军事医学科学院附属医院临床检验中心分子诊断实验室

<正>军事医学科学院附属医院临床检验中心分子诊断实验室位于北京市丰台区东大街8号,成立于2007年3月,是集临床、科研、教学为一体的综合实验室。现有技术人员8人,其中主任技师1人,主治医师1人,技师6人。拥有完备的分子生物学实验条件和设备,包括罗氏LighCycler480Ⅱ实时荧光定量PCR检测系统、伯乐IQ5实时荧光定量PCR仪、SLAN实时荧光定量PCR仪、罗氏MagNA Pure LC 2.0全自动核酸分离纯化及加样系统、西安天隆核酸提取仪、梅里埃Easy MAG全自动核酸提取系统、电化学     

透明质酸对骨关节炎细胞模型中细胞蛋白多糖分泌功能的影响

目的探讨透明质酸(HA)对体外培养的大鼠骨关节炎(OA)细胞增殖率及蛋白多糖分泌功能的影响。方法选取无特定病原体(SPF)级成年雄性SD大鼠1只,机械分离膝关节软骨,经胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶消化,CO2恒温培养,取第三代传代细胞,将其与DMEM培养液混合制成的细胞悬液移入细胞培养板中,分为三组,每组8个孔,接受不同的处理方法。模型组以白细胞介素(IL)-1β建立体外OA细胞模型;HA组造模外加入不同浓度(10、50、100、150μg/L)的透明质酸(HA);对照组不加IL-1β和HA,均孵育72 h。分别采用四氮甲基唑蓝(MTT)法及二甲基亚蓝(DMB)比色法检测各组软骨细胞的增殖率及蛋白多糖的含量。结果模型组与HA组的细胞增殖率均显著低于对照组(P0.05),而模型组与HA组比较无统计学差异(P0.05);模型组与HA组(10、50μg/L)的蛋白多糖含量均显著低于对照组,而HA 100、150μg/L组的含量高于模型组(P0.05),而两组与对照组相比均无统计学差异(P0.05)。结论外源性HA可促进OA细胞对蛋白多糖的分泌功能,但对细胞增殖率无影响。     

柳蘑多糖对角质形成细胞作用实验研究

目的观察柳蘑多糖对角质形成细胞株(Ha Cat细胞)生物学性状的影响,并探讨其相关作用机制。方法MTT法检测柳蘑多糖对Ha Cat细胞增殖活性的影响;Annexin V-PI染色法测定柳蘑多糖刺激Ha Cat细胞后的凋亡情况;PI法测定应用柳蘑多糖刺激后Ha Cat细胞周期的改变;重组人γ-干扰素(rh IFN-γ)诱导Ha Cat细胞活化,然后加入柳蘑多糖,用ELISA法检测IL-8和ICAM-1细胞因子分泌情况。结果 MTT法证实柳蘑多糖对Ha Ca T细胞的增殖有抑制作用,且最佳抑制浓度为0.1μg/m L,最佳作用时间为48 h;用Annexin V-PI染色法证实了柳蘑多糖可以促进Ha Ca T细胞凋亡,尤其是晚期凋亡;用PI法证实了柳蘑多糖可以影响Ha Ca T细胞的细胞周期,对细胞DNA合成期有影响;用ELISA法证明了rh IFN-γ活化后Ha Ca T细胞分泌的白介素-8(IL-8)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)明显增多,而柳蘑多糖可以使活化后Ha Ca T细胞分泌的IL-8及ICAM-1显著减少。结论柳蘑多糖可以抑制体外培养的角质形成细胞的增殖、促进角质形成细胞凋亡、改变角质形成细胞的细胞周期,减少细胞因子(IL-8,ICAM-1)分泌,提示柳蘑多糖有抑制角质形成细胞增殖、减轻炎症反应的潜力。     

综合权重相关分析优选鸡血藤抗肝肿瘤组分的提取工艺

目的优选鸡血藤抗肝肿瘤有效组分的提取工艺,为其生产利用提供可靠依据。方法采用正交设计试验方法,选取提取时间、料液比、提取次数、乙醇体积分数为考察因素,以药效为指标,优选提取工艺,再测定总黄酮含有量、芒柄花素含有量和出膏率。然后,通过对这三项指标赋予不同权重所得的多组综合评分与药效指标(细胞抑制率)进行相关度分析,确定能反映药效的指标及其权重范围。结果鸡血藤有效组分的最佳提取工艺为50%乙醇加热回流提取2次,料液比1∶30,提取时间1.5 h。总黄酮和芒柄花素含有量的最佳权重系数范围分别为0.6~1和0~0.4。结论该工艺条件下,细胞抑制率、总黄酮提取率及芒柄花素含有量均比较高,表明该方法合理、提取工艺稳定可行。     

细柱五加多糖的提取工艺优选

目的优化细柱五加多糖的提取、纯化工艺。方法以多糖提取率为评价指标,通过单因素和正交试验方法,考察溶剂用量、提取时间、提取次数及提取温度细柱五加多糖提取工艺的影响为考察因素。结果细柱五加多糖最优提取工艺为准确称取10.0 g药材超声提取,纯水200 mL、提取温度60℃、提取时间90 min、提取次数4次。结论优选的提取、纯化工艺稳定可靠。     

