用改良消减法克隆类风湿性关节炎滑膜细胞中的高表达基因

0　引言　在类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)中 ,关节内滑膜细胞 (fibroblast- like synovial cells,FL S)的过度增生是造成关节软骨破坏和关节畸形的关键环节 ,为了研究滑膜细胞发生增殖的机制 ,我们采用赵忠良等人设计的改良消减杂交法[1 ] ,并以骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)滑膜细胞为对照筛选 RA滑膜细胞中的高表达基因 .1　方法　将 RA滑膜细胞和 OA滑膜细胞分别设定为实验组和扣除组 ,用扣除组的 c DNAs杂交扣除掉实验组中与前者相同的 c DNAs,得到的就是目的产物 :实验组中高拷贝数的或独有的 c DNAs,也就是 …     

膝关节半月板周缘性移位现象的初步MRI研究

目的采用MRI研究半月板周缘性移位现象,确定其诊断标准,提出移位指数的概念,并探讨其临床意义。方法回顾性研究2000年1月至2004年2月共398例因膝关节症状进行膝关节MR检查的患者,除外小于18岁,以及膝关节内严重病变或重度积液的患者,共入选312例。以股骨远端关节面内外侧缘和胫骨平台内外缘侧缘的连线为基线,确定半月板周缘性移位现象,将半月板突出部分宽度与半月板整个宽度之比设定为半月板周缘性移位指数。结果半月板周缘性移位的总发生率为16.7%(52/312),左右侧膝关节发生率分别为19.3%(31/161)和13.9%(21/151),差异无统计学意义(χ2=1.60,P>0.05),内侧半月板47例,外侧半月板6例,内外侧比为7.8∶1。半月板移位指数平均值为0.54±0.24,各年龄组间比较差异具有统计学意义(F=3.63,P<0.05),移位指数随年龄增高而加大。50岁以下组半月板周缘性移位现象发生率和移位指数分别为12.0%(17/142)和0.46±0.22,50岁以上组分别为20.6%(35/170)和0.64±0.20,两组之间差异具有统计学意义(t=0.84,P<0.01)。结论在该组膝关节存在症状的人群中,经MRI研究证实半月板周缘性移位现象并非少见,其原因及临床意义需要进一步研究。     

自体输血技术在脊柱外科手术中的应用

目的：探讨自体输血技术在脊柱外科手术中的作用及优点。方法：对213名进行脊柱手术的患者作了比较，患者分为对照组（103例）和实验组（110例）。实验组采用术前预存血和术中自体血回收技术输入自体血，对照组全部使用异体输血。结果：对照组患者平均输入异体血890ml，实验组患者平均输入异体血120ml。结论：在脊柱外科手术中，行内固定和椎间融合等中、大型手术的出血量较多，采用术前预存自体血及术中引流血回输技术可以大大减少异体输血量以及由此带来的各种异体输血后并发症的发生。     

讨论

1关于国有医院的弊端吕厚山（北京大学人民医院院长）：国内的人事聘任制度僵化，人力资源的价值太低。特别是加入WTO后，一流的医院最害怕一流的人才被挖走，要维持一流的医院必须保证一流的人才，而要保证一流的人才则要保证一流的薪水。国外医院的人力成本占总成本的80%以上，而国内只占到10%-20%。这样只要国外医疗机构用高薪政策实行人才本地化冲击，国内的人才必然流失。杜如煜（原北京大学人民医院院长）：医院没有一套完整的成本核算体系，无法实行按成本定价。高居忠（北京朝阳医院院长）：目前医院的发展没有一套可靠的机制。医…     

