硫化氢对肝纤维化大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

【目的】探讨硫化氢（H2 S）对肝纤维化大鼠肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）的保护作用。【方法】32只SD大鼠通过胆总管结扎法建立大鼠肝纤维化模型,随机分为4组：①假手术组（Sham组）,② HIRI组,③硫化氢钠（NaHS）预处理组（NaHS组）,④NaHS预处理＋ PI3K抑制剂组（LY294002组）。检测各组谷草转氨酶（Aspartate transaminase ,AST）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase ,ALT）、超氧化物歧化酶（Super‐oxide Dismutase ,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde ,MDA）水平;取左肝外叶组织,透射电镜观察肝细胞细胞中自噬泡情况;Western Blot技术检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3B及Akt表达水平。【结果】与Sham组比较,其他三组AST 、ALT、MDA水平均显著升高（ P ＜0．05）,其中NaHS组较 HIRI组损伤减轻（ P ＜0．05）,LY294002组较NaHS组损伤加重（ P ＜0．05）,SOD 改变与之相反。与Sham组比较,其他各组自噬泡均增多,其中NaHS组较HIRI组自噬体减少,LY294002组较NaHS组自噬体增多,自噬相关基因表达发生相应的改变。【结论】外源性H2 S对肝纤维化大鼠HIRI发挥保护作用的机制之一,可能是通过PI3K／Akt信号通路抑制细胞自噬作用来实现的。     

乌头碱、新乌头碱及次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响

目的：探讨乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响。方法分离的成年Sprague-Dawley大鼠左心室心肌细胞分别使用0.3、1、3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液灌流12 min,灌流后4、8、12 min时检测自发性钙释放(SCR)诱发率以及舒张末期钙浓度(F0)、钙瞬变幅度(ΔF)的变化。检测灌流0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液后12 min,心肌细胞发挥正性肌力作用时钙瞬变和收缩功能动力学指标的变化。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可诱发SCR,0.3μmol/L时新乌头碱SCR诱发率最高,3μmol/L时乌头碱SCR诱发率最高。与对照组比较,给药后12 min,3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加 F0[(1.459±0.379)、(1.585±0.493)、(1.213±0.254)比(1.079±0.108)]、ΔF[(1.615±0.455)、(2.210±0.756)、(1.528±0.422)比(1.036±0.125)],差异有统计学意义(P均＜0.05);且新乌头碱ΔF高于乌头碱和次乌头碱(P均＜0.05)。与对照组比较,0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加ΔF[(0.409±0.127)、(0.423±0.107)、(0.414±0.118)比(0.260±0.065);P＜0.05或P＜0.01]、收缩幅度[(5.464±2.239)%、(7.449±2.548)%、(5.524±1.645)%比(3.428±0.911)%;P＜0.05或 P＜0.01],延长钙瞬变达峰时间[(0.041±0.016)s、(0.039±0.009)s、(0.038±0.011)s 比(0.032±0.007)s;P＜0.05或P＜0.01];与乌头碱组比较,新乌头碱和次乌头碱可降低钙瞬变消除时间常数[(0.301±0.054)s、(0.324±0.064)s 比(0.361±0.076)s;P＜0.05或P＜0.01],缩短舒张期收缩恢复至50%时的时间[(0.124±0.035)s、(0.126±0.040)s 比(0.157±0.056)s;P＜0.05或 P＜0.01]。结论乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的正性肌力作用与毒性效应同时存在,表明心肌细胞内钙浓度升高是产生正性肌力作用的有利因素,也是诱发SCR的危险因素。     

龟板提取物诱导神经干细胞向神经元分化过程中相关microRNA表达变化

【目的】观察龟板提取物诱导神经干细胞（neural stem cells, NSCs）向神经元细胞定向分化过程中相关microRNA表达的变化。【方法】分离培养孕14 d SD胎鼠原代神经干细胞,经免疫荧光染色鉴定神经干细胞的特异抗原及其多向分化能力。神经干细胞随机设空白对照组、龟板提取物低浓度组（3μg/mL）、龟板提取物高浓度组（30μg/mL）。诱导分化7 d,提取各组细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测不同组别miR-124和miR-9的变化。【结果】与空白对照组比较,龟板提取物低浓度组miR-124和miR-9表达均无显著变化,龟板提取物高浓度组均显著升高（P<0．05）。【结论】龟板提取物可能通过调控miR-124、 miR-9表达在NSCs向神经元细胞定向分化过程中起重要作用。     

