大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定

目的:探索纯度较高、相对经济简便的大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法。方法:取1～10 d SD大鼠脑皮质经胰蛋白酶消化后,通过不同孔径的筛网过滤,再用胶原酶2次消化获得的微血管内皮细胞进行培养,采用相差显微镜形态学观察及Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定。结果:1～2 d细胞呈区域性单层贴壁生长,7～9 d呈典型的铺路卵石样征象,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性,可见细胞的胞浆及核周呈棕黄色,胞核呈阴性,阳性细胞占绝大部分。结论:采用2次消化、2次过滤技术可以成功分离培养出较理想的大鼠脑微血管内皮细胞。     

双根清脑颗粒对血管性痴呆模型大鼠BrdU阳性细胞增殖的影响

目的:探讨双根清脑颗粒治疗血管性痴呆的机理。方法:采用梅氏法复制VD大鼠模型。以双根清脑颗粒干预,免疫组化方法检测模型大鼠脑切片BrdU阳性细胞;Moriss水迷宫观察隐匿平台获得时间与大鼠空间搜索时间。结果:Moriss水迷宫实验,双根清脑颗粒组与模型组相比,隐匿平台获得时间明显缩短(P<0.05),大鼠空间搜索次数亦明显增多(P<0.05)。免疫组化检测显示:双根清脑颗粒各组大鼠BrdU阳性细胞表达明显高于模型组(P<0.05)。结论:双根清脑颗粒可改善VD模型大鼠的学习与记忆的功能,其机制可能与促进VD模型大鼠新生神经元增殖有关。     

双根清脑颗粒对血管性痴呆模型大鼠神经干细胞增殖迁移的影响

目的: 观察双根清脑颗粒对血管性痴呆(VD)模型大鼠神经干细胞(NSCs)增殖、迁移的影响,探讨双根清脑颗粒治疗VD的机理。 方法: SPF级SD大鼠42只,随机分为双根清脑颗粒高、中、低剂量组,脑复康组、模型组、假手术组、正常组等7组,每组大鼠6只。采用注入同种血栓栓子方法造成VD模型,中药高、中、低剂量组分别以双根清脑颗粒36,12,4 g ·kg^-1 ig,脑复康组以0.108 g ·kg^-1 ig,给药容积均为1.5 mL ·kg^-1,模型组、假手术组和正常组以等量生理盐水ig。免疫组化法分别标记5-溴脱氧尿苷(BrdU)阳性细胞和微管相关蛋白(DCX)阳性细胞,显微镜下观察BrdU与DCX阳性细胞的表达。 结果: 双根清脑颗粒中、低剂量组、脑复康组大鼠皮质区与SGZ区BrdU阳性细胞数均明显增加( P <0.05);双根清脑颗粒中、低剂量组SGZ区BrdU阳性细胞比脑复康组增加更为显著( P <0.01)。假手术组以及双根清脑颗粒中、低剂量组大鼠SGZ区DCX阳性细胞数明显增加( P <0.01),高剂量组、脑复康组大鼠SGZ区DCX阳性细胞数亦显著增加( P <0.05);双根清脑颗粒中、低剂量组大鼠SGZ区DCX阳性细胞数比脑复康组明显增加( P <0.01)。 结论: 双根清脑颗粒可促进VD模型大鼠脑内NSCs的增殖与迁移。     

论中医理论与圆运动规律

中医学通过其内在的理论体系阐述了人体生命活动的规律,描绘了生命图像,阐述了生命本质。通过中医的阴阳学说、五行学说、五脏气机升降运动、经络循行等方面的运动规律-圆运动来描述人的生命活动本质。同时运用耗散结构论加以印证。     