人工关节的新进展

人工关节置换就是对肿瘤或其它疾病造成的关节破坏进行修复,解除疼痛、畸形和功能障碍,以重建一个功能接近正常的关节,是近30年来矫形外科学中投资最大、发展变化最突出的领域之一。人工关节置换,特别是髋关节和膝关节置换术,被认为是效果非常肯定的治疗方法,10年成功率已超过90％。现在欧美等发达国家每年仅人工髋、膝关节置换的数量就超过50万人次。人工关节的研制,国外大约始于40年代,我国大约始于60年代并在近20年内全面开展。本文主要就人工髋、膝关节的发展做简要介绍。 　　人工全髋关节的新进展 1假体的植入材料 　　髋关节是受力复杂的负重关节,在负重情况下,假体同时承受拉、压、扭转、界面剪切、疲劳及磨损的综合作用。因此要求假体材料必须具有足够的强度、塑性和抗疲劳、抗磨损、抗腐蚀性能。整个关节的安全承载能力至少应大于7倍体重。除此之外,由于假体长期植入体内,材料应具有良好的生物相容性,无毒副作用,耐体液的化学腐蚀和电化学腐蚀,比重轻,弹性模量接近于人的皮质骨。但目前的生物材料尚达不到尽善尽美,只能根据综合性能匹配选用,尽可能满足生理环境和关节力学要求。 　　早期的人工关节是用不锈钢制造的,但因不锈钢的耐腐蚀性和强度不如钴合金与钛合金,已逐渐被后两者所替代。钴合金是钴基合金,其耐磨性、耐腐蚀性和综合机械性能都较好,国外有铸造型(HAYNES21)和锻造型(HAYNES25)两种,是较优良的植入材料。钛合金表面易氧化生成致密的二氧化钛氧化膜,耐腐蚀性非常好,优于钴合金;比重轻,约为钴合金的一半;弹性模量与人骨的弹性模量较接近,生物相容性好,生物界面结合牢固,是较理想的植入材料。但其耐磨性差,故不宜用于球头的制造,只适用于股骨柄假体的制造。目前,这两种金属普遍应用于国内外的假体材料中。 　　近年来,在国外生物陶瓷髋臼被研制并广泛用于临床。随着生物材料的不断发展,国内外正在研究、利用喷涂技术或烧结技术在金属外表面结合一层羟基磷灰石或是聚醋酸、碳素等材料制成复合材料,借此形成骨性结合,从而增加固定效果,防止松动、脱离。另外,随着对BMP的深入研究,国内外正在尝试将骨形成蛋白按一定比例与羟基磷灰石结合制成新型的人工关节涂层。但以上材料尚处于动物试验阶段,未进入临床应用,仍需长时间的观察和研究。     

类风湿性关节炎滑膜细胞蛋白酪氨酸激酶的RNA表达水平分析

根据已知的PTKs的氨基酸序列保守区设计简并引物,采用3‘快速末端扩增法（3‘RACE）扩增了滑膜细胞中PTKs cDNAs的3‘末端,然后通过RNA点杂交方法分别观察了这些PTKs在类风湿性关节炎(RA）和骨性关节炎（OA）病人滑膜细胞中的表达水平。结果从RA FLS细胞中共克隆到6种已知PTKs cDNA片段,分别为血小板衍生生长因子受体A（PDGFRA）、胰岛素样生长因子－1受体（IGF－1R）、含盘状（discoidin）结构域的受体型酪氨酸激酶（DDR2）、Lyn、Janus激酶1（JAK1）和TYK2。RNA点杂交结果显示,在4例RA病人和2例OA病人的滑膜细胞中都表现为：PDGFRA、IGF－1R和DDR2在RA滑膜细胞中的表达水平高于OA滑膜细胞,其它几种激酶在两种细胞中的表达水平无明显差别,说明RA滑膜细胞至少表达PDGFR、IGF－1R、Lyn、DDR2、JAK1和TYK2等6种PTKs,其中PDGFRA、IGF－1R和DDR2可能与RA滑膜细胞的过度增殖和对软骨的侵蚀性相关。     

