人源抗Met基因工程抗体scFv的改造与特性分析

目的:将已制备的抗Met单链抗体基因与人IgG Fc基因片段融合,表达有活性的融合蛋白分子,以增强单链抗体的可溶性.方法:从人淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增并制备人IgG的Fc基因片段,并克隆于已构建好的pBAD-scFv原核表达载体中,转化大肠杆菌Top10,经阿拉伯糖诱导表达融合蛋白scFv-Fc.所表达的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE、Western blot分析鉴定,并用ELISA检测抗体效价.结果:序列分析表明重组质粒pBAD-scFv-Fc基因序列正确;SDS-PAGE分析表明,scFv-Fc融合蛋白分子量为60 ku,且为可溶性蛋白;该蛋白经过His亲和层析纯化、ELISA检测,结果表明,该融合蛋白能够与抗原分子Met特异性结合.结论:改造后的抗体融合蛋白scFv-Fc能与人Met特异性结合,增加了抗体蛋白溶解度,有利于抗体的大量制备.     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定

目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体,初步鉴定表达产物的活性。方法用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-GGGGS—VL将双链抗体基因重组入原核表达载体pBAD／gⅢ。表达质粒转化E．coli TOP10F’,左旋阿拉伯糖诱导表达。对表达产物进行分离纯化,ELISA检测纯化蛋白与血吸虫病人血清抗体的结合活性。结果测序证实双链抗体基因正确,构建了双链抗体的原核表达系统,双链抗体在细菌超声上清和沉淀内均有表达,分子量约为34kD。纯化产物经ELISA鉴定,结果表明NP30单特异性双链抗体可与血吸虫病人血清抗体特异性结合。结论构建和表达的日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体具有与亲本单抗相同的结合活性。     

产妇产褥期感染病原菌与产后抑郁的相关性分析

目的 探讨产妇产褥期感染与产后抑郁的相关性,为预防和降低产后抑郁的发生提供数据基础.方法 采用病例对照研究,纳入116例产后抑郁症患者和395例对照,比较两组产妇产褥期感染率、感染部位及病原菌感染情况.结果 抑郁组产褥期感染率为20.7％,显著高于对照组(7.3％),OR值为3.29(95％ CI为1.87～5.79)...     

CTA显示胃周动脉及其变异在胃癌术前评价中的应用价值

目的探讨CT血管造影(CT angiography,CTA)显示胃周动脉及其变异在胃癌术前评估中的应用价值。资料与方法对连续67例经胃镜活检证实或高度怀疑胃癌的患者,采用多层螺旋CT在患者服用产气粉和水(500～1000 ml)充分扩张胃后经静脉用压力注射器以3～4 ml/s的流率团注碘对比剂100 ml(碘必乐或碘普罗胺370),采用Bolus-Tracking追踪触发技术行三期增强扫描。在CT工作站采用容积再现(VR)和最大密度投影(MIP)重组CTA以显示胃周血管影像,重点分析变异动脉对手术方案的抉择与实施的影响,并与手术发现比较。结果 67例胃左动脉(LGA)均被显示,胃右动脉(RGA)的显示率为52.24%(35/67)。CTA显示12例胃周动脉变异。其中61例实施手术治疗,CTA获得的血管解剖信息与手术所见取得较好的一致性。结论 CTA能显示胃周主要动脉及其解剖变异,特别是与胃癌原发灶解剖密切相关并对手术实施有影响的血管,附加的CTA可以提高胃癌CT检查的成本效益比。     

DTI纤维追踪法定量分析90名正常国人脑白质老化

目的 采用DTI纤维追踪法定量比较不同年龄组正常自愿者椎体束从大脑脚到中央前回部分(PRPT)FA值的差别及其意义.方法 将90名正常志愿者按年龄分为6组,进行基于纤维追踪的定量DTI研究,图像标准化后分析各组PRPT的FA值与年龄组老化的关系.结果 各年龄组双侧PRPT的FA值分布相似,最低点在放射冠处,最高峰为内囊后肢;各段FA值随年龄增长呈下降趋势,表明这些部位的纤维随年龄增长发生了老化,其中以额叶老化最为明显;并发现额叶及大脑脚白质老化过程中存在突然变化.结论 DTI可以作为评价脑组织细微结构变化和老化过程的敏感工具;额叶及大脑脚白质老化过程中存在突变是否为脑生理上老化的标志有待进一步研究.     