益气活血片对人工寒潮诱发脑卒中大鼠凝血和纤溶系统的影响

【目的】探讨益气活血片对人工寒潮促发脑卒中大鼠凝血和纤溶系统的影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为4组,按照双肾双夹法复制易卒中型肾血管性高血压大鼠模型,中药组给予益气活血片（剂量为1.89 g·kg－1·d－1）,阳性对照组给予阿司匹林（剂量为80 mg·kg－1·d－1）,模型组及空白对照组给予等容积蒸馏水,从高血压模型复制术后14 d开始,每天1次,直到112 d后置于人工寒潮箱中3 d诱发卒中,取血检测血浆凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）、蛋白C （PC）、凝血酶—抗凝血酶复合物（TAT）及纤溶酶（PAP）水平。【结果】与模型组比较,益气活血片组可显著降低血浆TAFI、 PC、 TAT、 PAP水平,差异均有统计学意义（P＜0.05）。【结论】益气活血片对脑卒中的防治作用与其能改善凝血和纤溶系统的平衡状态有关。     

针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物和葡萄糖转运蛋白4的影响

【目的】观察针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的影响。【方法】将32只SD大鼠随机分成正常组、正常针刺组、模型组和模型针刺组,采用葡萄糖氧化酶法、酶联免疫吸附法（ELISA）、实时荧光定量PCR等方法,检测并比较各组大鼠空腹血糖(FPG),血浆胰岛素(FINS),胰岛素敏感性指数(ISI),血清C-肽(C-P),骨骼肌IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达。【结果】模型组大鼠的FPG、 FINS、C-P水平较正常组显著升高（P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较正常组显著降低(P＜0.01);模型针刺组的FPG、 FINS、 C-P水平较模型组显著降低（P＜0.05或P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较模型组显著升高(P＜0.01)。【结论】针刺可能在基因转录水平对IRS-1、 IRS-2、 GLUT4产生影响,从而改善PI3K通路的信号转导。     

逍遥散调控肝窦内皮窗孔改善大鼠抑郁样行为的机制研究

【目的】探讨逍遥散对大鼠抑郁样行为的作用及其调节机制。【方法】将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组（剂量为19 g·kg－1·d－1）和氟西汀组（剂量为2 mg·kg－1·d－1）。采用慢性不可预测轻度应激（chronic unpredictable mild stress, CUMS）诱导大鼠抑郁样行为,旷场实验观察逍遥散对抑郁样行为的作用, Luminex液相芯片分析系统检测大鼠血清细胞因子,电镜观察大鼠肝窦内皮窗孔数量和大小, Western blot法分别检测肝组织中吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO）和色氨酸2,3-双加氧酶（tryptophan 2,3-dioxygenaes, TDO）表达。【结果】逍遥散可显著增加大鼠糖水消耗、爬格数和直立数,显著降低血清TNF-α、 IL-6水平,增加窗孔数量与大小,改善肝窦内皮血管化倾向,并降低TDO和IDO的表达（均P＜0.05或P＜0.01)。【结论】逍遥散可显著改善大鼠抑郁样行为,可能与其降低炎症因子、抑制IDO通路、改善肝窦内皮功能作用有关。     

熟地寄生壮骨方对膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态的影响

【目的】观察熟地寄生壮骨方对膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态的影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为7组,即空白对照组,模型对照组,必理通片组（剂量为0.270 g/kg）,壮骨关节丸组（剂量为1.08 g/kg）,熟地寄生壮骨方高、中、低剂量组（剂量分别为27.450、13.725、6.863 g/kg）;采用关节腔注射木瓜蛋白酶法复制右膝骨关节炎模型,测量给药前后各组大鼠膝骨关节厚度,观察各组对右膝骨关节炎模型的影响;取右膝关节软骨及软骨下骨,制成组织切片后进行苏木精—伊红（HE）染色,采用Mankin软骨组织学评分法进行评分。【结果】与空白对照组比较,模型组膝骨关节肿胀度显著增大（P<0.01）, Mankin评分值显著增加（P<0.01）;与模型对照组比较,熟地寄生壮骨方各剂量组大鼠膝骨关节肿胀度显著减小（P<0.05或P<0.01）, Mankin评分值均显著降低（P<0.01）,膝关节软骨病理变化均减轻。【结论】熟地寄生壮骨方能改善膝骨关节炎模型大鼠膝关节软骨形态,达到改善软骨退变、保护软骨的目的。     

