脑缺血后神经发生与修复及中药对其作用研究的进展

脑缺血能引发机体自身微弱的内源性神经发生,但不足以修复脑缺血后神经损伤。应用中药治疗脑缺血性疾病时则根据疾病的病理病机,采用辨证论治的不同治法,通过综合调节发挥脑缺血后神经修复的优势。该文就炎症、神经血管单元、外源性干细胞移植、外泌体等对脑缺血后神经发生与修复的影响以及中药对其干预作用作一阐述。     

常州地区首例cisAB血型基因特征分析及家系调查

目的 研究1例ABO亚型及基因特征。 方法 采用试管法对家系3代共7例标本进行ABO血型血清学鉴定;对正反定型不一致的标本运用聚合酶链式反应序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer, PCR-SSP)法基因分型;并对ABO基因第6和7外显子扩增产物进行测序分析。 结果 ABO血型血清学发现7例标本中正反定型不符3例,其中2例红细胞表型为cisAB/A 或ABx,1例为cisAB/O或A2Bx;基因分型为ABO*cisAB01/A101、ABO*cisAB01/O01。ABO基因序列分析:ABO*cisAB01/A101第7外显子发生467C>T、803G>C的特征性突变,ABO*cisAB01/O01第6外显子261位缺失G,第7外显子在467C>T、803G>C存在特征性突变。测序结果均携带有ABO*cisAB01基因。 结论 ABO*cisAB01基因能导致A抗原或者B抗原的弱表达并能稳定遗传,因此应将血型血清学和分子生物学方法相结合才能准确鉴定ABO亚型。     

酒精诱导大鼠脂肪肝变TNF-α、IL-6的表达

目的观察酒精诱导大鼠脂肪肝组织中肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）水平的变化。方法以56％酒精灌胃，造成大鼠酒精性脂肪肝模型，取血清测丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、门冬氨酸氨基转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）活性，取肝组织做免疫组织化学检测TNF-α、IL-6表达。结果模型组大鼠毛发光泽差，食欲差，大便溏泻，体重增长缓慢（P〈0．01），模型组大鼠肝组织出现不同程度的肝脂肪变性，血清中ALT、AST活性较正常组明显升高，差异有统计学意义（P〈0．01），模型组肝组织中TNF-α、IL-6蛋白阳性产物呈棕褐色细颗粒状。结论肝细胞中TNF-α、IL-6水平的升高可能是酒精性脂肪肝发生的重要机制之一。     

β2-GPI与细胞凋亡的关系研究

目的探讨β2-糖蛋白-Ⅰ(β2-GPI)与凋亡细胞的结合是否通过磷脂酰丝氨酸(PS).方法采用UV照射的方法,诱导K562细胞凋亡,应用碘化丙啶、梯状电泳和β2-GPI检测细胞凋亡.采用β2-GPI与Annexin V的竞争实验来检测β2-GPI是否通过PS与凋亡细胞结合.结果随着UV照射时间延长,K562细胞的凋亡率增加,在照射300秒时,凋亡细胞达到51.01%(47.23%±4.41%), DNA出现明显的片段化.rGFP连接的β2-GPI,与凋亡细胞结合,β2-GPI可以有效地检测细胞凋亡,而且与Annexin V竞争同一结合位点,即PS.4℃时β2-GPI与晚期凋亡细胞的结合高于37℃,而且随着时间延长,与凋亡细胞的结合均降低.结论通过β2-GPI与Annexin V的竞争抑制实验第一次为"β2-GPI通过PS与凋亡细胞结合"这一推断提供直接的实验证据,第一次证实β2-GPI既可以与早期凋亡细胞结合,也可以与晚期凋亡细胞结合,rGFP-hβ2-GPI可以作为新的检测细胞凋亡的试剂应用.     