双根清脑煎剂对血管性痴呆大鼠模型行为学的影响

背景：血管性痴呆是指由缺血性或出血性中风或缺血缺氧性脑损害导致的以认知损害为特征的综合征，中医学将其归属于“愚痴”、“痴呆”、“神呆”、“善忘”等范畴。由于痴呆造成患者记忆、认知等方面的障碍，严重影响老年人的身心健康和生活质量。 目的：观察双根清脑煎剂对血管性痴呆大鼠学习、记忆能力及空间分辨能力的影响。 设计：以实验动物为观察对象的随机对照观察。 单位：南京中医药大学基础医学院中医基础理论教研室。 材料：实验于2004-01／02在南京中医药大学中医基础理论教研室藏象实验室完成。选择雄性SD大鼠40只。随机分为假手术组、模型组、模型加中药组及模型加西药组，每组10只。所有大鼠实验前适应性喂养一周．实验前和实验时自由饮水和摄食。药品与试剂为双根清脑煎剂和尼莫通片，主要实验仪器为DTF-2型跳台仪和SMG-2型水迷宫实验装置。 方法：在无菌状态下，取大鼠左心室内血，37℃温箱内干燥，研碎后200μm筛孔过筛制成栓子，应用时按栓于1mg加生理盐水0．3mL配制，摇匀成混悬液。以短暂夹闭颈总动脉，并从颈外动脉逆行插管注入含有栓子的混悬液进入颅内制作多发性脑梗塞模型。假手术组中空细管只插到颈总动脉分叉处，不注入任何液体。实验前模型组和假手术组给予止常饮料喂养，其他各组除正常饲料喂养外，模型加中药组同时给予双根清脑煎剂4g／（kg&;#183;d），西药组给予尼莫通2mg／（kg&;#183;d），每日灌服1次，连续15d为1个疗程。各组大鼠均于常规喂养及给药后第9天进行被动回避性跳台实验，记录大鼠受到电刺激后跳上橡皮垫的反应时间及3min内跳下平台遭电击的错误次数，作为学习指标。予第10天再次测试，先将大鼠置于箱内适应3min，再将其置于橡皮垫上，记录其第1次跳下橡皮垫的潜伏期，并记录3min内跳下橡皮垫次数，作为记忆指标。各组大鼠于第11天进行水迷宫空间分辨能力实验，记录大鼠进入盲端的错误次数及登陆安全台所需的时间。每次游完后休息40s，每只大鼠每天训练10次，连续3d。 主要观察指标：被动回避性跳台实验及水迷宫空间分辨能力实验结果。结果：除假手术组手术后活动正常外，其余各组在手术过程中各死亡大鼠一只，共37只大鼠进入结果分析。①被动回避性跳台实验结果：与模型组相比，在第9天的跳台实验中。假手术组，模型加中药组，模型加西药组的反应时间明显缩短（P〈0．01-0．05），假手术组，模型加中药组的3min内错误次数明显减少（P〈0.05）；第10天的吏验中，似手术组的潜伏期较模型组明显延长（P〈0．05），假手术组，模型加中药组，模模型加西药组3min内错误次数较模型组明显减少P〈0.05）。②水迷宫空间分辨能力实验结果：与模型组相比，假手术组、模型加中药组、模型加西药组3天水迷宫实验进入盲端的错误数明显减少（P〈0．001,P〈0.05），模型加中药组进入盲端的错误数较模型加西药组明显减少（P〈0．05）．第2天及第3天的水迷宫实验中，假手术组、模型加中药组、模型加西药组到达终点的时间明显短于模型组（P〈0．05）。 结论：双根清脑煎剂能显著改善血管性痴呆大鼠模型的学习记忆能力，且在改善大鼠空间分辨反应能力方面较尼莫通更为有效。     

