炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析

目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的DNA,将目的基因插入p ET-28a(+)表达载体中,利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌,IPTG诱导重组蛋白表达,通过His标签亲和层析柱获得目的蛋白,Western blot和ELISA法检测蛋白抗原性,Biacore T-100测定重组蛋白与保护性抗原PA结合的亲和力,细胞毒性实验检测其生物学活性。结果:成功构建原核表达载体p ET-28a/LF253,诱导获得重组蛋白s LF253的表达。Western blot和ELISA检测结果证实,该重组蛋白具有良好抗原特异性;细胞毒实验结果表明,重组蛋白可在体内外中和致死毒素引起的生物学效应。结论:本研究制备的融合蛋白s LF253能够与保护性抗原PA结合,可竞争性抑制LF全分子蛋白与PA的聚合,阻断炭疽毒素的致死作用,为今后炭疽疫苗等药物的研发奠定了基础。     

EB病毒潜伏膜蛋白LMP2A对人鼻咽癌细胞增殖与迁移特性的影响

目的:制备重组慢病毒载体pLMP2A,并检测其在人鼻咽癌细胞CNE1的表达情况及潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)对人鼻咽癌细胞CNE1增殖?迁移?侵袭的影响?方法:利用DNA重组技术将EB病毒编码的LMP2A基因克隆到慢病毒表达载体plv-GFP中,通过酶切?测序验证,将重组慢病毒载体pLMP2A与包装质粒pdelta-8.91?pVSVG共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-LMP2A,并感染人鼻咽癌细胞CNE1,经单克隆筛选后,用RT-PCR?免疫荧光和Western blot检测LMP2A在人鼻咽癌细胞CNE1的表达,CCK8法检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1增殖的影响,划痕实验?Transwell侵袭实验检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1迁移和侵袭的影响?结果:酶切及测序结果表明,成功制备了重组慢病毒载体pLMP2A;RT-PCR?Western blot?免疫荧光结果显示筛选出的细胞克隆能高表达EBV-LMP2A,CCK8结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1增殖,划痕实验结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1迁移,Transwell侵袭实验结果显示LMP2A能提高人鼻咽癌细胞CNE1侵袭能力?结论:成功制备了慢病毒载体pLMP2A,包装的慢病毒能够成功感染人鼻咽癌细胞系CNE1,使LMP2A基因得以高表达,并发现LMP2A能够促进人鼻咽癌细胞株CNE1增殖?迁移?侵袭,为进一步探讨EB病毒在鼻咽癌中的发病机制及基因治疗奠定了基础?     

人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

目的:构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻?重链表达载体,在293Free style 细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性?方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体pFUSE-CHIg-hG1和pFUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style 细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化?应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)?Western blot?免疫共沉淀?质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响?结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%?结论:重组全人源抗TLR4 IgG保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值?     

学科融合背景下医学生理学课程的设计与实施?

相近学科的课程融合是医学院校在教学改革中面临的一项重要内容,首都医科大学生理学与病理生理学在师资及科研融合的基础上,开展了生理学与病理生理学课程的实质融合。通过调研及专家论证,将生理学与病理生理学的融合课程定名为医学生理学,在确定了新的教学大纲后,编写了相应的教材并制定了教学实施规划。     

合肥首例恙虫病病人血中东方体56kDa外膜蛋白部分基因的扩增及进化分析

采用恙虫病胶体金快速诊断试剂对安徽省合肥市一例不明原因发热病人血清进行检测,从该病人血块中提取DNA为模板,用恙虫病东方体特异性引物,PCR扩增出56 kDa外膜蛋白部分基因,将扩增目的片段克隆至T载体进行测序并进行基因进化分析.结果显示,该病人血清中抗恙虫病东方体总抗体、抗东方体IgG及抗东方体IgM阳性;患者给予强力霉素治疗后迅速退热.采用PCR从病人血标本中扩增出1 320 bp东方体56 kDa外膜蛋白基因片段,将基因片段测序结果在NCBI上做BLAST比对,显示该基因序列与昆明株和内蒙古株同源基因序列完全一致;进化树分析显示该序列与标准株Kuroki位于同一个分支.研究确认该发热病例为合肥市报告的首例恙虫病,其感染的恙虫病东方体为Kuroki型,推测合肥市可能为恙虫病新疫区.     

Trop2在舌鳞癌中的表达及其意义

目的:观察并分析Trop2在口腔舌鳞癌(oral tongue squamous cell carcinoma,OTSCC)中的表达情况及其临床意义,探讨Trop2作为OTSCC潜在治疗靶点的可能性.方法:用实时定量RT-PCR检测15例OTSCC组织及癌旁舌组织中Trop2 mRNA的表达,用前期自制的全人源抗Tro...     

新型冠状病毒实验室检测方法及应用

随着新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus?2,SRAS?CoV?2）分离培养与基因组测序的完成,新型冠状病毒肺炎（corona virus disease,COVID?19）的确诊主要依靠RT?PCR 法检测SARS?CoV?2 核酸基因,重组酶介导等温核酸扩增技术（recombinase aided amplification,RAA）等新型常温核酸扩增技术也得到进一步应用。免疫学诊断包括胶体金和ELISA IgM 和IgG 抗体检测技术,主要用于人群的筛查和辅助诊断。基于CRISPR技术的新型诊断技术等也在进一步完善过程中。     

DWI成像在宫颈癌分期中的应用

目的 研究宫颈癌弥散加权成像(DWI)表现,评价DWI在宫颈癌分期中的价值.方法 搜集确诊的宫颈癌66例,均行常规MRI及DWI检查,MRI检查前均未进行任何治疗.观察原发肿瘤的位置、信号特征及侵犯范围,进行分期,同时测量癌灶ADC值.将MRI分期、临床分期分别与病理分期、宫颈癌ADC值与FIGO分期、Ⅰ～Ⅱa期与Ⅱb～Ⅳ期宫颈癌ADC值进行对比.结果 (1)临床分期总准确度为66.7%,对浸润性癌(Ⅱb及Ⅱb以上)诊断的总准确度为71.4%,灵敏度为72.2%,特异性为80.0%;MRI分期总准确度为78.8%,对浸润性癌(Ⅱb及Ⅱb以上)诊断的总准确度为90.9 %,灵敏度为84.4 %,特异性为93.3 %.(2)宫颈癌ADC值与FIGO分期无相关性(r=0.144,P=0.247).宫颈癌Ⅰ～Ⅱa与Ⅱb～Ⅳ两组分期的ADC值差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DWI在宫颈癌MRI分期中具有重要作用,尤其在浸润性癌与非浸润性癌的判定方面具有优势,MRI分期优于临床分期.     

鼻咽癌动态增强MRI参数与临床病理特征的关系

目的 探讨鼻咽癌动态增强MRI（DCE-MRI）相关参数与其临床病理特征之间的关系。方法 对102例经病理确诊的鼻咽癌初诊患者行DCE-MRI,获取ROI的DCE-MRI参数,观察其曲线特征,并分析DCE-MRI相关参数与临床病理特征的关系。结果 不同性别、年龄鼻咽癌患者的曲线最大上升斜率（MS）差异无统计学意义（P均>0.05）,而不同T分期、N分期及临床分期MS差异有统计意义（P均<0.05）;达峰时间（TTP）、曲线下面积（AUC）差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 鼻咽癌DCE-MRI相关参数与病变进展密切相关;DCE-MRI技术对辅助诊断鼻咽癌及准确分期有一定价值。