红芪多糖对12周龄糖尿病db/db小鼠血脂的影响

目的:观察红芪多糖对12周龄糖尿病db/db小鼠血脂、血糖的影响,以进一步评价红芪多糖对2型糖尿病糖脂代谢紊乱的调节作用。方法:将40只12周龄雄性SPF级BKS背景肥胖型2型糖尿病db/db小鼠随机分为红芪多糖(HPS)高剂量组、HPS中剂量组、HPS低剂量和模型对照组,每组10只;另外10只同品系非糖尿病db小鼠为正常对照组。分别给予红芪多糖及生理盐水灌胃治疗8周后观察各组小鼠的血脂情况。结果:红芪多糖高、中剂量组能明显改善db/db小鼠血脂水平(P<0.01),而红芪多糖低剂量组与模型组比较未见明显差异(P>0.05);在实验过程中,除正常对照组外,其余各组血糖均不同程度上升,治疗8周时,HPS高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:红芪多糖对12周龄的db小鼠血脂、血糖有一定的调节作用,对研究血脂与2型糖尿病、肥胖、脂肪肝的关系及治疗有一定意义。     

丹参多糖提取工艺优选与含量测定

目的优化丹参多糖提取工艺,测定不同产地丹参药材多糖含量。方法采用正交实验设计法,以丹参药材中多糖含量为指标,确定多糖提取的最佳工艺,采用苯酚 硫酸法对不同产地丹参药材的多糖含量进行测定。结果建立了丹参药材多糖的最优提取工艺：加入溶剂量20倍,药材粉末回流提取50 min,提取3次,醇沉浓度为70%。不同产地的丹参药材多糖含量差异无统计学意义。结论优化的提取工艺稳定、合理、可行,为丹参药材多糖活性的进一步研究和药材质量评价提供了可靠的实验依据。     

灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠氧化应激的影响

目的研究灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病大鼠氧化应激的影响。方法 采用斯泼累格·多雷（SD）大鼠高脂饮食4周后,腹腔注射小剂量链脲佐菌素30 mg.kg-1造模。成模后将大鼠随机分为模型对照组、灵芝多糖组（给予灵芝多糖600 mg.kg-1）、二甲双胍组（给予二甲双胍600 mg.kg-1）及联合用药组（给予灵芝多糖300 mg.kg-1＋二甲双胍300 mg.kg-1）,另设正常对照组。给药治疗12周末测量大鼠空腹血糖;测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）水平。结果用药组空腹血糖水平均低于模型对照组（P<0.01）,其中联合用药组血糖显著低于单独用药组（P<0.01）。与模型对照组比较,用药组血清TC、TG水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,与单独用药组比较,联合用药组血清TC、TG水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组比较,用药组血清SOD水平明显升高（P<0.01）;与单独用药组比较,联合用药组血清SOD水平明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清MDA水平明显降低（P<0.01）,联合用药组血清MDA较单独用药组明显降低（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清CAT、GSH-Px水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,联合用药组血清CAT、GSH-Px水平较单独用药组明显升高（P<0.05）。结论 灵芝多糖、二甲双胍联合用药能够有效对抗2型糖尿病大鼠体内氧化应激作用,效果优于单独用药,其机制可能与增强体内SOD、CAT、GSH-Px水平及调节血脂障碍有关。     

孕妇外周血浆中艾杜糖-2-硫酸酯酶活性测定在黏多糖贮积症Ⅱ型无创产前诊断中的应用评价

目的探讨黏多糖贮积症Ⅱ型非损伤性产前诊断途径。方法测定36例孕妇孕前、孕早期和孕中期外周血浆中艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)活性变化趋势,同时,测定胎儿绒毛组织或经培养羊水细胞中IDS酶活性,并提取胎儿DNA,进行胎儿性别鉴定和IDS基因分析。结果有创产前诊断检出19例正常胎儿(7例男性不受累胎儿、12例女性非携带者胎儿)、7例男性受累胎儿、9例女性携带者胎儿和1例双胎(一男一女,不受累);正常胎儿孕母在孕前、孕早、中期血浆中IDS的活性分别为283.4±81.6、470.5±89.4、507.9±81.0nmol/4h·ml(男性不受累胎儿)和306.0±85.5、455.8±129.4、513.3±157.6nmol/4h·ml(女性非携带者胎儿),均显著高于男性受累胎儿和女性携带者胎儿孕母同期血浆IDS活性(分别为160.5±47.5、145.8±36.8、144.9±45.8nmol/4h·ml和214.9±74.8、327.6±133.4、375.3±120.4nmol/4h·ml)(P0.05);正常胎儿和女性携带者胎儿孕母血浆IDS活性随着孕周的增加持续升高(P0.05),但女性携带者胎儿组升高的幅度较正常胎儿组小;当为男性受累胎儿时,孕妇血浆IDS活性早期即显示低于孕前,且随着孕周的增加,酶活性持续降低。结论孕妇外周血中IDS活性测定可用于黏多糖贮积症Ⅱ型的非损伤性产前诊断。     

血中伤寒沙门菌DNA提取方法的改进

我们在实验中采用ＮａＩ裂解、ＳｉＯ２捕获法提取单核细胞中伤寒沙门菌ＤＮＡ，与多种方法进行比较，效果较佳。１材料与方法１．１标本来源本院门诊及住院病人拟诊为伤寒沙门菌感染；标准菌株Ｓ．ｔｙｐｈｉ５００７１购自中国药品生物制品检定所。１．２ＰＣＲ扩增参照...