程序化细胞死亡因子5过表达促进雷公藤内醇酯诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡

目的:探讨程序化细胞死亡因子5(progrmmed cell death 5,PDCD5)过表达对雷公藤内醇酯(triptolide)诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatiod arthritis fibroblast-likes synoviocytes,RA FLS)凋亡的作用.方法:体外分离培养RA FLS进行腺病毒Ad-PDCD5(含有PDCD5基因的腺病毒载体)的转染,分别用免疫印迹法和流式细胞术检测Ad-PDCD5转染后的RA FLS中PDCD5蛋白表达及经雷公藤内醇酯处理后的PDCD5蛋白过表达的RAFLS的凋亡率.结果:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为50、100、200和300的Ad-PDCD5感染RAFLS 36 h后,PDCD5蛋白表达水平呈现剂量依赖性增加.未经雷公藤内醇酯处理的非感染组、Ad-null组(不含目的基因的空载体)和Ad-PDCD5组RA FLS的凋亡之间差异无统计学意义,经雷公藤内醇酯处理后,其RA FLS的凋亡率分别为(22.51±3.87)%,(28.77±12.97)%和(48.87±12.69)%.表明此腺病毒体系能够有效地使PDCD5蛋白过表达,在RA FLS中,单独使用雷公藤内醇酯或者单独转染PDCD5都不能明显地诱导细胞凋亡,但过表达PDCD5再进行雷公藤内醇酯处理可以诱导细胞凋亡.结论:腺病毒Ad-PDCD5转染使PDCD5过表达,从而能够促进雷公藤内醇酯诱导的RA FLS凋亡,为类风湿关节炎的临床治疗提供了一个可能的干预靶点.     

人工关节的新进展

人工关节置换就是对因疾病或肿瘤造成的关节破坏进行修复,解除关节疼痛、畸形和功能障碍,重建一个功能接近正常的关节。它是近３０年来矫形外科学中投入最多,发展变化最突出的领域之一。目前,人工关节置换术,特别是人工髋关节和人工膝关节置换术,被认为是效果非常肯定的治疗方法。现在欧美等发达国家,每年仅人工髋、膝关节置换的数量已超过５０万人次。人工全髋关节的新进展一、假体的置入材料髋关节是受力复杂的负重关节,在负重情况下,同时承受拉、压、扭转和界面剪切力及反复疲劳、磨损的综合作用。因此要求假体的材料必须具有足够的强度…     

1202个人工膝关节置换术的临床特点分析

目的通过对14年所行1202个人工膝关节置换术的分析,探讨我国行膝关节置换术患者的特点及不同的处理方法。方法1987年4月～2001年8月对833例1202膝行关节置换,其中单膝关节置换464例,双膝同期置换369例738膝。原发疾病为骨关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、色素绒毛结节性滑膜炎等。畸形包括内翻、外翻、屈膝挛缩、屈膝骨性强直、屈膝半脱位骨性强直及强直性脊柱炎、类风湿性关节炎患者的多发关节破坏。结果有些被文献认为是膝关节表面置换禁忌的严重畸形,术后关节功能和生活质量均有明显改善。通过手术技术的改进,高度屈膝畸形的术后并发症比早期起步阶段明显减少。结论我国人工膝关节置换术在病例的难度、传统观念、患者经济承受能力等方面比发达国家有更多的困难;假体选择必须尽早定型以便得到更好的临床效果;康复对临床疗效至关重要,应建立专职康复队伍;假体早日国产化,是推动我国人工膝关节置换发展的关键。     

髋膝关节置换术前预测深静脉血栓形成的多因素分析

[目的]通过对髋、膝关节置换术前患者的相关危险因素的分析,个体化预测其术后下肢深静脉血栓形成(deepveinthrombosis,DVT)的可能性.[方法]2006年4月～2011年11月共309例(髋关节病变113人、膝关节病变196人)接受髋、膝关节置换术的无DVT的患者被纳入研究.所有患者在围术期均接受正规的物理及药物预防血栓治疗.术后第3～10d根据患者病情复查双下肢深静脉彩超了解是否形成血栓.最后,通过术后DVT组与非DVT组的各种术前危险因素的对比分析,提出术前预测术后DVT的公式.[结果]309名患者中术后发生DVT者82例,其中髋关节12例,膝关节70例;单关节置换术后38例,双关节同时置换术后44例.通过判别分析,发现年龄、谷草转氨酶、肌酐、一次手术关节数量、凝血酶原时间和D-二聚体定量与髋、膝关节置换术后DVT的相关性较强,并得出函数预测公式.所有患者平均随访3.5年(4～71个月),均未发生症状性肺栓塞,也未发生明确的肝素类药物副作用.[结论]即使在围术期正规抗凝治疗的前提下,髋、膝关节置换术后DVT的发生率仍然较高.术前如开展个体化预测,能提示对高危人群给予更积极、合理的干预,从而减少术后DVT相关的并发症.