、稳定椎等关键椎体,并拟定关键椎体椎弓根螺钉内固定。结果主侧凸Cobb角由术前的平均51．3°±12．9°矫正至术后的平均8．9°±4．5°。131例均获得随访,时间8～52个月,末次随访时主侧凸Cobb角平均丢失4．6°±1．2°,椎弓根螺钉松动1例,未发现椎弓根螺钉及棒的断裂。结论经后路选择性关键椎体内固定矫形治疗青少年AIS可取得良好的临床疗效,减少患者医疗费用,符合我国实际国情,但术前应做好适应证选择。