肝细胞癌免疫治疗的现状与挑战

免疫疗法是目前肿瘤治疗的一种新方法,应用前景广阔,在治疗相关毒性和疗效方面较传统疗法均具有明显优势。免疫检查点抑制、克服肿瘤免疫逃逸和重建抗肿瘤免疫机制是肿瘤免疫治疗的关键。在肝细胞癌中,免疫治疗尚处于初级阶段,免疫治疗单独或联合其他治疗方法可能有利于控制肿瘤进展,但总体疗效仍然有限。本文结合免疫治疗在肿瘤中的研究和应用进展,分析了肝细胞癌免疫治疗研究现状以及面临的挑战。     

Fyn与小鼠肝纤维化模型中胆汁酸代谢组分的相关性研究

目的探讨四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型中胆汁酸(bile acids,BAs)代谢的改变,并初步探索分子机制。方法选取6周龄的C57BL/6小鼠,用四氯化碳诱导6周为肝纤维化模型(肝纤维化组),正常饲养小鼠6周作为对照(健康组)。对2组小鼠肝脏进行病理评估和血清学检测,利用液相色谱与质谱联用技术检测血清中BAs各组分的含量,利用Western Blot检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Fyn的表达量。结果四氯化碳诱导形成小鼠肝纤维化模型后,小鼠血清中BAs代谢各组分普遍升高,其中肝纤维化组中鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)、去氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)、牛磺-β-鼠胆酸(tauro-β-muricholic,T-βMCA)、熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)、α-鼠胆酸(α-muricholic acid,α-MCA)、β-鼠胆酸(β-muricholic acid,β-MCA)相比健康组均显著升高,Fyn的表达量也显著升高并且与UDCA、DCA、牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TCDCA)呈正相关的关系。结论本研究明确了四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型中BAs各组分的改变,并揭示Fyn对BAs的合成和转运可能起重要调控作用,进而影响肝纤维化的形成。     

索拉非尼联合冷冻消融治疗进展期乙肝相关性肝细胞癌患者的疗效预测分析

背景与目的:索拉非尼(Sorafenib)联合氩氦刀局部冷冻消融(argon-helium cryoablation)治疗进展期肝细胞癌(advanced hepatocellular carcinoma,AHCC)患者疗效确定,但患者之间的预后相差很大.目前所采用的进展期肝癌预测系统(advanced liver cancer prognostic systems,ALCPS)、终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)、Child-Pugh分级等评分系统对疗效的评价都有一定的意义,但对其优劣性缺乏相关的对比研究.本研究采用上述系统对接受联合治疗的AHCC患者进行分层分析,以评价各个评分系统在联合治疗预后预测中的意义,为临床医生选择合适的治疗对象提供依据.方法:50例进展期乙型肝炎相关性肝癌患者,给予索拉非尼联合氩氦刀局部冷冻消融治疗后,分别比较按照ALCPS、MELD、Child-Pugh评分系统划分的不同分值区间患者的疗效、生存期及疾病进展时间,分析各评分系统在预后评价中的意义.结果:50例患者经治疗后中位总生存期(OS)为11.0个月、中位疾病进展时间(TTP)为6.0个月,其中2例(4%)患者获得完全缓解(CR),8例(16%)部分缓解(PR),23例(46%)病情稳定(SD),治疗有效率达66%.ALCPS评分≤8分、9～15分及≥16分的患者中位OS分别为16.5、8.6和6.8个月(P<0.05),中位TTP分别为12.0、6.0和2.0个月(P<0.01),治疗有效率分别为94.1%、70.6%和31.3%(P<0.01).MELD评分≤7分和>7分的患者中位OS分别为16.5和7.8个月(P<0.05),中位TTP分别为10.0和2.5个月(P<0.05);治疗有效率分别为78.8%和41.2%(P<0.01);Child-Pugh A/B的患者OS及TTP差异无统计学意义(P>0.05),治疗有效率分别为69.2%和54.6%(P>0.05).结论:ALCPS、Child-Pugh、MELD系统对AHCC患者治疗预后均有不同程度的预测意义,而ALCPS系统更能有效地预测AHCC的临床获益程度.     