重组人β2糖蛋白1第一结构域对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生ICAM-1、MCP-1的影响

目的：探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域（hrβ2GPⅠDⅠ）对抗磷脂抗体综合征（APS）患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的影响。方法：应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共孵育，细胞EL／SA和RT-PCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM-1、MCP-1的变化。结果：hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比，与其孵育的HUVEC表达ICAM-1、MCP-1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论：邮：GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体（anti-β2 GPⅠ）。     

宁心红杞胶囊对老龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的影响

目的：观察天然药物干预下老龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的变化。方法：以自然衰老雌性大鼠为实验模型,按临床等效剂量胃饲由天然植物药加工制成的宁心红杞胶囊8周后,取其卵泡中颗粒细胞,用透射电镜进行观察。结果：模型组颗粒细胞胞体变小,胞质中的各种细胞器和分泌颗粒数量明显减少,可见较多的凋亡细胞和凋亡小体。用药组细胞体积增大,胞质内细胞器数量增多,线粒体、滑面内质网、粗面内质网、高尔基复合体等结构大体正常,细胞间缝隙连接增多。偶见凋亡的颗粒细胞,未见凋亡小体。结论：宁心红杞胶囊具有调控颗粒细胞凋亡的作用,能抑制凋亡进程,这可能是其临床治疗围绝经期综合征的作用机制之一。     

应用微囊化转基因细胞进行小鼠腹腔移植的实验研究

目的:探讨微囊化转基因细胞用于异体细胞移植治疗的可能性。方法:使用静电液滴技术制备海藻酸钠-壳聚糖微胶囊,包埋转入癌胚抗原部分基因的人成纤维样骨髓基质细胞,进行实验小鼠腹腔移植。结果:微囊化人源细胞移植到小鼠腹腔3个月内,细胞可以继续生长、增殖并提高小鼠的兔疫功能。结论:海藻酸钠-壳聚糖作为成囊材料具有良好的生物相容性、囊膜强度和免疫隔离作用;微囊化细胞移植有助于扩大异体移植的细胞来源,并为构建微囊化转基因细胞疫苗治疗恶性肿瘤的研究提供了可靠的依据。     

人血管抑制因子的原核表达、纯化及活性研究

目的：利用大肠杆菌表达系统表达人血管抑制因子，并利用镍金属螯合层析法进行纯化，探讨其抑制血管内皮细胞增殖的活性。方法：采用RT-PCR技术从人肝脏组织中获取人血管抑制因子的cDNA，将其克隆至原核表达载体pQE30中进行IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE分析，并利用镍金属螯合层析法进行纯化。^3H-TdR法检测纯化的血管抑制因子对血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果：利用pQE30表达载体表达的含6个组氨酸尾的vasostafin蛋白，在SDS-PAGE上表现出一条约2lkD的阳性条带，经镍金属螯合层析纯化后的蛋白经肽指纹图谱分析鉴定为目的蛋白，在体外可抑制人脐静脉血管内皮细胞的增殖。结论：人血管抑制因子可在大肠杆菌中以包涵体形式高水平表达，并具有抑制血管内皮细胞增殖的活性．     

个体化出院指导应用于高血压病患者的效果分析

目的：探讨个体化出院指导对高血压患者依从性的影响。方法：将80例患者随机分为实验组和对照组，分别给予个体化出院指导联合一般性出院指导和单用一般性出院指导，出院三个月和六个月时跟踪随访。结果：实验组的依从性明显好于对照组，出院后随访病情复发率明显降低（P〈0.05〉。结论：个体化出院指导可提高高血压患者依从性，改善患者的社会适应能力，降低复发率。     

大鼠原代肝细胞的培养及鉴定

目的:探讨体外大鼠肝细胞的分离培养及纯化的方法。方法:采用胶原酶Ⅳ消化组织块法分离新生大鼠肝细胞,对大鼠肝细胞进行纯化、培养,并采用免疫组织化学方法对其进行鉴定。结果:培养24 h,有部分细胞贴壁,48 h有大量细胞贴壁,但含有较多杂细胞。经过4~5次传代后,细胞形态一致,可见许多双核细胞和多核细胞。采用抗大鼠细胞角蛋白(ck-18)的特异抗体进行免疫细胞化学鉴定,经SP染色DAB显色后,阳性着色部位在胞浆呈棕黄色颗粒,阴性对照未见着色。结论:成功地体外培养了大鼠肝细胞并对其进行了鉴定,为进一步的实验研究奠定了基础。