黄芪升麻柴胡治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的量效关系及免疫学机制研究

目的：探讨益气升提法治疗实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠中黄芪的最佳剂量,以及免疫机制。方法：采用Rα97.116免疫Lewis大鼠构建EAMG,随机分为佐剂对照组、模型对照组、益气升提黄芪低剂量组、益气升提黄芪中剂量组、益气升提黄芪高剂量组。观察大鼠抓力、体质量、低频重复电刺激（RNS）衰减率,检测血清AChR-Ab、IFN-γ、TGF-β、IL-6、IL-17含量及外周血淋巴细胞CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg比例,将EAMG大鼠临床表现与实验室检测指标综合汇总,进行综合评分,评价各组治疗效果。结果：治疗后,低中高三剂量益气升提组大鼠EAMG综合评分分别为82,58,88分（满分100分）,各组大鼠体质量回升,抓力回升,RNS衰减率显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-6、IL-17含量显著下降,TGF-β含量显著升高（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,外周血淋巴细胞CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg比例显著升高（P<0.05）。结论：益气升提法对EAMG大鼠具有明确治疗效果,黄芪高剂量组疗效最优,不同剂量黄芪配伍升麻柴胡对MG细胞因子网络的影响各不相同。益气升提法治疗EAMG的机制可能是通过升高TGF-β含量,降低IFN-γ、IL-6、IL-17含量,提高CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg比例,降低血清AChR-Ab含量,从而减少神经肌肉接头处AchR损害。     

《伤寒论》药后反应探析

将《伤寒论》中有关药后反应的主要内容归纳为药中病机的反应和失治误治的反应两大部分。指出仲景分析药后反应的方法是熟番药性，具体分析，动态观察。说明掌握药后反应的临床意义在于能够确定病位，协助辨证，指导用药，判断预后，对临床临床疗效有重要的指导作用。     

加味补阳还五汤对氧化型低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:观察加味补阳还五汤(BHT)含药血清和含药血浆对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤血管内皮细胞(VEC)的保护作用及机制,同时比较加味BHT含药血清和含药血浆对VEC生成影响的差异。方法:制备加味BHT含药血清和含药血浆,体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),采用ox-LDL造模,通过噻唑蓝(MTT)法观察细胞活力和Hoechst33258染色法、流式细胞术观察细胞凋亡率,并通过测定一氧化氮(NO),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力,探讨加味BHT含药血清和含药血浆对ox-LDL损伤VEC的保护作用及含药血清和含药血浆之间的差异。结果:与空白组比较,模型组细胞死亡和凋亡率明显升高(P0.05),和模型组比较,加味BHT含药血清组和含药血浆组能显著降低ox-LDL造成的HUVECs的凋亡和死亡率(P0.05),细胞活性显著增强(P0.05),NO含量,SOD和GPx活力显著提高,MDA含量均显著下降(P0.05)。此外,含药血清组与含药血浆组比较细胞凋亡和死亡率更低(P0.05),含药血浆组与含药血清组比较产生NO含量明显增加(P0.05)。结论:加味BHT含药血清和含药血浆对于oxLDL损伤的VEC具有一定保护作用,其机制可能与改善内皮细胞功能、抗氧化损伤、抑制细胞凋亡有关。在一定条件下对于加味BHT含药血浆保护VEC的作用强于含药血清。     

凤凰涅槃——从耗散结构理论探讨中医发展缓慢的机制

本文从耗散结构理论结合中医发展史探讨了中医发展缓慢的机制,认为中医发展是以哲学的发展为动力,但是中医理论中医临床哲学三者之间未能形成加速循环的机制。中医振兴必须以实验作为动力,实现中医理论中医临床实验三者之间的加速循环。     

《内经》卫气理论及其临床意义

在总结历代研究《内经》卫气运行的基础上，对卫气的运行加以诠释。认为卫气初出于上焦肺，通过肺气的布散与营气同行于经脉内外，周于全身。卫气主要运行于经脉之外，白天主要散行于体表的阳经，夜间主要运行于体内的阴经；卫气由阳入阴，需依靠肾气的摄纳。行于脉内的卫气，按营气的运行规律依次循行于十二经脉之中。对卫气运行的临床意义进行了探讨。