啤酒泡沫阳性蛋白的电泳分离及其与酵母蛋白酶A的关系

通过对SDS-PAGE条件及染色方法的比较及优化，首先确立了直接进行啤酒泡沫蛋白的电泳分离条件及灵敏的鉴定方法。本研究简化了对啤酒泡沫样品的纯化和浓缩等处理过程，直接采用电泳及银染即可对啤酒泡沫蛋白进行有效分离。通过酵母蛋白酶A对啤酒泡沫蛋白的水解作用及电泳检测发现，酵母蛋白酶A对啤酒泡沫阳性蛋白中的脂肪转运蛋白有水解作用，这一结果从根本上解释了酵母蛋白酶A对纯生啤酒泡沫产生负面影响的原因。     

可德兰多糖的分离纯化和化学结构分析

用酸碱法从产碱杆菌突变株C125的发酵液中提取Curdlan粗多糖样品CD-1,经Sevage法脱蛋白、纤维素柱层析脱色后,用Sephadex G-100凝胶层析柱分离纯化得多糖CD-2.紫外分光法及Sephadex G-200凝胶柱层析法检测CD-2为均一多糖,Sephadex G-200柱层析测得CD-2的分子量为65300Da,完全酸水解后纸层析检测CD-2的单糖组成中仅有葡萄糖,分析CD-2的红外光谱、核磁共振谱得知CD-2多糖的化学结构是以β-(1,3)糖苷键连接而成的无分枝的葡聚糖.     

人β防御素3基因的合成及其克隆

根据已知人β防御素3的成熟区氨基酸序列和酵母密码子的偏好，人工合成了4对末端具粘合位点的寡聚核苷酸序列，经连接、PCR扩增后得到了156bp的防御素编码序列，插入到pPIC9K载体构建成重组表达载体pHC9K-hBD3。     

用Taq酶反转录、扩增及克隆中蜂溶血肽成熟区cDNA的研究

蜂毒的药用价值一直受到人们的关注.溶血肽(melittin)是蜂毒的一种主要成分,分子量约2.6 kD.陈仲兵等和Vlasak等已克隆到意蜂(Apismellifera)melittin的cDNA,王关林等在大肠杆菌中对意蜂melittin进行了融合表达.但对中蜂(Apis cerana)melittin基因的研究尚未见报道.近年已有研究发现TaqDNA聚合酶具逆转录活性.本研究所用的RNA抽提试剂盒能使mRNA在高温下保持稳定,故可利用TaqDNA聚合酶对中蜂melittin的mRNA在高温下进行RT-PCR,获得中蜂melittin的成熟区双链cDNA,克隆、测序后与已发表的意蜂相应序列进行比较,为研究中蜂melittin及用Taq DNA聚合酶直接进行RT-PCR提供基础资料.     

热稳定性β-葡聚糖酶菌种选育及产酶特性

从土壤中筛选到一株热稳定性β－1，3－1，4－葡聚糖产生菌ZJF－1，发酵60h酶活性为64U／mL，经鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)。紫外线和硫酸二己酯复合诱变，获得的突变株ZJF－1A5发酵60h酶活性达154．7U／mL，是出发菌株酶活性的2．42倍，对B.subtilis ZJF-1A5产酶特性的研究发现：大麦粉，糊精，可溶性淀粉等糖有利于β－1，3－1，4－葡聚糖酶的产生，葡萄糖，麦芽糖等单糖和双糖不利于菌体生长和产酶。B.subtilis ZJF-1A5 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的产生与菌体生长部分相关，在细胞进入对数生长后期至稳定期，酶活性显著增加，且β－葡聚糖酶活性与菌体生物量密切相关，B.subtilis ZJF-1A5 α－淀粉酶的产生也与生长部分相关，细胞进入对数生长期，α－淀粉酶开始大量产生，而中性蛋白酶的产生与菌体生长同步。     

铁夹式捕鼠器捕鼠技巧

药物牙膏的主要成分与普通牙膏基本相同，由摩擦剂、胶黏剂、洁净剂和芳香剂等组成，不同之处在于其中加入极少量的微量元素或化学抑菌剂、杀菌剂或中草药。     

微孔滤膜再生效果的研究

采用德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司０．６５μｍ孔径的醋酸纤维素微孔滤膜为试验材料，用热水浸泡，酸、碱和表面活性剂对被堵的微孔滤膜进行再生处理，并测试其纯水通量和泡点压力值，同时借助扫描电镜对微孔滤膜再生前后形态结构的观察，结果表明：在５０℃条件下，采用０．５％盐酸或０．０４％ＳＤＳ处理都可获得较好的效果，而ＮａＯＨ处理则会对微孔滤膜造成一定程度的损伤     

仙居鸡抑制素/活化素βB亚基成熟区cDNA的克隆及序列分析

根据发表的哺乳类抑制素 /活化素 βB亚基 c DNA序列设计引物 ,运用 RT- PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素 /活化素βB亚基成熟区序列 ,并进行了克隆和测序。结果显示 ,鸡成熟βB亚基是由 115个氨基酸(aa)残基组成的蛋白质 ,具有 9个半胱氨酸残基 ,与发表的哺乳类相应序列对比 ,其核苷酸序列的同源性为 79.7%～82 .9%,其编码氨基酸序列的同源性为 95 .7%～ 98.3%。 βB亚基成熟区半胱氨酸残基的数目和位置与发表的哺乳类相同。说明该亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性 ,提示抑制素 /活化素 βB亚基可能具重要的生理功能。     

用蜂毒溶血肽和表皮生长因子构建膜毒性免疫毒素的研究

表皮生长因子受体由于在许多种肿瘤细胞表面过度表达而成为特异杀伤肿瘤细胞的理想靶位。正电性抗菌肽有其独特的膜毒性细胞毒机制。本研究以小鼠表皮生长因子为导向部分，以蜂毒溶血肽为毒性部分，构建特异杀伤肿瘤细胞的膜毒性免疫毒素---“MEGFMEL”嵌合蛋白。该嵌合蛋白以大肠杆菌BL21为表达宿主，以pET30a为表达载体，采用低温诱导表达和无破胞程序的冻融法进行纯化，最终浓度为63.45μg/mL、纯度为68%。体外活性检测表明MEGFMEL”嵌合蛋白对表面过度表达EGFR的鳞状上皮癌A431细胞表现出显著杀伤力，其LD50值为52.6μg/mL。本研究结果显示以正电性抗菌肽为毒性部分构建针对表皮生长因子受体的新型膜毒性IT是可行的。