通窍化瘀法对大鼠视网膜血管内皮和视神经放射性损伤的预防作用

【目的】探讨通窍化瘀法对大鼠视网膜血管内皮细胞和视神经放射性损伤的预防作用。【方法】选择SD大鼠36只,随机分为空白组、模型组和实验组,模型组与实验组均采用放射线照射3周,每周1次;实验组于放射照射前2周开始每日腹腔内注射黄芪注射液（剂量为4.0 g/kg）、盐酸川芎嗪注射液（剂量为15 mg/kg）和醒脑静注射液（剂量为2.5 mL/kg）,空白组和模型组每日腹腔注射等量生理盐水。采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定各组放射照射前、照射后1 d、2周、4周及6周大鼠静脉血内皮素-1（ET-1）和血管性血友病因子(vWF)的浓度,分析其动态变化和组间差异。于照射后2、4、6周分别取材进行视神经透射电镜检查,观察视神经轴索脱髓鞘病变程度,并计算和比较各组视神经脱髓鞘率。【结果】与空白组比较,放射照射后模型组静脉血ET-1、 vWF浓度显著升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）,并于照射后4周达到峰值;与模型组比较,照射2周后实验组静脉血ET-1、 vWF浓度显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与空白组比较,放射照射后2、4、6周模型组视神经脱髓鞘率显著增高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;模型组和实验组比较视神经脱髓鞘率在照射后2、4周差异均无统计学意义（P＞0.05）,照射后6周实验组视神经脱髓鞘率显著低于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）。【结论】通窍化瘀法预防性干预能够显著降低放射性视网膜视神经损伤模型大鼠静脉血ET-1、 vWF浓度,减轻放射线对视网膜血管内皮的损伤,并对放射性视神经损伤后期轴索脱髓鞘改变有改善作用。     

胃痞消对胃癌前病变大鼠血浆肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-4表达的影响

【目的】观察胃痞消对脾虚证胃癌前病变(PLGC)大鼠血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-4(IL-4)表达的影响。【方法】将SD大鼠分为6组:正常对照组,模型组,维酶素组(剂量为0.2 g·kg-1·d-1),胃痞消高、中、低剂量组(剂量分别为15、7.5、3.75 g·kg-1·d-1)。采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)溶液(200μg/m L)自由饮用、小承气汤(2 m L/只,生药1 g/m L)灌胃法及饥饱失常等多因素造模18周复制脾虚证胃癌前病变模型,观察各组大鼠的组织病理学及行为学变化,检测血浆TNF-α及IL-4含量。【结果】模型组血浆TNF-α、IL-4含量较正常组显著降低(P<0.05);维酶素组、胃痞消高剂量组、胃痞消低剂量组血浆TNF-α含量较模型组显著升高(P<0.05),模型组与胃痞消中剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05);维酶素组、胃痞消高剂量组、胃痞消中剂量组、胃痞消低剂量组血浆IL-4含量与模型组比较均显著升高(P<0.05)。【结论】胃痞消改善脾虚证胃癌前病变大鼠组织学变化的机制可能通过调节血浆TNF-α、IL-4含量变化及胃黏膜间质淋巴细胞及单核细胞的动员而实现。     

表里经配穴法对脑缺血再灌注损伤大鼠海马细胞凋亡及JNK信号通路的影响

【目的】观察表里经配穴法对脑缺血再灌注损伤大鼠海马细胞凋亡及c－jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤保护作用的可能机制。【方法】将120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、表里经配穴电针组、抑制剂组;参照Longa法复制局灶脑缺血再灌注模型,表里经配穴电针组取表里经配穴的足三里、三阴交和尺泽、合谷行电针治疗,每日1次。采用神经行为学评定各组大鼠不同时段神经行为, TUNEL法检测海马细胞凋亡指数,免疫组织化学法检测p－JNK表达。【结果】表里经配穴电针组、抑制剂组神经功能缺损评分均显著低于模型组（P＜0．05）;模型组凋亡指数显著高于假手术组（P＜0．01）,表里经配穴电针组和抑制剂组凋亡指数均显著低于模型组（P＜0．05）;模型组各时段p－JNK表达较假手术组显著增加（P＜0．01）,表里经配穴电针组、抑制剂组p－JNK表达较模型组显著降低（P＜0．05）。【结论】表里经配穴法可不同程度地减轻缺血再灌注后大鼠的神经功能缺损,减少细胞凋亡,其机制可能与抑制JNK信号通路有关。