急性脑静脉窦血栓及其脑损伤的MRI技术探讨

目的：探讨不同MRI成像序列在急性脑静脉窦血栓形成及其脑损害诊断中的价值。方法：回顾性分析本院经临床和影像学证实的11例急性脑静脉窦血栓形成患者的影像学资料,比较常规T1WI、T2WI、T2＊WI、DWI、CE-T1WI和MRV对检出急性脑静脉窦闭塞及其继发脑损伤的优缺点,其中6例测量脑损害区的ADC值。结果：11例中平扫T1WI能明确显示静脉窦血栓9例,T2WI显示8例,CE-T1WI和CE-MRV对11例均能明确显示;CE-MRV还能更好地显示静脉窦的回流静脉和侧支血管。MRI检查发现继发性脑损伤8例,T2WI对缺血水肿的显示优于其它序列,对脑出血的检出以T2＊WI较好。ADC值与脑损伤的面积和位置有关。结论：MRI对脑静脉窦血栓及其相应脑损害的诊断具有重要作用,联合应用多种MRI检查方法能更可靠地提供脑静脉窦血栓的诊断信息及其脑损害的程度。     

miRNA-206及miRNA-26a在周围神经卡压后骨骼肌纤维化过程中的表达

目的 探讨大鼠坐骨神经慢性卡压损伤后其支配的腓肠肌组织内miRNA-206、miRNA-26a的表达变化及其意义。方法 2020年5月至2020年7月，选取50只成年雄性SD大鼠；大鼠右侧后腿采用Mackinnon建立的坐骨神经卡压模型方法对坐骨神经行硅胶管卡压术，作为手术组（实验组）；对大鼠左侧后腿仅分离暴露坐骨神经，作为假手术组（对照组）。于卡压术后2、4、6、8、10周时间点随机取大鼠10只，取其双后腿腓肠肌，观察腓肠肌组织萎缩及纤维化程度，并行组织形态学观察，RT-PCR定量测定miRNA-206、miRNA-26a、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）的表达。结果 坐骨神经慢性卡压损伤后，手术组与假手术组相比，腓肠肌组织湿重明显减轻，肌肉横截面积变小，肌肉组织胶原纤维增生，miRNA-206及miRNA-26a的表达先降低后升高，4周时表达最低，后表达逐渐升高；TGF-β及COL-Ⅰ含量升高，两组比较差异统计学意义（P＜0.05）。结论 周围神经慢性卡压损伤可致支配骨骼肌发生纤维化病变，TGF-β及COL-Ⅰ表达升高，miRNA-206及miRNA-26a在此过程中表达先降低后升高，提示miRNA-206及miRNA-26a在周围神经卡压致骨骼肌萎缩及纤维化过程中起到重要作用。     

米尔贝霉素A3和A4高产菌的理性选育

目的 应用理性选育理论，结合各种诱变手段，获得米尔贝霉素A4(1)，A3(2)的高产菌种。方法 以吸水链霉菌CGMCC7677为出发菌，通过紫外、甲基磺酸乙酯与常压室温等离子体等单独诱变或组合诱变，结合含甘氨酸、利福平、乙酸钠和3-溴丙酮酸的抗性平板进行筛选。结果 通过多轮的筛选，得到米尔贝霉素突变株75-22和95-23。在不改变培养基组成和培养条件的情况下，75-22在50L发酵罐中培养360h，米尔贝霉素A4(1)的生产能力提高了5倍，米尔贝霉素A4(1)的含量也从70%提高至80%以上。95-23在50L发酵罐中培养360h，米尔贝霉素A3(2)的生产能力提高了10倍，米尔贝霉素A3(2)的含量提高至70%以上。结论 主产单一组分菌种的获得，可进一步扩大米尔贝霉素的应用研究范围，也为米尔贝霉素的产业化提供了优良的菌种。     

睾丸孤核受体4（TR4）促进巨噬细胞向前列腺癌浸润

目的：研究前列腺癌TR4水平对巨噬细胞浸润的影响。方法：用transwell体系进行巨噬细胞THP-1迁移实验,在人体组织中研究睾丸孤核受体4(Testicular orphan receptor 4,TR4)水平和巨噬细胞标志物CD36的关系。结果：过表达TR4促进了巨噬细胞向前列腺的迁移;敲低TR4抑制了巨噬细胞向前列腺癌的迁移;人体前列腺癌组织标本中TR4较高的患者,CD36表达较高。结论：前列腺癌的TR4可能促进了巨噬细胞浸润。     

应用Gibson Assembly法快速构建人组蛋白甲基化转移酶启动子荧光素酶报告载体

目的：快速构建人组蛋白甲基转移酶(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)启动子荧光素酶报告载体并验证其活性。方法：因EZH2启动子富含GC,故应用Gibson Assembly方法设计分两段扩增,然后将片段一步法连入pGL3-Basic质粒,构建荧光素酶报告载体,进行酶切鉴定。与pRL-TK内参照质粒共转染C4-2细胞,双荧光素酶分析法检测启动子的活性。结果：经酶切鉴定证实成功构建了EZH2启动子报告载体,双荧光索酶报告基因检测结果显示构建的报告载体具有启动子活性。结论：快速成功构建了具有启动子活性的EZH2启动子荧光素酶报告载体,为进一步研究前列腺癌中EZH2表达调控机制提供必要的实验材料。