乙型肝炎病毒X蛋白和p14ARF依赖性、非依赖性途径对肝癌细胞生长的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是否通过p14ARF途径影响肝癌细胞生长及其作用机制.方法 将HBx及p14ARF单转染及共转染含野生型p53但不表达p14ARF脚的肝癌细胞株HepG2.实验分为pcDNA3、pcDNA3HBx、pcDNA3p14ARF、pcDNA3HBx+pcDNA3p14ARF4组.通过流式细胞仪比较各转染组HepG2细胞凋亡、细胞周期的变化情况.用含p53结合位点p21WAF1胴启动子荧光素酶活性检测和Western blotting观察各转染组细胞p14ARF、MDM2、p53、p21WAF1蛋白表达水平的变化.结果 HBx及p14ARF脚单转染及共转染含野生型p53但无p14\ARF表达的HepG2细胞,单转染HBx及p14ARF组其细胞凋亡率(14.11%、13.72%)、G0/G1期阻滞细胞数(63.62%、61.75%)、p21WAF1启动子荧光素酶活性(1.25±0.05、1.09±o.06)及p53、p21 WAF1蛋白的表达较对照组(10.66%、57.42%、0.77±0.03)明显升高,而共转染组与单转染p14ARF组相比其p14ARF蛋白表达及上述各项指标(18.61%、66.74%、3.53±0.43)又进一步升高.结论 HBx通过依赖及非依赖p14ARF途径诱导p53表达从而导致激活p21WAF1,进而引起细胞周期G0/G1期的阻滞及细胞凋亡的增加.     

抑制性消减杂交技术筛选干扰素α转染HepG2细胞中上调的表达基因

目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术筛选干扰素α(IFN-α) 真核表达质粒转染HepG2细胞后差异表达上调的基因。方法:首先构建IFN-α真核表达载体pcDNA3．1(-) -IFN-α,并转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液, 提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与T／A载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增鉴定,进行测序及同源性分析。结果:构建了pcDNA3．1(-)-IFN-α真核表达质粒,并成功构建了该质粒转染HepG2细胞后差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到200个白色克隆,随机挑取70个进行菌落PCR分析,结果显示均含有插入片段,将含有200-1000 bp插入片段的35个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得17种已知基因序列和1个染色体序列。结论:应用SSH技术成功构建了pcDNA3．1(-)-IFN-α转染的HepG2细胞中差异上调表达基因的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明IFN-α作用的分子生物学机制提供了重要的理论依据。     

β干扰素的特性及其在乙型肝炎治疗中的应用

β干扰素（IFN β）在抗乙型肝炎方面有重要的应用前景，可用来治疗IFN α治疗无效的慢性乙肝患者。该文对IFN β结构、信号传导途径和在乙型肝炎治疗中的应用进行了介绍。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白4A与钙离子信号调节亲环素配体的相互作用

目的 应用酵母双杂交技术及免疫共沉淀技术证实HCV非结构蛋白4A（HCV NS4A）与钙离子信号调节亲环素配体（CAML）的相互作用。方法 对CAML编码基因进行克隆，并构建其酵母表达载体，在酵母细胞中与HCV NS4A进行回交验证后，构建HCV NS4A及CAML真核表达载体，转染293细胞，行免疫共沉淀实验及Western印迹检测。结果 成功克隆CAML基因，并构建CAML的酵母表达载体，在酵母细胞中回交验证HCV NS4A与CAML的相互作用，构建HCV NS4A及CAML的真核细胞表达载体，并利用免疫共沉淀技术验证了两者的相互作用。结论 CAML与HCV NS4A的相互作用可能对HCV感染细胞的钙离子浓度、细胞凋亡等生物过程产生影响，从而在HCV感染慢性化过程中发挥作用。     

降钙素原在败血症中的诊断意义

目的通过分析血清降钙素原(PCT)在由革兰阴性菌和革兰阳性菌引起败血症患者中的血清浓度,明确PCT对不同菌引起败血症的诊断意义,为早期治疗提供理论依据。方法搜集医院发热患者145例,血培养阳性患者74例,阴性患者71例;血培养阳性患者中革兰阴性菌和革兰阳性菌各37例,比较不同组间PCT血清浓度。结果革兰阳性菌引起败血症以表皮葡萄球菌为主占21.62%,革兰阴性菌引起败血症以肺炎克雷伯菌为主占18.92%;通过比较3组间PCT表达水平,发现革兰阴性菌组PCT血清浓度明显高于革兰阳性菌组和血培养阴性组患者,而革兰阴性菌或革兰阳性菌不同菌间PCT表达差异无统计学意义;通过ROC曲线分析发现PCT诊断革兰阴性菌引起败血症的灵敏度为81.0%、特异性为93.0%、曲线下面积为92.0%。结论 PCT对于革兰阴性菌引起败血症具有较高的诊断价值,而对于非败血症及革兰阳性菌引起的败血症诊断意义不大。     

2012年EASL-EORTC《肝细胞癌临床管理指南》简介

欧洲肝脏研究学会和欧洲癌症研究治疗组织于2011年底首次联合颁布了《肝细胞癌临床管理指南》,对肝细胞癌的监测、诊断、分期系统、分子分类和治疗策略提出建议,旨在根据循证医学证据为医生、患者、保健人员和政策制定者提供实践指导。